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蛋白酶体抑制剂MG-132诱导L1210细胞凋亡及其机制研究
为了观察蛋白酶体抑制剂MG-132对淋巴细胞白血病细胞株L1210的致凋亡作用.探讨MG-132的致凋亡机制,分别以不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG-132处理L1210细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,应用Annexin-V和PI双染色细胞流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法测定细胞中caspase 3的活性,采用Westernblot法检测细胞NF-κB P65核蛋白的表达.结果表明:在相同的作用时间下,随着MG-132浓度的增高(0、2.5、5、10、加μmol/L),细胞增殖抑制率、凋亡率、caspase 3活性逐渐升高;Western-blot法检测显示,细胞NF-κB P65核蛋白表达水平降低.结论:蛋白酶体抑制剂能够诱导L1210细胞凋亡,其机制可能是通过下调NF-κB的表达,进一步活化caspase 3的活性而诱导凋亡.
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Caspase3在MG-132诱导白血病L1210细胞凋亡过程中的作用
目的 探讨凋亡相关的半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)在蛋白酶体抑制剂MG-132诱导小鼠淋巴细胞白血病细胞株L1210细胞凋亡中活性的变化.方法 分别以不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG-132处理L1210细胞,流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法测定细胞中Caspase3相对活性.结果 在相同的作用时间下,随着MG-132浓度的增高(0、2.5、5、10、20 μmol/L),细胞凋亡率及Caspase3的活性逐渐升高并存在剂量依赖性.结论 MG-132通过Caspase信号传导通路诱导L1210细胞凋亡并伴随Caspase3活性升高.
关键词： 蛋白酶体抑制剂MG-132 L1210细胞 凋亡 -
L1210/DDP细胞交叉耐药性及耐药机制的初步研究
目的 观察小鼠淋巴细胞白血病顺铂耐药细胞亚系(L1210/DDP)与其它抗癌药物的交叉耐药性及对耐药机制进行初步研究.方法 用拒染法测定细胞对不同抗癌药物的敏感性,用无火焰原子吸收光谱仪、谷胱甘肽还原酶循环法和微孔滤膜碱洗脱技术分别测定细胞内铂离子浓度、总谷胱甘肽含量、谷胱甘肽s-转移酶活性以及细胞DNA链间交联效应.结果 L1210/DDP对卡铂有明显的交叉耐药性,对丝裂霉素、噻替派具有部分交叉耐药性,对阿霉素和5-氟尿嘧啶等无交叉耐药性.L1210/DDP细胞内的铂离子浓度和DNA链间交联指数明显低于L1210细胞,总谷胱甘肽含量、谷胱甘肽s-转移酶活性明显高于L1210细胞.结论 L1210/DDP细胞亚系对DDP的结构类似物卡铂具有明显的交叉耐药性,其耐药机制与降低细胞内铂离子浓度、升高总谷胱甘肽含量和谷胱甘肽s-转移酶活性、降低DNA链间交联效应有关.
关键词： 肿瘤耐药性 顺铂 L1210细胞 L1210/DDP细胞 DNA交联指数 -
美洲大蠊多肽对L1210荷瘤小鼠抗肿瘤免疫的初步研究
目的 探索美洲大蠊精制物CⅡ3及相关合成短肽HFDT1在小鼠体内的抗肿瘤作用及其对免疫功能的影响.方法 取BALB/c小鼠60只,建立小鼠白血病细胞L1210荷瘤模型,随机分为5组,用美洲大蠊精制物CⅡ3高、低剂量及相关人工合成短肽HFDT1连续给药10 d,设环磷酰胺(CTX)为阳性对照,模型组给予生理盐水,另取BALB/c小鼠12只作为正常对照,评估受试药的肿瘤抑制作用及对小鼠体重的影响;然后取小鼠胸腺、脾脏、外周血,通过称重、血细胞自动分析、流式细胞术、双抗体夹心ELISA等方法分析胸腺及脾脏指数、外周血免疫细胞数量的变化、脾脏淋巴细胞及B细胞(CD45R+细胞)与T细胞(CD3+细胞)比例变化、T细胞亚群(CD3+ CD4+细胞与CD3+ CD8+细胞)的变化、小鼠血清免疫球蛋白含量的变化.结果 CⅡ3及HFDT1能抑制小鼠L1210瘤的生长且不降低荷瘤小鼠的体重;CⅡ3及HFDT1能有效的上调荷瘤小鼠的胸腺指数和脾脏指数,能显著提高荷瘤小鼠外周血免疫细胞的数量;能维持脾脏淋巴细胞含量,调节T、B淋巴细胞和CD3+ CI4+细胞与CD3+ CD8+T的比例;能够提高血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的水平.结论 美洲大蠊精制物CⅡ3及相关合成短肽HFDT1可通过增强荷瘤小鼠抗肿瘤免疫功能,发挥抗肿瘤活性,有望成为低毒有效的抗肿瘤候选药,特别是HFDT1,因能够通过人工方法大量合成,具有很大的应用前景.
