首页 > 文献资料
-
分泌生长激素和催乳素的奶牛腺垂体细胞的分离鉴定及特征分析
目的 获得具有生长激素(growth hormone,GH)和催乳素(prolactin,PRL)分泌功能的奶牛腺垂体细胞(dairy cow anterior pituitary cells,DCAPCs),并对其进行鉴定和特征分析.方法 采用免疫组织化学方法对奶牛腺垂体中GH和PRL分泌细胞进行定位,利用酶消化法对其所在部位进行消化,获得的细胞经分离培养后,用形态学方法和免疫组织化学方法进行鉴定,并分析其传代性能;采用实时荧光定量PCR及ELISA方法对其GH和PRL合成和分泌特征进行分析.结果 GH分泌细胞主要位于腺垂体侧翼区下缘,而PRL分泌细胞主要位于腺垂体侧翼区上缘.获得的DCAPCs接种培养2d后,可见形状规则的铺路石样上皮细胞,经免疫组织化学法鉴定,可分泌GH和PRL,经多次传代后仍可表达GH和PRL,但表达水平随代次增加而降低.结论 成功建立了DCAPCs分离培养方法,可用于体外研究奶牛GH和PRL合成及分泌的调控机制.
-
基于双向凝胶电泳/基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱技术的腐蹄病奶牛血浆蛋白质组学轮廓分析
目的 利用双向凝胶电泳/基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(two-dimensional electrophoresis matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,2DE/MALDI-TOF-MS)技术,筛选、鉴定腐蹄病奶牛血浆差异表达蛋白,并进行血浆蛋白质组学轮廓分析.方法 选取20头腐蹄病奶牛为实验组,20头健康奶牛为对照组,采血,分离血浆,2DE筛选差异表达蛋白点,MALDI-TOF-MS鉴定差异表达蛋白,并对其进行生物信息学分析(GO分析和KEGG pathway数据库).根据2DE及MALDI-TOF-MS的实验结果,选取纤维蛋白原进行Western blot验证试验.结果 患腐蹄病奶牛血浆中共筛选出63个差异蛋白点,其中表达上调蛋白点14个,表达下调蛋白点49个,选取33个点进行质谱分析,得到26个阳性结果,鉴定为11种蛋白,差异表达蛋白多与炎症反应过程相关.Western blot对差异表达蛋白的验证结果与2DE结果一致.结论 奶牛腐蹄病使血浆蛋白的表达发生了变化,机体蛋白质组参与炎症反应、补体通路、凝血过程等多个机体生理和病理过程,为进一步探索奶牛腐蹄病发病机制提供理论依据.
关键词： 奶牛 腐蹄病 双向凝胶电泳 基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱 蛋白质组学 -
胎衣不下奶牛胎盘组织差异表达蛋白的筛选及鉴定
目的 筛选胎衣不下奶牛胎盘组织中的差异表达蛋白,并对其鉴定,为研究奶牛胎衣不下的发生机理和治疗提供依据.方法 收集胎衣不下奶牛及胎衣正常排出奶牛胎盘组织各5份,应用双向凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamidegel electrophoresis,2D-PAGE)技术对胎盘组织中蛋白进行分离,银染显色后获得差异表达蛋白点,并采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术对其进行鉴定.结果 与胎衣正常排出组相比,胎衣不下组奶牛胎牛胎盘中差异表达蛋白点共240个,其中表达上调蛋白点212个,表达下调蛋白点28个;母体胎盘中差异表达蛋白点共214个,其中表达上调蛋白点134个,表达下调蛋白点80个,共鉴定出5种差异表达蛋白.与胎衣正常排出组相比,胎衣不下组奶牛胎牛胎盘中牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)、α-烯醇化酶(Alpha enolase)表达下调,谷胱甘肽转移酶(glutathione transferases,GST)表达上调;母体胎盘中膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)、Alpha enolase和膜联蛋白A2(Annexin A2)表达均上调.结论 发现的5种差异表达蛋白可能与奶牛胎衣不下的发生发展相关.
