首页 > 文献资料
-
齿槽裂修复方法的研究进展
目的 探讨齿槽裂修复治疗的目的、方法以及治疗时机的选择.方法 查阅1950年至2006年有关齿槽裂修复的文献,归纳文献中报道的不同方法,并评价其各自的优缺点.结果 齿槽裂修复的主要目的:关闭口鼻瘘;建立稳定、连续的上颌骨牙弓;为牙齿萌出提供基础;为上唇和鼻底提供稳定支架.主要治疗方法:植骨术;牵引成骨技术;组织工程骨和生长因子应用;引导骨再生技术.患者佳的手术治疗时机是9～11岁时混合牙列期.结论 在9～11岁混合牙列期手术,以髂骨松质骨为移植材料被认为是修复齿槽裂的主要手段.牵引成骨技术、组织工程技术和引导骨再生技术,将是齿槽裂修复的新方向.
-
组织工程骨应用于眼眶骨折修复的研究进展
眼眶骨折常常形成骨质缺损和眼球内陷，既往通过植入眶壁修复材料修复眶壁骨折及眶内组织填充，存在各种缺点。随着组织工程技术的发展，通过组织工程技术制造自体组织来源的组织工程骨来修复骨折的骨质缺损逐渐成为研究的热点。眼眶骨折作为颜面骨骨折的一部分，同样可以利用组织工程骨来进行修复，现就组织工程骨应用于眼眶骨折修复的研究进展做一综述。
-
腺病毒介导的BMP-2基因转染骨髓基质干细胞及种植异种骨支架的体外观察
目的用人骨形态发生蛋白-2腺病毒表达载体(Ad-BMP-2)转染的兔骨髓基质干细胞(BMSC),种植BCB(去抗原牛松质骨)支架体外构建组织工程骨.方法蛋白印迹法检测转染后细胞BMP-2的表达,ALP活性检测分析基因转染对细胞分化的影响.然后将转染后细胞接种到BCB支架上,扫描电镜观察细胞贴附、生长状况.结果转染后,BMSC表达BMP-2,ALP活性明显增高.扫描电镜见转染细胞分布均匀,伸展良好.结论Ad-BMP-2可高效转染BMSC,且促进细胞分化.转染后细胞在BCB上生长良好,BMP-2基因治疗的组织工程骨构建成功.
-
rhBMP2/TGF-β对β-磷酸三钙与骨髓基质细胞自体皮下成骨能力的影响
目的:观察rhBMP2/TGF-β对β-磷酸三钙与骨髓基质细胞在自体皮下成骨能力的影响.方法:应用矿化条件培养液体外培养成年新西兰兔的骨髓基质细胞,收集细胞并以5×106·mL-1浓度分成4组,A组加入rhBMP2(15 μg)/TGF-β(30 ng),B组加入rhBMP2(15 μg),C组不加因子作为对照,然后将细胞接种在β-磷酸三钙上,体外培养3 d,D组细胞不接种材料上,继续体外培养.组织化学方法检测碱性磷酸酶.将复合物埋植于新西兰兔自体皮下.5周后常规HE染色、免疫组织化学染色并进行图像分析,观察Ⅰ型胶原、骨形成蛋白合成情况.结果:A、B组的碱性磷酸酶平均A值显著高于C、D组(P<0.01);复合物植入皮下5周时HE染色见各组均有条索状骨基质形成,A、B组Ⅰ型胶原平均灰度值明显低于C组(P<0.01),各组免疫组织化学检测及图像分析显示骨形成蛋白的表达差异无显著性(P>0.05).结论:β-磷酸三钙与骨髓基质细胞在自体皮下能够形成骨组织,rhBMP2/TGF-β较rhBMP2有更强的促进骨形成作用.
