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清脑益智方含药脑脊液对缺氧复氧皮层神经元细胞重塑相关指标的影响
目的:探究清脑益智方通过促神经元突触重塑治疗血管性痴呆的机制.方法:原代培养皮层神经元,将神经元细胞按照1×106/mL的密度接种于96孔细胞培养板,将细胞分为正常组、缺氧复氧组、正常脑脊液组(正常CSF 10％的元血清培养液)、清脑益智方15.7 g.kg-1给药,连续3d制备的含药脑脊液高剂量组(清脑益智方-CSF 10％的元血清培养液)、清脑益智方含药脑脊液低剂量组(清脑益智方-CSF 5％的元血清培养液)、恩必普组含75 mg'kg-1 ig3 d制备的脑脊液5％的元血清培养液.除正常细胞组外,其余各组均在添加相应干预措施后进行缺氧24 h复氧24 h处理.采用ELISA法检测细胞上清液中突触素(synapsin,SYN)、生长相关蛋白-43(growth associated protein-43,GAP-43)、微管相关蛋白2(microtubule associated protein 2,MAP-2)等突触重塑标志物的表达.结果:清脑益智方含药脑脊液能够促进缺氧复氧皮层神经元突触重塑相关指标SYN,GAP-43,MAP-2的表达,并且清脑益智方含药脑脊液高剂量组与低剂量组的上述3个指标表达水平均明显高于缺氧复氧组,且具有显著的统计学差异(P＜0.01).结论:清脑益智方可通过SYN,MAP-2,GAP-43等突触重塑标志物的表达而促进神经元重塑.
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清脑益智方药血清在缺氧培养条件下对人胚大脑神经细胞的影响
目的:探讨清脑益智方药血清在缺氧条件下,对体外培养人胚脑神经细胞活性、自由基清除及细胞超微结构保护方面等作用.方法:在缺氧条件下(95%N2+5%CO2,120min),造成胚脑神经细胞损伤模型,应用清脑益智方药处理人血清,以牛磺酸为对照组进行比较性研究.结果:清脑益智方药血清对缺氧损伤的神经细胞培养液中异常增高的LDH释出量有显著的降低作用,提高了SOD活力和NSE活性,降低LPO含量,有保护神经细胞的超微结构等作用.结论:表明清脑益智方药人血清在缺氧培养条件下,对人胚大脑神经细胞有一定的保护作用.
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清脑益智方通过调控PI3K/Akt信号通路抗缺氧复氧诱导皮层神经元细胞凋亡的实验研究
目的 观察清脑益智方含药脑脊液对缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)神经元存活率、凋亡及PI3K/Akt信号转导通路的影响,探讨清脑益智方治疗血管性痴呆的部分机制.方法 原代培养皮层神经元,将神经元细胞(CNC)按照1×106的浓度接种于细胞培养板,将CNC分为正常组(简称NC组)、缺氧复氧组(简称MC组)、正常脑脊液组(简称N-CSF组)、清脑益智方含药脑脊液高剂量组(简称QN-H组)、清脑益智方含药脑脊液低剂量组(简称QN-L组)、恩必普组(简称NBP组).除NC组外,其余各组均在添加相应干预措施后进行缺氧24 h复氧24 h处理.采用CCK-8试剂盒检测细胞活力;采用TUNEL法检测细胞的凋亡情况;采用Western blot法检测磷酸化PI3K及磷酸化Akt蛋白表达;采用逆转录PCR(RT-PCR)法检测PI3K、Akt、mTOR基因表达.结果 与NC组比较,MC组CNC活力(OD值)下降(P＜0.01).CNC凋亡数目明显增多(P＜0.01).PI3K、Akt、mTOR基因表达均显著降低,p-PI3K、p-Akt蛋白表达升高(P＜0.05);与MC组比较,QN-H组OD值升高明显(P ＜0.01);QN-H、QN-L、NBP组神经元凋亡数目明显减少(P＜0.01),其中QN-H组神经元凋亡数目较NBP组更少(P＜0.01);QN-H组PI3K、Akt、mTOR基因表达水平均提高(P ＜0.05,P＜0.01),QN-L组PI3K、Akt基因表达水平亦升高(P＜0.01);QN-H、QN-L、NBP组的p-PI3K蛋白表达水平明显升高(P＜0.05).结论 清脑益智方能提高缺氧复氧致皮层神经细胞活力,减少缺氧复氧引起的皮层神经元的凋亡数目,此作用可能与清脑益智方对PI3 K/A kt信号转导通路的调节有关.
关键词： 清脑益智方 血管性痴呆 缺氧复氧 神经元 PI3K/Akt信号转导通路 -
清脑益智方对血管性痴呆大鼠海马区NogoA和丝氨酸/苏氨酸激酶表达的影响
目的 研究清脑益智方(QNYZF)对血管性痴呆(VaD)大鼠大脑海马区NogoA和丝氨酸/苏氨酸激酶(ROCK)表达的影响.方法 用双侧结扎颈总动脉(2-VO)法建立大鼠VaD模型.按照体重将雄性SD大鼠随机分为6组,每组6只:假手术组,模型组,对照组和低、中、高3个剂量实验组.假手术组与模型组灌服等体积0.9％ NaCl;对照组给予盐酸多奈哌齐0.52 mg· kg-1·d-1;低、中、高3个剂量实验组分别灌服QNYZF 3,6,12g·kg-1 ·d-1,连续灌胃给药4周.取大脑组织,用免疫组化法和反转录PCR法分别检测海马区NogoA和ROCK-2蛋白表达水平.结果 大鼠海马区NogoA+细胞相对灰度值:假手术组、模型组、对照组和低、中、高3个剂量实验组分别为435.30±127.98,5365.94±1351.96,1585.92±360.64,1953.77±653.58,2300.94±742.25,1681.35±437.87,模型组与假手术组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);对照组与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);3个剂量实验组均有降低的趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).大鼠海马区ROCK-2+细胞相对灰度值:假手术组、模型组、对照组和低、中、高3个剂量实验组分别为68.11±12.58,556.79±141.85,130.20±31.05,357.24±100.07,193.39±40.79,503.64±219.87,模型组与假手术组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);对照组和中剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P ＜0.01).结论 QNYZF可通过抑制NogoA-NgR/Rho-ROCK信号通路而发挥促神经元突触重塑的作用.
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清脑益智方对血管性痴呆大鼠认知及海马病理的影响
目的:研究清脑益智方对血管性痴呆大鼠认知功能的影响.方法:选用雄性SD大鼠,通过双侧颈总动脉结扎法(2VO)建立血管性痴呆(VD)模型,采用Morris水迷宫实验考察清脑益智方对VD大鼠认知功能的影响,从整体及组织学水平研究清脑益智方对VD大鼠认知功能的改善情况.结果:与模型组比较,盐酸多奈哌齐 组、清脑益智方低、中、高剂量组逃避潜伏时间均明显缩短(P＜0.01);与模型组比较,盐酸多奈哌齐组、清脑益智方低、中、高剂量组游泳总路程均明显缩短(P＜0.01);与模型组比较,清脑益智方组大鼠海马区病理状态有所改善.结论:清脑益智方能提高血管性痴呆大鼠的认知功能.
