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苦参碱抑制神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖作用研究
目的:观察苦参碱对入神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖的影响,并探讨其作用机制.方法:取对数生长期SK-N-SH细胞,用磺酰罗丹明B(SRB)法检测苦参碱(0.5,1.0,2.0 g·L-1)作用24,48,72 h后SK-N-SH细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期,Western blot检测半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-9和Caspase-3蛋白的表达.结果:苦参碱对SK-N-SH细胞增殖具有明显抑制作用,且表现出剂量和时间依赖性.0.5,1.0,2.0 g·L-1苦参碱作用24,48,72 h后SK-N-SH细胞的抑制率分别为(19.06±3.17)％,(30.18±3.02)％,(38.55±6.12)％;(45.12±4.02)％,(60.45 ±5.51)％,(71.38±7.91)％;(58.91±4.36)％,(73.44±8.17)％,(88.37±4.57)％.流式细胞仪检测对照组及各浓度组凋亡率分别为(2.45±0.49)％,(12.56±2.21)％,(19.44±4.32)％,(30.12±3.35)％,与对照组比较,苦参碱组的凋亡率均显著性增高(P＜0.001);细胞周期结果显示苦参碱作用SK-N-SH细胞48 h后G0/G1期细胞明显增多(P＜0.01),S期细胞明显减少(P＜0.01).苦参碱可显著上调Caspase-9和Caspase-3蛋白表达(P＜0.01,P＜0.01).结论:苦参碱对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的增殖具有抑制作用,这种作用与其阻滞细胞周期和激活Caspase-9和Caspase-3表达进而诱导产生细胞凋亡有关.
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弓形虫感染对妊娠中期BALB/c小鼠胎盘细胞凋亡的影响
目的 探讨弓形虫感染对妊娠中期BALB/c小鼠胎盘细胞凋亡的影响. 方法 在妊娠第8 d,采用腹腔注射法建立弓形虫感染的BALB/c小鼠动物模型,于妊娠第12、14、16和18 d分批处死孕鼠,采用流式细胞技术检测胎盘细胞凋亡率,分光光度法测定半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性. 结果 随着妊娠天数的增加,实验组和正常对照组孕鼠胎盘细胞凋亡率及Caspase-3酶的活力单位均在升高,差异均具有统计学意义(P<0.01);相同妊娠天数的比较显示,除妊娠18 d的Caspase-3酶活力单位外,其余各妊娠天数的凋亡率以及酶活力单位实验组均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 妊娠中期弓形虫感染可导致孕鼠胎盘细胞凋亡明显增加,致使胎盘组织的完整性受到破坏,影响胎盘的功能,导致不良妊娠结局的发生.
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缺氧缺血对新生大鼠海马Par-4基因表达的影响及其与caspase-3活性的相关性研究
2003年1～6月,我们利用新生大鼠构建了新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)的动物模型,首次报道了 (prostate apoptosis response-4, Par-4)基因在脑缺氧缺血后海马组织中的表达及其与半胱天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)活化的相关性.
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过氧化氢体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡的实验观察
目的 探讨过氧化氢(H2O2)体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡,方法 体外培养细粒棘球蚴原头节,实验分为2组,即RPMI 1640组及RPMI 1640添加谷氨酰胺组,分别用不同浓度的H2O2诱导,使其发生细胞凋亡.用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记技术(TUNEL法)检测凋亡细胞;用过氧化物酶标记链酶卵白素(SP)染色-免疫组化法检测半胱天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)以及FAS基凶蛋白(跨膜蛋白Fas)表达情况.表达产物用二氨基联苯胺(DAB)显色,苏木素复染.TUNEL反应以细胞核黄染者为阳性细胞,caspase-1和caspase-3以细胞浆被染成棕黄色为阳性细胞,Fas 以细胞膜和细胞浆被染成棕黄色为阳性细胞,无黄染者为阴性细胞.根据每个原头节中阳性细胞数所占百分比,对原头节阳性表达程度分为4个级别,即原头节中阳性细胞数＜5%为"-",5%～25%为"+",26%～50%为"++".＞50%为"+++".实验重复2次.各组均设空白对照组.结果 RPMI 1640组,1 mmol/L H2O2诱导12 h,查见典型的TUNEL反应阳性细胞；诱导4 h,caspase-1表达86.6%为"+～++",cas pase-3表达77.8%为"+～++"；诱导8 h,caspaae-1表达86.6%为"+～++'',caspase-3表达80.0%为"+～++".均比对照组明显增加(P＜0.05).而5 mmol/L H2O2诱导4 h,caspase-1表达93.0%为"++～+++",caspase-3表达89.5%为"+～++"；诱导8 h,caspase-1表达"++～+++"降为53.2%,caspase-3表达"+～++"降为48.4%且阴性表达为46.8%,降低显著(P＜0.01).添加谷氨酰胺(终浓度为2mmol/L)组,5mmol/L H2O2诱导8 h,caspase-3 100%为"++～+++"高度阳性表达.与平行的RPMI 1640组(caspase-3表达"++～+++"为32.2%,且阴性表达为46.8%)相比,变化明显.原头节在对照组和诱导组均可见Fas阳性表达细胞,RPMI 1640组5 mmol/L H2O2诱导4 h,"+～++"表达为53.0%,对照组为20.0%；RPMI 1640添加谷氨酰胺组5 mmol/L H2O2诱导8 h,"+～++"表达为88.7%,对照组为71.4%,诱导后均有所增加(P＜0.05). 结论 H2O2可诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡.