关键词： 胎衣不下 奶牛 胎盘组织 双向凝胶电泳 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 -
奶牛miR-124a靶基因预测及生物信息学分析
目的 预测奶牛miR-124a(bta-miR-124a)的靶基因,并对其生物学功能、调控机制以及参与的信号转导通路进行富集分析,为bta-miR-124a调控乳品质代谢的功能验证研究提供理论依据.方法 利用miRBase、miRWalk和Targetscan等在线数据分析系统,获得bta-miR-124a的前体及成熟区序列,同时预测其候选靶基因并取交集,进而对筛选获得的候选靶基因进行GO功能注释及信号通路富集分析.结果 bta-miR-124a序列在各物种间高度保守,其候选靶基因主要富集在生物调控、细胞生长、代谢等生物学过程中.KEGG信号通路显示,在癌症、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMP-activated protein,AMPK)、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)信号转导、脂肪酸降解、脂肪酸生物合成等信号通路中,候选靶基因均被富集.结论 bta-miR-124a的候选靶基因在癌症发生、AMPK信号转导、脂肪酸代谢中发挥重要作用.其中,脂肪酸代谢是bta-miR-124a可能参与的主要代谢调控通路.为后期bta-miR-124a在奶牛乳腺组织中调控乳脂代谢的功能机制的研究提供参考.
-
bta-mir-423-5p在胎衣不下奶牛母体胎盘中的差异表达分析及验证
目的 分析及验证bta-mir-423-5p在胎衣不下奶牛母体胎盘中的差异表达.方法 选取各种因素无明显差异,且排除其他疾病影响的胎衣正常排出奶牛(对照组)和胎衣不下奶牛(试验组)各3头,对照组在奶牛产后胎衣排出后,立即采集母体胎盘组织约150 mg,试验组在奶牛产后12h,收集母体胎盘组织约150 mg.采用Solexa高通量测序技术对两组母体胎盘组织间bta-mir-423-5p的差异表达进行分析;利用Real-time Q-PCR法进行验证.结果 试验组奶牛母体胎盘中bta-mir-423-5p的表达量明显低于对照组(P＜0.01).结论 bta-mir-423-5p在胎衣不下奶牛母体胎盘中异常表达,表明其可能参与胎衣不下的发生,为奶牛胎衣不下发病机理的研究提供了实验依据.
关键词： bta-mir-423-5p 胎衣不下 奶牛 胎盘 差异表达 -
基于1H核磁共振技术的产后乏情奶牛血浆代谢组学分析
目的 应用1H核磁共振(1H nuclear magnetic resonance,1H NMR)技术筛选正常发情奶牛与乏情奶牛血浆中差异表达的代谢物,初步揭示奶牛产后乏情与代谢变化的关系.方法 选取年龄、体况、胎次相近的产后60～90d经产荷斯坦奶牛206头,结合临床表现、直肠检查、B超检查和激素检测结果筛选出发情组(20头)和乏情组(24头)共计44头为实验动物.应用1H NMR技术对两组奶牛血浆代谢物进行检测,并结合多元统计分析,筛选出两组奶牛血浆中差异代谢物.结果 与发情组相比,筛选出的10种差异表达代谢物,即L1[LDL,脂类(低密度脂蛋白)]、L2[VLDL,脂类(极低密度脂蛋白)]、L3(Lipid,脂质)、丙氨酸(Ala)、谷氨酸(Glu)、天冬酰胺(Asn)、肌酸(Crea)、胆碱(Choline)、磷酸胆碱(PC)和甘油磷酸胆碱(GPC),在乏情组奶牛血浆中均表达下调,其参与了能量、氨基酸、脂类以及胆碱等代谢途径.结论 筛选出表达下调的差异代谢物,可能导致奶牛处于能量负平衡、脂类代谢异常或脂肪肝状态,从而干扰生殖激素合成与分泌,引发奶牛产后乏情.
-
牛源地衣芽胞杆菌诱导小鼠临床乳房炎模型中热休克蛋白和核因子-κB表达上调
目的:为进一步认识奶牛乳腺炎发生的免疫病理机制和寻找更理想的防治方法提供基础研究数据.方法:从采集回来的奶牛奶样中用传统细菌培养方法和分子学方法分离鉴定主要病原菌,挑选其中地衣芽胞杆菌感染小鼠乳腺组织,H-E染色分析感染后小鼠乳腺组织变化,免疫组织化学方法分析热休克蛋白70(HSP70)和核因子-kB(NF-kB)在感染小鼠体内的表达.结果:感染后小鼠乳腺出现明显的炎症症状,组织病理学观察显示腺泡腔内有大量嗜中性粒细胞浸润.实验组中HSP70和NF-kB表达量比生理盐水组和空白组均有增加.结论:成功通过地衣芽胞杆菌诱发建立实验性乳房炎小鼠病理模型,实验组中HSP70和NF-kB表达量的增加说明其参与细菌感染小鼠乳腺组织后的病理过程.
