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基于NOS信号的艳山姜挥发油对ox-LDL诱导HAECs损伤的保护作用
目的:研究艳山姜挥发油(EOFAZ)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的入主动脉内皮细胞(HAECs)损伤的保护作用.方法:体外传代培养HAECs,EOFAZ保护作用研究分为7组,分别为空白组(无血清ECM),模型组(200 mg·L-ox-LDL),EOFAZ高质量浓度组(200 mg·L-1ox-LDL+ 100 μg·L-EOFAZ),EOFAZ低质量浓度组(200 mg·L-1ox-LDL+ 10 μg·L-1EOFAZ),阿司匹林组(Asp,200 mg·L-1ox-LDL +2.5×10-4 mol·L-1Asp),卡维地洛组(Car,200 mg·L-1 ox-LDL+1×10-6 mol·L-1 Car),阿托伐他汀钙组(Atorv,200 mg·L-1ox-LDL+1×10-6 mol·L-1Atorv);一氧化氮合酶(NOS)信号研究分为5组,分别为空白组(无血清ECM),模型组(200 mg·L-1 ox-LDL),EOFAZ组(200 mg·L-1 ox-LDL+ 100 μg·L-1EOFAZ),NOS抑制剂组(200 mg·L-1 ox-LDL+ 100 μmol·L-1 L-NAME或300 μmol ·L-1 L-NMMA),EOFAZ加NOS抑制剂组(200 mg·L-1 ox-LDL+100 μg·L-1EOFAZ+ 100 μmol·L-1L-NAME或300 μmol·L-L-NMMA).噻唑蓝(MTT)法分析细胞存活率,酶标仪法及Griess 试剂法分别检测培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性和一氧化氮(N0)含量.化学法检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱 导型一氧化氮合酶(iNOS)活性.实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测iNOS及eNOS mRNA表达水平.结果:与模型组比较,EOFAZ明显提高ox-LDL诱导损伤的HAECs的细胞存活率,抑制LDH外漏及iNOS活力(P ＜0.05,P＜0.01),促进NO及eNOS的产生(P＜0.05,P＜0.01).Real-time PCR分析表明,EOFAZ以及相关抑制剂显著下调iNOS mRNA表达水平(P ＜0.05,P＜0.o1),上调eNOS mRNA表达水平(P＜0.05).结论:EOFAZ对ox-LDL诱导损伤的HAECs具有保护作用,其作用机制与调控eNOS和iNOS的表达水平有关.
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艳山姜挥发油调控NF-κB信号抑制LPS诱导HAECs炎性损伤
目的:研究艳山姜挥发油(essential oil of Alpinia zerumber fructus,EOAZF)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人主动脉内皮细胞(human aortic endothelial cells,HAECs)炎性损伤的保护作用.方法:体外传代培养HAECs,先用不同剂量EOAZF(0.05,0.1 mg·L-1)和阿司匹林(0.5 mmol·L-1)预处理1h,另设空白组,再与LPS(5 mg·L-1)共同作用12 h.采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;苏木素-伊红染色进行细胞形态学观察;细胞划痕修复实验分析HAECs划痕修复能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4),核转录因子-κB抑制蛋白激酶(inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase,IKK),磷酸化NF-κB抑制蛋白激酶(phospho-inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase,p-IKK)蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中TLR4和VCAM-1 mRNA的表达;免疫荧光法观察NF-κB p65的核转位情况.结果:与空白组比较,LPS能诱导HAECs形态学损伤,降低细胞存活率及划痕修复能力,同时上调VCAM-1,Caspase-3,TLR4,IKK及P-IKK的表达.免疫荧光实验结果分析表明LPS能够诱导NF-κB p65的核转位.与模型组比较,EOAZF预处理后,能够改善LPS诱导的HAECs形态学损伤,提高细胞存活率及划痕修复能力,抑制VCAM-1,Caspase-3,TLR4,IKK及P-IKK的表达及NF-κBp65的核转位.结论:EOAZF对LPS诱导的HAECs炎性损伤具有保护作用,其机制与调控TLR4/IKK/NF-κB-p65信号有关.
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艳山姜挥发油自乳化释药系统的优化及评价
目的 优选艳山姜Alpiniae zerumbet挥发油自乳化释药系统(EOFAZ-SEDDS)的处方,并对其药剂学性质进行评价.方法 通过伪三元相图的绘制,以乳化区域面积为指标,筛选处方中乳化剂、助乳化剂、乳化剂与助乳化剂比例(Km),确定佳处方,并对EOFAZ-SEDDS的外观、粒径、自乳化效率以及稳定性进行评价.结果 所得艳山姜挥发油自乳化传递系统的处方为艳山姜挥发油(60％)、Kolliphor HS 15 (20％)、无水乙醇(20％).所得EOFAZ-SEDDS外观为淡黄色澄明液体,加水稀释后可形成乳白色并带淡蓝色乳光的乳液,于透射电子显微镜(TEM)下观察呈球形,分布均匀,粒径为(171.67±7.64) nm,Zeta电位为(-11.51±1.22)mV.EOFAZ-SEDDS在盐酸(0.1 mol/L)中自乳化时间短.随着介质体积的增加,自乳化时间延长.EOFAZ-SEDDS自乳化后24 h内均未见有沉淀产生和分层现象,且离心30 min仍未发生分层.结论 研究考察所得佳处方制备的EOFAZ-SEDDS粒径适宜,稳定性良好.