-
构建大段组织工程骨的新型生物反应器的设计与制造
目的:设计、制造一种新的灌注式生物反应器,专门用于高效地构建大体积、β-磷酸三钙组织工程骨.方法:在普通模式灌注生物反应器的灌流室内生成间断性低压环境(-0.01 mpa,0.5 Hz),用材料色素颗粒洗脱实验进行验证后,将复合兔骨髓间充质干细胞的大段、管状β-磷酸三钙材料分别在静态、反应器内常压灌注和间断低压灌注三种环境下培养4周.期间收集培养液检测葡萄糖日耗量、细胞活力(MTT比色法)、碱性磷酸酶比活性、骨桥蛋白水平,并进行硬组织切片检查.结果:色素颗粒洗脱实验证明,间断性低压可以改善低流量液流在材料内的分布;在培养2周和4周时,负压灌注组日均葡萄糖消耗量和细胞活力均显著高于常压灌注组:(t=20.254 P＜0.05,t=64.794 P＜0.05)及(t=17.586 P＜0.05,t=7.583 P＜0.05);碱性磷酸酶(ALP)比活性测定和骨桥蛋白水平( OPN)反映间断低压灌注组中骨髓间充质细胞向成骨细胞分化效率更高,但高峰相晚于常压灌注组和静态培养组;在间断低压灌注组中材料深部的占孔率高,并且分布更均匀.结论:此新型灌注式生物反应器适用于构建大体积、特殊构型组织工程骨;其高效的促进细胞增殖效应可减少初始复合的种子细胞数量,缩短构建周期.
-
不同来源成骨细胞构建组织工程骨之分子生物学评价
目的:探讨骨膜来源成骨细胞(POB)和盖骨来源成骨细胞(COB)在构建组织工程骨中的黏附、增殖和分化能力.方法:研究分别选用人胚POB和COB为种子细胞,接种于生物衍生骨上,经过10天的体外培养,提取总RNA,经过逆转录成cDNA,采用实时定量PCR对目的基因成骨细胞特异转录因子(Cbfa1)、成骨细胞特异基因(osterix)、Ⅰ型胶原(ColI)、骨钙素(osteocalcin,OC)以及整合素Integfina5β1读取扩增循环数(cycle threshold,Ct).结果:在组织工程骨中,POB和COB对ColI、OC、Cbfal以及osterix的表达没有统计学意义的差别,Integrinα5β1的表达可见POB明显高于COB.结论:POB与COB在与生物衍生材料接触后,仍可保持终末的分化性状,三维孔隙结构促进成骨细胞迅速而活跃的完成增殖期.POB对生物衍生骨的粘附能力优于COB.
-
兔骨髓间充质干细胞自体皮下移植的成骨研究
目的 探讨以兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)为种子细胞,10％珊瑚羟基磷灰石(CHA)为支架材料,构建组织工程骨的可行性.方法 取兔骨髓中的BMSCs,成骨细胞诱导,以5 × 107/ml的细胞密度接种于10％ CHA,在联合培养1、3、7天,扫描电镜检查.联合培养7天的10％ CHA+ BMSCs细胞复合物,埋植入自体皮下,以单纯10％ CHA为对照(n＝4),分别观察6、12周取出做大体、组织学观察.结果 BMSCs与10％ CHA联合培养1、3、7天,扫描电镜显示细胞能在10％ CHA很好地黏附生长.皮下回植6周,10％ CHA/BMSCs细胞复合物组可见大量骨组织形成,单纯10％ CHA组未见骨组织生成；12周时,细胞组骨组织较6周时明显增多,单纯10％ CHA组未见骨组织生成.
关键词： 骨髓间充质干细胞 10％珊瑚羟基磷灰石 自体移植 组织工程骨 -
新西兰大白兔组织工程骨的构建及体内异位成骨效果
目的:探讨新西兰大白兔组织工程骨股骨旁异位成骨(ectopic bone formation)的效果.方法:选取新西兰大白兔骨髓基质干细胞进行成骨诱导,与生物陶瓷构建组织工程骨,种植到新西兰大白兔股骨的骨膜旁,第8周获得异位成骨组织,检测分析收获的异位成骨材料结构.结果:第8周的异位成骨材料内有骨组织形成,成骨材料结构清晰,组织内部有新血管形成,荧光蛋白标记的标本有荧光蛋白表达.结论:组织工程骨在体内可顺利异位成骨.