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华蟾素诱导L1210细胞凋亡及作用机制的研究
目的:探讨华蟾素对离体小鼠急性淋巴细胞白血病 L1210 细胞的作用.方法:将 L1210 细胞分为对照组及药物处理组.MTT 实验检测细胞活性及增殖抑制情况 ;DNA 亲和染料 Hoechst 33258 荧光染色观察细胞核变化 ;Western Blot 检测细胞凋亡通路相关蛋白表达水平的改变.结果:华蟾素在 0.25～1.0 μM 浓度范围内即表现出显著的细胞生长增殖抑制,而且有时间和浓度依赖性 ;Hoechst 33258 染色发现高浓度的华蟾素作用 48 h,L1210 细胞即表现出凋亡形态改变 ;Western Blot 实验表明,细胞凋亡通路相关蛋白 Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9表达明显高于对照组.结论:华蟾素有诱导 L1210 细胞凋亡的作用.
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不同时间应用亚叶酸钙解救大剂量甲氨蝶呤化疗致白血病小鼠肠黏膜损伤的研究
目的 探讨不同时间亚叶酸钙(CF)对大剂量甲氨蝶呤(HD-MTX)化疗白血病小鼠肠黏膜的保护作用.方法 建立白血病小鼠模型60只,随机分为5组,各12只.A组:正常对照组;B、C、D组:实验组,分别于腹腔注射HD-MTX后24、36、42h予以CF解救;E组:空白对照组,不予CF解救,余同实验组.观察各组小鼠病死率、一般情况及空肠大体形态,标本测定肠黏膜绒毛长度和隐窝深度.结果 A组无腹泻,B、C、D、E组第2天开始出现腹泻,第3天全部出现腹泻,其中D、E组腹泻严重.A组肠壁无充血水肿,B、C、D、E组肠壁充血水肿变薄,其中E组重.A组无死亡,C、D组各死亡4只,B组死亡3只,E组死亡8只.B、C、D、E组绒毛高度和隐窝凹陷深度与A组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);B、C、D组绒毛高度与隐窝凹陷深度与E组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);B、C、D组间绒毛高度与隐窝凹陷深度比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HD-MTX化疗后42h开始应用CF解毒疗效好,不良反应小,安全可行.
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白血病细胞来源胞外体的生物学特性及其致敏DC的抗白血病效应
目的:探索白血病细胞来源的胞外体(leukemia cell-derived exosome,LEX)的生物学特性及其致敏DC的抗白血病免疫效应.方法:超速离心分离纯化BCR-ABL阳性的白血病K562细胞来源的胞外体(LEXK562),采用免疫电镜及Western blotting检测LEXK562中热激蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)及BCR-ABL的表达,采用激光扫描共聚焦显微镜及流式细胞术检测LEXK562靶向结合DC的动力学,采用LDH释放法以及小鼠模型体内实验检测LEX及其致敏DC的抗白血病免疫效应.结果:与其他细胞来源的胞外体相似,K562细胞来源的胞外体LEXK562为直径50 ～ 100 nm的囊状结构,且表达K562细胞特异性的BCR-ABL和HSP70分子.LEXK562在体外可靶向结合DC,3～4h到达高峰,并能在DC中稳定存在72 h以上.LEXK562致敏DC(DC/LEXK562)诱导的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)可有效杀伤K562靶细胞,效靶比为50:1时,其杀伤活性显著高于LEXK562诱导的CTL[(68.6±5.7)％vs(22.5±2.9)％,P＜0.01]；体内实验进一步证实,白血病L1210细胞来源的胞外体(LEXL1210)免疫后小鼠接种L1210细胞的成瘤率明显高于LEXL1210致敏DC(DC/LEXL1210)免疫小鼠的成瘤率[(54.17±8.33)％vs(16.67±4.18)％,P＜0.05].结论:LEX表达白血病细胞相关抗原,LEX体外可靶向结合DC,其致敏的DC能诱导更强的抗白血病免疫效应.