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丙戊酸钠诱导K562细胞凋亡的机制探讨
目的 探讨丙戊酸钠(VPA)诱导K562细胞凋亡的可能机制.方法 将K562细胞分为经VPA 2.0mmol/L处理的实验组(A组)和正常对照组(B组),分别培养24、48、72 h.流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位改变,分光光度法检测半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶(Caspase)8、Caspase-9蛋白活性.结果 A组细胞凋亡率、细胞线粒体跨膜电位破坏率呈时问依赖性地增加,且明显高于B组(P<0.05);与B组相比,A组不同时间的Caspase-8、Caspase-9活性均上调(P<0.05).结论 VPA诱导K562细胞凋亡的机制可能与线粒体跨膜电位崩溃或死亡途径有关.
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藤黄酸诱导SK-MES-1肺鳞癌细胞凋亡
机制可能与上调Caspase9、10及p53蛋白的表达有关.
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DADAG诱导白血病L1210细胞凋亡
目的以小鼠白血病细胞系L1210为对象,探讨半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspases) 家族成员在二乙酰二脱水卫矛醇(diacetyldianhydrogalactitol,DADAG)诱导肿瘤细胞凋亡过程中的作用.方法 MTT法测定DADAG对L1210细胞的杀伤作用;透射电镜和流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot和Caspase-3试剂盒测定Caspase-3活性.结果与对照组相比,L1210细胞经不同浓度的DADAG( 12.0、17.2、24.5、35.0或50.0mg/L)处理72h后,其存活率,分别降至72%、63%、46%、35%和20%.DADAG 50.0mg/L处理组的凋亡率、Caspase-3活性和PARP裂解片段较对照组明显升高.Caspase-3抑制剂可部分阻断此过程,而Caspases抑制剂可完全阻断此过程.结论 Caspases家族成员在DADAG诱导L1210细胞凋亡中发挥重要的作用.
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二甲双胍对乳腺癌合并2型糖尿病患者癌组织Caspase-3、Caspase-9表达的影响
目的 观察二甲双胍对乳腺癌合并2型糖尿病患者癌组织中半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及Caspase-9表达的影响.方法 选择乳腺癌合并2型糖尿病112例,其中应用二甲双胍治疗者43例(二甲双胍组)、未用二甲双胍治疗者69例(糖癌组),单纯乳腺癌112例(单纯癌症组),采用免疫组化SP法检测癌组织中的Caspase-3、Caspase-9.结果 二甲双胍组癌组织中Caspase-3、Caspase-9表达量分别为138.24±8.68、140.21±6.34,糖癌组分别为153.43±5.59、156.17±8.25,单纯癌症组分别为112.70±4.28、121.43±6.67;三组两两比较,P均＜0.05.结论 二甲双胍可降低乳腺癌合并2型糖尿病患者癌组织中Caspase-3及Caspase-9表达,这可能是其抑制乳腺癌发展的作用机制.
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细胞焦亡与癌症关系的研究进展
细胞焦亡是一种由炎性体引起细胞裂解的程序性细胞死亡方式,其特征是质膜破裂后释放细胞内容物和促炎介质,进一步导致细胞死亡.焦亡反应依赖于半胱天冬氨酸蛋白酶caspase 1、4、-5、-11的活性,并伴随着炎性反应的发生.细胞焦亡与癌症关系密切,对焦亡机制及与癌症的关系进行深入研究,有助于了解癌症的发生、发展机制,为癌症防治提供新的方法.本文就细胞焦亡与癌症关系的研究进展作一综述.
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无精子症患者病理组织中Survivin与Caspase-3的相关性研究
目的 探讨生存素(Survivin)与半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)在无精子症睾丸中的表达相关性.方法 用免疫组织化学方法检测44例无精子症患者睾丸组织中的Survivin、Caspase-3.结果 Survivin阳性(+～+++)表达率在生精功能正常组与生精功能异常组分别为100.0%(11/11)、63.6%(21/33),两者比较差异有统计学意义(P＜0.05);Caspase-3阳性(+～+++)表达率在生精功能正常组与生精功能异常组中分别为18.2%(2/11)、39.4%(13/33),两者比较差异无统计学意义(P＞0.05).Survivin与Caspase-3表达呈负相关(r=-0.636,P＜0.05).结论 Survivin与Caspase-3的低表达可能共同参与了人睾丸精子生成过程.
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四物汤对血虚证小鼠肝细胞凋亡相关分子Caspase3及Caspase8表达的影响
目的 观察四物汤对血虚证小鼠肝细胞凋亡相关分子Caspase3及Caspase8表达的影响.方法 24只C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、给药组.以腹腔注射环磷酰胺建立血虚证模型,采用全自动血液分析仪检测外周血象,TUNEL法检测肝细胞凋亡百分率,荧光定量PCR法检测Caspase3及Caspase8 mRNA表达.Western blot检测Caspase3及Caspase8蛋白表达.结果 与模型组相比,给药组小鼠外周血红细胞数及血红蛋白含量升高(P＜0.01),肝细胞凋亡百分率下降(P＜0.01),Caspase3及Caspase8 mRNA及蛋白表达水平下降(P＜0.05,P＜0.01).结论 四物汤可改善血虚证模型小鼠外周血象,下调凋亡相关分子Caspase3及Caspase8表达,减少肝细胞凋亡.提示四物汤减少血虚证模型肝细胞凋亡的作用机制可能与其抑制Caspase3及Caspase8激活.