-
犬骨髓单个核细胞构建组织工程骨的体外实验研究
目的：探索组织工程骨（Tissue Engineered Bone，TEB）的即刻构建方案，以符合临床骨缺损即刻修复的要求。方法分离获取Beagle犬骨髓单个核细胞（Canine bone marrow mononuclear cells，cBMNCs）。将密度为30×106 cells/mL的cBMNCs复合部分脱钙骨（Partially demineralized bone matrix，pDBM ）即刻构建TEB。对即刻构建的TEB进行体外培养和成骨检测。结果在成骨诱导的体外培养环境下，即刻构建的TEB具有一定的细胞活性和成骨能力。结论即刻构建的TEB可直接回植，以满足体内即刻骨缺损修复的要求。
-
体内构建组织工程骨的示踪观察:CM-DiI长效示踪骨髓间充质干细胞的可行性研究
目的 探索组织工程骨体内成骨时,CM-DiI长效示踪骨髓间充质干细胞的可行性,为种子细胞的体内转归研究提供标记方法.方法 分离比格犬BMSCs,成骨诱导至第2代,用荧光染料CM-DiI进行细胞标记.荧光倒置显微镜观察标记后的细胞形态,MTT比色法测定标记前后BMSCs的增殖状况,检测标记前后Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、骨形态发生蛋白(BMP-2)、骨钙素(BGLAP)和骨黏连蛋白(SPARC)的表达.后,CM-DiI荧光标记后的BMSCs与β-TCP复合共培养后植入比格犬背部皮下,8周后取材,荧光显微镜下观察BMSCs体内转归,HE染色观察异位成骨情况.结果 CM-DiI标记后早期细胞呈现红色荧光,48 h后荧光增强,72 h内荧光强度无明显减弱.BMSCs在CM-DiI标记前后细胞形态基本一致,两组间细胞的增殖率无明显差别;标记后RT-PCR检测Col-Ⅰ、BMP-2、BGLAP、SPARC表达,显示标记后的BMSCs亦可向成骨方向分化.扫描电镜检测到标记后细胞在β-TCP上增殖良好,细胞基质分泌丰富.细胞-支架复合物植入比格犬皮下,8周后荧光显微镜观察到标记细胞仍存在,且HE染色可见支架孔隙中有类骨基质沉积.结论 CM-DiI对BMSCs的生长增殖、成骨分化无明显影响,对体内组织工程骨中BMSCs的示踪时间可长达8周,可用作体内细胞的长效示踪剂.
-
组织工程化骨修复四肢骨缺损的初步临床研究
目的 探索以人自体骨髓基质干细胞(Human bone marrow stromal cells,hBMSCs)为种子细胞构建的组织工程骨用于修复四肢骨缺损的可行性.方法 选择9例四肢骨缺损病例(良性骨肿瘤5例、骨缺损4例).经病人髂前上嵴.穿刺抽取10 mL骨髓,用密度梯度离心法分离得到hBMSCs,用成骨诱导培养液定向培养、扩增,应用第3代的hBMSCs与珊瑚复合,继续在体外培养1周后,手术植入骨缺损区.分别在术后2个月、6个月、12个月和24个月进行临床观察和X线检查.1例病人在二次手术时.在原骨缺损区取出少量新生组织活检,进行组织学观察(HE染色).结果 患者术后X线检查显示,组织工程骨在原位形成新骨,能较好地修复骨缺损.活检标本HE染色显示,局部形成正常松质骨组织.结论 以自体hBMSCs为种子细胞,利用组织工程技术制成的自体组织工程骨可以修复四肢骨缺损,并且能够修复较大的骨缺损,但组织工程骨的临床成骨效果与植骨床血供密切相关,目前所使用的组织工程骨植骨方法具有一定的适应证.
-
转染人血管内皮生长因子基因的组织工程骨修复眼眶壁骨缺损的实验研究
目的 探讨以转染人血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)基因的骨髓基质干细胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs)构建的组织工程骨在犬眼眶壁骨缺损中的修复效果.方法 体外分离扩增犬自体BMSCs至第2代,用腺病毒转染VEGF基因.采用Real-time PCR和Western Blot检测目的 基因和蛋白表达情况.细胞接种在珊瑚支架材料上构建组织工程骨.Elisa检测转基因细胞在支架材料上的蛋白持续表达情况.成年比格犬24只.双侧眼眶内侧壁制造直径12 mm圆形骨缺损模型,随机分为4组:A组植入转染VEGF的组织工程骨,B组植入未转染基因的组织工程骨,C组植入单纯珊瑚材料.D组为旷置组.分别在手术后4周、12周、24周取材,行大体观察、Micro-CT分析、免疫组化方法 检测血管形成情况,以及组织学观察和组织形态学检测比较骨缺损修复效果.结果 VEGF基因修饰的BMSCs能够高表达目的 基因和蛋白,构建组织工程骨后能够在体外持续分泌VEGF蛋白22 d.C组和D组均未修复眶壁骨缺损.A组在骨缺损修复过程中,4周时的新生血管形成量和新生骨体积明显高于B组(P<0.05),但12周、24周时两组的新生血管量和新生骨量均无显著性差异(P>0.05).结论 转染VEGF的BMSCs构建的组织工程骨体内回植后早期能够促进新生血管形成.加速新骨生成.