-
奶牛乳腺肥大细胞的粘膜免疫学特征
应用改良甲苯胺蓝染色法(MTB)和阿尔辛蓝-番红鉴别染色法(AB-S)对静止期和活动期奶牛乳腺肥大细胞的粘膜免疫学性质进行了研究.MTB染色结果显示,静止期乳腺中的肥大细胞主要分布于各级输乳管上皮基膜区,小血管周围也有肥大细胞分布.在活动期,肥大细胞主要分布于腺泡上皮基膜附近,上皮内也有极少数肥大细胞分布,小叶间结缔组织中的肥大细胞则分布于小叶间导管或输乳管上皮基膜区.AB-S染色证实,乳腺肥大细胞只被阿尔辛蓝染成蓝色,而不被结缔组织型肥大细胞的标志性染料番红着染.这表明,乳腺肥大细胞是一种典型的粘膜型肥大细胞(MMC),并参与构成乳腺粘膜免疫的第一道防线.
-
合肥地区奶牛源隐孢子虫的分离与鉴定
目的 分离合肥地区奶牛源隐孢子虫,并鉴定其种类.方法 采集安徽省合肥市某奶牛场285头成年母牛粪样,采用饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法检测牛粪中隐孢子虫卵囊,并分离纯化隐孢子虫阳性粪样中的卵囊,抽提其基因组DNA作为模板,根据隐孢子虫18S rRNA和HSP70基因设计引物,用PCR和巢式PCR方法扩增目的片段,对巢式PCR产物进行克隆、测序,并运用DNAStar软件对序列进行同源性比对,构建系统进化树.结果 两种方法检测均为阳性的粪样有5份,感染率为1.8％(5/285).隐孢子虫卵囊呈椭圆或卵圆形,饱和蔗糖溶液漂浮法分离的隐孢子虫卵囊大小为7.37 μm×6.13μm,形状指数(长/宽)为1.20;改良抗酸染色法检获的隐孢子虫卵囊大小为7.58 μm×6.20 μm,形状指数为1.22.巢式PCR扩增出的18S rRNA和HSP70基因片段分别为250 bp和325 bp.合肥奶牛源隐孢子虫5株分离株18S rRNA基因与安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni)DQ989573序列一致性高,两者在系统进化树上为同一分支.这5株分离株的HSP70基因序列与安氏隐孢子虫AY954892和DQ989576序列一致性高,且在系统进化树上为同一分支.结论 合肥市某奶牛场分离的奶牛源隐孢子虫为安氏隐孢子虫.
-
感染隐孢子虫奶牛血液免疫和抗氧化指标的变化
目的 检测感染隐孢子虫奶牛血液免疫和抗氧化体系指标. 方法 对安徽省某奶牛场325头奶牛粪样采用饱和蔗糖溶液漂浮法检测隐孢子虫感染情况.选择隐孢子虫感染强阳性的7头奶牛作为感染组,同时取7头隐孢子虫粪检阴性奶牛作为对照组,早晨饲喂前从奶牛颈静脉采血,分别测定总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、免疫球蛋白(IgG、IgM和IgA)、中性粒细胞吞噬率、T淋巴细胞转化率、白细胞介素-2(IL-2)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、血糖(GLU)、甘油三脂(TG)、Cl-和Ca2+等19项指标. 结果 325头奶牛隐孢子虫感染率为31.7％( 103/325),根据卵囊的形态和大小,初步鉴定为安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni).与对照组相比,感染组奶牛血清中TP、ALB、IgM、IgA、GSH-Px、ALT、AST、ALP和Cl-含量无显著变化(P＞0.05)；血清中MDA和NO含量分别升高59.9％和28.1％(P＜0.05或0.01)；而血清中IgG、SOD、GLU、TG、Ca2+和IL-2含量,以及T淋巴细胞转化率和中性粒细胞吞噬率分别降低了32.9％、11.1％、18.6％、78.9％、14.5％、7.0％、22.0％和20.2％(均P＜0.05). 结论 感染隐孢子虫奶牛部分免疫指标下降,抗氧化酶活性降低,清除体内自由基的能力减弱.
