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梓醇对纤维状Aβ1-42诱导的bEnd.3细胞凋亡及过度自噬的影响
目的:观察梓醇对纤维状β-淀粉样蛋白(amyliod-beta protein,Aβ1-42)诱导的小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)损伤的保护作用,并探讨其保护作用机制.方法:将bEnd.3细胞分为溶剂组,模型组(Aβ1-42 20 μmol·L-),梓醇低、中、高浓度组(Aβ1-42 20 μmol·L-+梓醇50,200,500 μmol· L-1);噻唑蓝(MTT)比色法检测梓醇及其对Aβ1-42 诱导的bEnd.3细胞活性的影响;Hoechst33258染色法检测梓醇对Aβ1-422诱导的bEnd.3细胞凋亡情况的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬及凋亡相关蛋白(Beclin-1,LC3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),细胞色素-C(cytochrome-C),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及切割活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3)的表达水平.结果:MTT显示,梓醇对bEnd.3细胞无毒副作用;MTT与Hoechst33258染色结果显示,与模型组比较,梓醇低、中、高剂量组能明显提高bEnd.3细胞活性,抑制Aβ1-42介导的bEnd.3细胞凋亡(P＜0.05);Western blot显示,与模型组比较,梓醇预处理后,可明显降低Bax/Bcl-2,cytochrome-C/β-actin,cleaved Caspase-3/Caspase-3,Beclin-1/β-actin,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ(P＜0.05).结论:梓醇可能通过抑制AβI42诱导的bEnd.3细胞凋亡及过度自噬发挥其神经保护作用.
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活血定眩胶囊对小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3基因表达谱的影响及生物信息学分析
目的 探讨活血定眩胶囊含药血清对体外培养小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3基因表达谱的影响及作用的分子机制.方法 将30只大鼠随机分为对照组和活血定眩胶囊组,2组分别ig给予7.5 g/kg活血定眩胶囊和等量生理盐水,连续7d,采集2组大鼠血清.将bEnd.3细胞分为对照组、模型组、10％活血定眩胶囊含药血清组,给药后,bEnd.3细胞缺氧6h.激光显微镜下观察细胞骨架,运用Affymetrix U133 plus2.0基因组表达芯片检测活血定眩胶囊对bEnd.3细胞基因表达谱的影响,应用分子注释系统MAS3.0软件进行聚类分析.结果 根据P＜0.01,|Fold Change|＞3筛选差异基因,对照组与模型组之间共有405个差异基因,其中表达上调的有176个,表达下调的有229个.活血定眩胶囊含药血清组与模型组之间共有368个差异基因,其中表达上调的有146个,表达下调的有222个.这些共同的差异基因生物功能包括内皮细胞迁移的正调控、含氧酸代谢过程、血管内皮生长因子的产生、核转录因子-κB (NF-κB)活性的正向调节等,参与的信号通路包括氧化应激诱导的衰老、有丝分裂前期、血小板聚集(堵塞形成)、血管内皮生长因子信号通路、白细胞介素信号通路、p53通路、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)信号通路、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路、凋亡信号通路等信号通路.结论 活血定眩胶囊对缺氧所致bEnd.3细胞的损伤具有明显的对抗作用,其机制与氧化应激、抑制细胞凋亡、促进血管内皮新生、炎症及免疫反应有关,活血定眩胶囊在基因水平通过多条通路调节血管内皮细胞功能.
关键词： 活血定眩胶囊 小鼠脑微血管内皮细胞 基因芯片 抗氧化 bEnd.3细胞 -
单克隆抗体OX26修饰的丹酚酸B/黄芩苷纳米结构脂质载体研究
目的 制备转铁蛋白受体单克隆抗体OX26修饰的丹酚酸B/黄芩苷纳米结构脂质载体(Sal B/BA-NLC),并对其进行表征和细胞摄入研究.方法 采用乳化-固化法制备Sal B/BA-NLC,用2-亚氨基硫烷盐酸盐(2-iminothiolane hydrochloride)将OX26进行硫醇化后连接于Sal B/BA-NLC表面,以形态、粒径、Zeta电位及包封率等为评价指标考察其理化性质,并用差示扫描量热法(DSC)与核磁共振波谱(NMR)进行验证.以香豆素-6(coumarin-6,C6)为荧光探针,代替黄芩苷和丹酚酸B制备制剂,利用高内涵成像仪考察脑微血管内皮细胞bEnd.3对其的摄入情况.结果 所制备的OX26修饰的SalB/BA-NLC粒径为(27.50±3.37) nm,PDI为0.39±0.04,Zeta电位为(-7.06±1.85)mV.DSC与NMR结果表明,药物是以无定形的形式存在于纳米结构脂质载体中.细胞摄入结果显示,当考察时间一致时,bEnd.3细胞摄入3组溶液体系的荧光强度为OX26-C6-NLC＞ C6-NLC＞ C6-SL.结论 所制备的OX26修饰的Sal B/BA-NLC粒径较小、分布均匀,且包封率高.与溶液组和未修饰的NLC组相比,OX26修饰的NLC组具有更高的摄入量.
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醛固酮及其受体拮抗剂对缺氧的离体血脑屏障模型作用研究
目的 探讨缺氧后永生化小鼠脑微血管内皮细胞系bEND.3细胞自身能否生成醛固酮,及其受体拮抗剂依普利酮对血脑屏障的保护作用.方法 根据缺氧时间不同分组,MTT法测定缺氧后细胞活力,ELISA法测定缺氧后醛固酮的产生,RT-PCR法检测紧密连接蛋白ZO-1和claudin-5的mRNA表达.结果 MTT法显示,随着缺氧时间的延长,细胞活性降低,加入依普利酮后其细胞活性提高;ELISA结果显示,缺氧后伴有醛固酮的产生增加;经过依普利酮(0.1、1、10 μmol/L)处理后ZO-1、claudin-5蛋白表达增加(P＜0.05).结论 体外实验证实,缺氧后血管内皮细胞可自身合成醛固酮,醛固酮受体拮抗剂依普利酮可保护血脑屏障的屏障功能.
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覆盆子水煎剂对H2O2诱导的bEnd.3细胞氧化应激损伤的影响
目的:探讨覆盆子水煎剂对H2O2诱导的小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3细胞)氧化应激损伤的影响.方法:用不同浓度的H2O2处理bEnd.3细胞6h,构建氧化应激模型;MTT法检测不同浓度的覆盆子水煎剂对bEnd.3细胞活性的影响;采用Western blot法检测相关凋亡蛋白Bax、Bcl-2、Cytochrome(Cyt-c)、Caspase 3、Caspase 8、Cas-pase 12蛋白的表达情况.结果:MTT检测发现覆盆子水煎剂可提高H2O2干预下的bEnd.3细胞活性,并且该保护作用呈现浓度依赖性(P＜0.05).Western blot检测结果显示覆盆子水煎剂可抑制Cyt-c高表达,上调Bcl-2/Bax比值,同时下调Cleaved-caspase 3/pro-caspase 3、Cleaved-caspase 8/pro-caspase 8、Cleaved-caspase 12/pro-caspase 12的比值(P＜0.05).结论:实验剂量的覆盆子水煎剂对H2O2介导的bEnd.3细胞损伤具有保护作用,主要与调节相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Cyt-c的表达及Caspase 3、8、12活化有关.