-
组织工程骨血管化策略的研究进展
骨组织工程的发展为大段骨缺损的修复提供了新的途径，众多的动物实验研究和逐渐兴起的临床应用研究已充分显示出其巨大的应用前景。然而，组织工程骨细胞支架复合物在植入体内后，尤其植入血供不佳的受区时，因不能及时地与机体建立起血供连接，使得成骨效果不稳定。近年来的研究表明，组织工程骨的血管化已成为构建大段组织工程骨的一个关键因素。我们对组织工程骨血管化策略的研究进展进行综述。
-
牙髓干细胞在口腔颌面部骨组织工程中的应用进展
口腔头面部疾病及外伤均可导致口腔颌面部及牙齿周围骨组织缺损.组织工程骨是修复口腔颌面部骨和牙周组织缺损的重要手段,而理想的种子细胞是得到组织工程骨的必要条件.牙髓干细胞容易获取,病原携带率低,培养效率高,具有成骨分化能力,与多种生物活性材料亲和性高,是组织工程修复骨缺损的理想种子细胞.本文对牙髓干细胞在口腔颌面部及牙周组织工程骨中的应用研究进展进行综述.
-
血管内皮祖细胞在构建组织工程骨中的研究进展
组织工程骨将种子细胞与支架材料进行复合,利用生物技术并加入生长因子,具有取材方便、可塑性强、组织相容性好、快速修复缺损等特性,在临床上有广泛的应用前景.但是体外构建的组织工程骨移植入体内后,如果仅依靠周围渗透的组织液只能够营养100 μm以内的细胞[1].植入的种子细胞吸取营养物质(如氧气、葡萄糖、氨基酸等)和清除代谢产物(如二氧化碳、尿素和乳酸)的能力有限,中央的细胞供血和供氧不足,就会出现成骨不良或成骨质量不佳等问题[2].因此,成骨区血管化是解决组织工程骨临床应用的关键问题之一[3].近年来内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)引起了广泛关注,本文从其生物学特性、与血管新生的关系、在组织工程骨中的运用等方面做一综述.
-
骨形态发生蛋白2壳聚糖纳米缓释载体的制备及性能测定
目的:制备负载骨形态发生蛋白2(BMP-2)的壳聚糖纳米球,测定纳米球粒径、zeta电位、形态、体外降解和体外释放性能,探讨负载BMP-2的壳聚糖纳米球作为缓释载体的可行性.方法:以壳聚糖(ehitosan)和三聚磷酸钠(tripolyphosphate)为原料,采用离子交联法制备壳聚糖纳米球.应用纳米粒度分析仪及zeta电位测定仪检测微球粒径、分布及zeta电位,透视电镜下测定其表面形态.Elisa法测定包封率、载药率及体外释放率.采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析.结果:离子交联法制备的BMP-2壳聚糖纳米球成球形好,球形较规则,分散较均匀,无团聚,表面较光滑;平均粒径为150.85 nm,分散指数PI=0.37,Zeta电位为+35.42 mV,包封率为(68.24±3.83)％,载药率为(56.83±2.26)％.体外释药试验显示,BMP-2可从壳聚糖纳米微球中缓慢释放,释放行为符合双相动力学规律,释放过程可达30 d.结论:以壳聚糖和三聚磷酸钠为原料,可成功制备具有良好缓释能力的BMP-2纳米球,为组织工程骨的进一步应用提供依据.