-
2009年至2013年甘肃省合水县布鲁菌病流行特点分析
布鲁菌病是由布鲁杆菌侵入人体，引起的人畜共患的变态反应性疾病，为乙类传染病。患病的家畜是人间布鲁菌病的主要传染源，人接触患病的牲畜或其污染物而感染［1-3］。20世纪70年代在甘肃省合水县店子乡、太莪乡曾有过局部流行，经过积极防控很快得到控制［4］。2009年，在合水县西华池镇再次发现感染布鲁菌的奶牛，此后陆续在全县范围内发现有染病牛羊和人群发病。
-
当心!有些食品尝不得"鲜"
大家知道,食品应该吃新鲜的.但任何事物都有两面性,有的食品如吃得太新鲜,则对健康不利.鲜牛奶.现挤现售的牛奶很新鲜,可奶牛是否患病又有谁知道呢?万一奶牛感染了布氏杆菌、结核杆菌、金黄色葡萄球菌、口蹄疫病毒等致病微生物,那么吃新鲜牛奶者无疑会被感染或发病,对身体健康造成损害.因此,特别新鲜的牛奶是万万不可尝鲜的.正规的乳品厂对采奶的奶牛及操作卫生都有一定的要求,且鲜奶都需经消毒后出厂.万一原料被某种微生物污染,都可进行有效消毒.当然,经消毒的牛奶要冷藏,并要尽早饮用.
-
像奶牛一样进食
见过田间的奶牛吗?它们吃点草,然后走几圈,再吃几口,睡觉,再吃……人们原先认为,这种少吃多餐的饮食模式是动物的饮食模式.而现在,越来越多的研究却在表明.放牧式的饮食方式对人类具有很大的益处.
-
无锡地区奶牛隐孢子虫感染情况的初步调查
隐孢子虫病是一种由隐孢子虫(Cryptosporidium)寄生于人或动物胃肠道上皮细胞内所引起的一种人兽共患性原虫病.陈义民等[1]于1986年在兰州首次发现犊牛隐孢子虫病例,1987年韩范[2]在南京首次发现人的隐孢子虫病例.但至今未见对无锡地区奶牛隐孢子虫感染情况调查.为此,为今后该地区开展奶牛隐孢子虫病综合防制提供依据而进行了初步调查.
-
挤奶人结节
患者女 , 46岁 . 职业 , 个体挤奶员 . 主诉 : 双手散在皮疹 7天 , 无症状 . 现病史 : 患者于 7天前 , 在两手掌和手背出现散在小的红色丘疹 , 无自觉症状 , 以后皮疹逐渐增大 , 约黄豆大 , 有的皮疹上少许结痂 , 发病后未诊治 . 追溯病史 , 患者在 2周前曾为一乳头上长有绿豆大水疱的奶牛挤奶 , 同时 , 据称另 3名挤奶人员也先后均曾为此奶牛挤过奶 , 且均在手部发生相同皮疹 .
-
奶粉焦“氯”大可不必
氯酸盐对健康有何影响
由于从奶牛到奶粉的全过程中有许多环节需要用到清洁的水，氯酸盐作为水中的消毒剂残留进入奶粉就难以完全避免。尽管国际上没有奶粉中氯酸盐的限量标准可供参考，但世界卫生组织专门组织了评估并确立了氯酸盐的“安全剂量”（TDI，终生每天摄入也不会有事的剂量）：每公斤体重10微克。 -
喝生奶不安全
流言：一农民现场拉两头奶牛现挤现卖牛奶，引起市民围观排队购买，认为这种纯天然未加工的原生态牛奶比市售的安全。
-
骆驼奶:潜力巨大的营养宝库
骆驼奶在北非及阿拉伯世界盛行,那里骆驼的头数远远超过奶牛的头数.国际市场上对骆驼奶的需求很大.但是,目前骆驼奶的产量却很少,全球约2000万头骆驼,每年产奶只有540万吨,其中很多都被幼骆驼喝掉了.
-
实验室感染布鲁氏菌病1例报告
拱墅区自1963年发现布鲁氏菌病(简称布病)首例病例后,每间隔1年对高危人群开展监测,至2005年前均未发现新发病例.随着杭州市牛奶联合企业公司奶牛养殖场的搬迁,我区已基本不存在高危职业人群.
-
金华市婺城区人畜布鲁菌病调查
布鲁菌病(布病)是典型的人畜共患疾病[1],由于与职业关系密切又被列为职业病.全球有123个国家和地区有不同程度的流行.布病又是世界性的传染病.我区从80年代以来未发现布病病例.随着畜间布病的输入,我区首先从奶牛中发现了布病.为了解和控制我区布病对人群的感染侵袭,于2004年9月开展了布病高危人群的监测和流行病学调查,现将结果报告如下.