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EOFAZ抑制TNF-α诱导的血管新生和炎症损伤
目的 研究艳山姜挥发油(essential oil of Fructus Alpiniae zerumbet,EOFAZ)对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)诱导内皮细胞血管新生及炎性损伤的作用,以及作用机制.方法 分别建立TNF-α诱导的体外内皮细胞血管新生及体内小鼠胸主动脉炎性损伤模型.采用体外血管新生小管成环实验,分析TNF-α诱导HUVECs的血管新生;Western blot和qRT-PCR实验法分别检测HUVECs中VEGFR-2蛋白和mRNA的表达;ELISA法检测小鼠血清中VEGFR-2的分泌水平;采用HE染色分析小鼠胸主动脉炎性损伤.结果 EOFAZ和ERK抑制剂U0126明显抑制TNF-α诱导的HUVECs血管新生小管成环数量(P＜0.01);EOFAZ能够下调TNF-α诱导小鼠血清中VEGFR-2的分泌(P＜0.01);EOFAZ和U0126对TNF-α诱导的HUVECs中VEG-FR-2的蛋白和mRNA表达有抑制作用(P＜0.01);EOFAZ能够抑制TNF-α诱导小鼠胸主动脉炎性细胞的浸润.结论EOFAZ能抑制TNF-α诱导血管新生和炎性损伤,其机制与通过ERK信号通路下调VEGFR-2的表达有关.
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艳山姜挥发油对氧化低密度脂蛋白诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤及一氧化氮合酶-一氧化氮的影响
目的:研究艳山姜挥发油对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及一氧化氮合酶-一氧化氮(NOS-NO)的影响.方法:体外传代培养人脐静脉内皮细胞,给予0.1 μg·mL-1和0.01 μg·mL-1艳山姜挥发油孵育24h后,加入100 μg·mL-1 ox-LDL作用24 h诱导人脐静脉内皮细胞损伤模型,倒置相差显微镜及吉姆萨染色观察细胞形态学变化,比色法分析细胞培养液NO的含量与细胞裂解液NOS分型活力.结果:Ox-LDL与人脐静脉内皮细胞作用24 h后,细胞胞膜皱缩,细胞数目减少,tNOS与eNOS活力显著降低,培养液NO含量降低.艳山姜挥发油显著改善细胞形态学变化,提高细胞tNOS与eNOS活力及培养液中NO含量.模型组与艳山姜挥发油组均对iNOS未见显著影响.结论:艳山姜挥发油对ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞损伤具有保护作用,其保护作用与改善eNOS活力,提高NO水平相关.
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艳山姜挥发油抗炎镇痛作用的实验研究
目的:研究艳山姜挥发油抗炎镇痛的药理作用,为建立以活性组分为基础的艳山姜质量标准提供实验依据.方法:采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀及皮肤毛细血管通透性实验、醋酸致小鼠扭体反应与小鼠热板致痛等实验动物模型对艳山姜挥发油进行整体动物生物活性评价.结果:艳山姜挥发油能够显著减少醋酸致小鼠扭体次数,延长热板痛反应时间,显著抑制二甲苯致小鼠耳廓肿胀及皮肤毛细血管通透性的增高,与模型组比较差异有显著性.结论:艳山姜挥发油具有较好的抗炎镇痛作用,其挥发油含量分析.可以作为衡量艳山姜药材质量标准的指标性成分之一.
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艳山姜挥发油对高糖诱导大鼠视网膜Müller细胞VEGF表达的调控作用
目的:研究艳山姜挥发油对高糖诱导大鼠视网膜Müller细胞(RMCs)增殖的抑制作用,并探讨其可能的作用机制.方法:将培养的RMCs分为正常对照组、甘露醇对照组、模型组、罗格列酮阳性对照组及艳山姜挥发油高(1 μg/L)、中(0.5μg/L)、低(0.25 μg/L)浓度组.给药48 h后,MTT法检测艳山姜挥发油对高糖诱导RMCs增殖的影响,苏木素-伊红染色(HE)进行形态学观察,划痕修复实验及transwell实验分别分析RMCs迁移能力和侵袭能力.免疫印迹法(Western blot)分析血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况.结果:高糖作用后,RMCs增殖率、迁移及侵袭能力显著升高(P＜0.0l);VEGF蛋白表达显著上调(P＜0.01).与模型组比较,给予艳山姜挥发油及罗格列酮预保护能显著抑制RMCs的异常增殖(P＜0.05),RMCs形态和数量趋近正常对照组,RMCs迁移和侵袭能力显著降低,同时显著下调了VEGF蛋白的表达(P＜0.05或P＜0.01).结论:艳山姜挥发油对高糖诱导下RMCs的增殖及VEGF蛋白的表达具有调控作用.
关键词： 艳山姜挥发油 高糖 视网膜Müller细胞 增殖 VEGF