关键词： 组织工程骨 纳米球 壳聚糖 人重组骨形态发生蛋白2 缓释系统 -
载辛伐他汀β-磷酸三钙支架复合脂肪干细胞修复兔颅骨缺损
目的:应用辛伐他汀(simvastatin)作用于脂肪干细胞,研究其对细胞生长、成骨、成血管分化的影响；利用β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)三维支架材料负载辛伐他汀,与脂肪干细胞复合,构建组织工程骨,用于兔颅骨缺损模型的修复.方法:原代培养兔脂肪干细胞(rabbit adipose-derived stem cells,rASCs),分别以含0、0.01、0.1和1 μmol/L辛伐他汀的培养液培养,计数法检测细胞数目；以0、0.05、0.1 μmol/L浓度辛伐他汀培养ASCs,1、7d后,实时定量PCR检测成骨、成血管基因的表达(RUNX2、OPN、OCN、VEGF)；7 d后行ALP染色;14 d后行茜素红染色.12只新西兰大白兔颅顶双侧8mm缺损,分别以4组材料修复(A:β-TCP,B:β-TCP/Cell,C:β-TCP/Sim,D:β-TCP/Cell/Sim),每组6例,植入8周后取材,进行组织学观察.采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:0.05 μmol/L辛伐他汀对脂肪干细胞RUNX2、OCN、OPN和VEGF等成骨、成血管基因的表达具有明显促进作用,碱性磷酸酶染色和Von Kossa染色更为明显；植入体内8周后,β-TCP/Cell/Sim组材料的成骨面积显著大于其他3组.结论:0.05 μmol/L辛伐他汀在体外对ASCs具有明显的促成骨作用,载辛伐他汀β-TCP复合脂肪干细胞可促进兔颅骨缺损的修复.
-
血管内皮祖细胞对组织工程骨成骨能力的影响
目的:观察血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)在实验犬体内构建组织工程骨时对其成骨能力的影响.方法:抽取实验犬骨髓,密度梯度离心法获取单个核细胞,通过不同培养方法获得经成骨诱导的骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)和EPCs,在体外复合犬同种异体脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM),扫描电镜和相差显微镜观察细胞形态和生长情况;将复合体植入实验犬背阔肌筋膜下,右侧为实验组,植入EPCsBMSCs/DBM复合体,左侧为对照组,植入BMSCs/DBM复合体.影像学和组织学方法观察术后不同时间点组织工程骨的骨形成程度.采用SPSS13.0软件包对所得数据进行t检验.结果:术后4、8、12周,X线显示实验组的骨密度显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);组织学观察显示,实验组成骨多于对照组,2组新生骨面积及血管面积之间差异有统计学意义(P<0.05).结论:EPCs可以促进组织工程骨的成骨能力,加速新生骨形成.
-
骨组织工程支架材料充填下颌阻生智牙拔牙窝的临床效果
目的:探讨下颌阻生智牙拔除后,用骨组织工程支架材料充填拔牙窝,修复第二磨牙远中牙槽骨高度的临床效果.方法:13例患者在阻生智牙拔除后,即刻植入组织工程骨微粒(小牛无机松质骨Bio-oss、倍骼生PerioGlasf?)于牙槽窝内,术后定期随访,并从临床和X线影像检查比较术后1、12周时,第二磨牙远中牙龈附着水平和牙槽嵴高度的变化.采用SPSS10.0软件包对数据进行配对样本t检验.结果:所有患者术后未出现并发症,术后12周时,第二磨牙远中牙槽嵴高度显著降低(P＜0.05).结论:下颌阻生智牙拔除术后即刻植入组织工程骨支架材料,有利于保持第二磨牙远中牙槽嵴的高度.
-
犬骨髓基质细胞片层在构建组织工程骨中的作用
目的:探讨犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)细胞片层在构建组织工程骨中的价值.方法:制备犬同种异体脱钙骨基质(dermineralized bone matrix,DBM).将人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)复合到DBM上.抽取犬髂骨骨髓,采用密度梯度离心法分离犬骨髓基质细胞(BMSCs).将经成骨诱导的第3代细胞接种于温度反应性培养皿中,制备BMSCs细胞片层.用得到的BMSCs细胞片层包裹DBM/rhBMP-2/BMSCs复合体,植入犬背阔肌血运丰富的肌筋膜下为实验侧,以无BMSCs细胞片层包裹的DBM/rhBMP-加MSCs复合体为对照侧.术后4、8、12周取材,行组织学观察,评价体内异位成骨的情况.采用SPSS13.0软件,对数据进行两样本均数差别的t检验.结果:实验侧成骨面积大于对照侧,2组差异有显著性(P<0.05).术后12周,实验侧生成大量板层骨,有哈弗系统形成,骨髓腔内有红骨髓.对照侧有板层骨形成,无哈弗系统形成,骨髓腔内无红骨髓.结论:BMSCs细胞片层可促进具有致密板层骨和哈弗系统的组织工程骨的形成.