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DADAG对L1210细胞内Bcl-2及Bcl-XL蛋白表达的影响
目的:探讨二乙酰二脱水卫矛醇(diacetyldianhydrogalactitol,DADAG)对小鼠白血病L1210细胞凋亡相关蛋白表达的影响.方法:MTT法测定DADAG对L1210细胞的杀伤作用;流式细胞技术和透射电镜检测细胞凋亡;Western blot法分析细胞内Bcl-2和Bcl-XL蛋白水平的变化.结果:与对照组相比,DADAG可降低L1210细胞的存活率,且具有浓度依赖性.给药12.0、17.2、24.5、35.0和50.0 mg/L24 h后,流式细胞术周期分析结果显示,各处理组均出现凋亡峰.DADAG50.0 mg/L作用L1210细胞24 h后,靶细胞出现固缩、染色质边集;DADAG可下调Bcl-2和Bcl-XL蛋白水平,且具有时间依赖性.结论:DADAG可能通过抑制Bcl-2及Bcl-XL蛋白的表达而诱导L1210细胞发生凋亡.
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狗舌草黄酮类化合物对3种肿瘤细胞的药物敏感试验
用MTT法检测狗舌草黄酮类化合物对3种不同肿瘤细胞的药物敏感试验表明,狗舌草黄酮类化合的不同浓度均对肝癌细胞Hep-G2不敏感;100μg/ml时对肝癌细胞HCC为中度敏感;在10μg/ml和100μg/d时对淋巴性白血病细胞L1210分别为中度敏感和高度敏感,且半数致死浓度(IG50)为7.756μg/ml.表明狗舌草黄酮类化合物对L1210有很强的抑制作用.
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DADAG诱导白血病L1210细胞凋亡
目的以小鼠白血病细胞系L1210为对象,探讨半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspases) 家族成员在二乙酰二脱水卫矛醇(diacetyldianhydrogalactitol,DADAG)诱导肿瘤细胞凋亡过程中的作用.方法 MTT法测定DADAG对L1210细胞的杀伤作用;透射电镜和流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot和Caspase-3试剂盒测定Caspase-3活性.结果与对照组相比,L1210细胞经不同浓度的DADAG( 12.0、17.2、24.5、35.0或50.0mg/L)处理72h后,其存活率,分别降至72%、63%、46%、35%和20%.DADAG 50.0mg/L处理组的凋亡率、Caspase-3活性和PARP裂解片段较对照组明显升高.Caspase-3抑制剂可部分阻断此过程,而Caspases抑制剂可完全阻断此过程.结论 Caspases家族成员在DADAG诱导L1210细胞凋亡中发挥重要的作用.
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二乙酰二脱水卫矛醇对白血病L1210细胞生长的抑制作用
目的观察二乙酰二脱水卫矛醇(diacetyldianhydrogalactitol,DADAG)对小鼠白血病细胞株L1210细胞的作用,并初步探讨其杀伤肿瘤细胞的机制.方法采用MTT法和平板集落形成法检测细胞的生长情况;[3H]-TdR掺入法检测DADAG对L1210细胞DNA合成的影响.结果L1210细胞经不同浓度的DADAG(12.0、17.2、24.5、35.0、50.0 mg·L-1)处理72h后,其存活率与对照组相比,分别降至72%、63%、46%、35%和20%.平板集落形成实验显示DADAG半数集落形成抑制浓度为18.5mg·L-1.DADAG12.0、17.2、24.5、35.0、50.0mg·L-1作用L1210细胞8 h后的[3H]-TdR掺入率分别为93.6%、83.9%、42.6%、10.1%和5.7%.结论DADAG对L1210细胞的抑制作用与抑制该细胞DNA合成有关.
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二乙酰二脱水卫矛醇抑制白血病L1210细胞增殖并诱导其凋亡
目的探讨二乙酰二脱水卫矛醇(DADAG)诱导小鼠白血病L1210细胞凋亡.方法MTT法观察DADAG对L1210细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪和透射电镜检测细胞凋亡.结果DADAG抑制L1210细胞的增殖且呈剂量依赖性;透射电镜发现DADAG50 0 mg·L-1作用24h后,靶细胞出现固缩、染色质边集;给药12.0、17.2、24.5、35.0和50.0 mg·L-124 h后,流式细胞术周期分析结果显示,各处理组均出现凋亡峰.结论DADAG抑制白血病L1210细胞增殖并诱导其凋亡.
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二乙酰二脱水卫矛醇抗脑白血病的作用及机制
目的研究二乙酰二脱水卫矛醇(1,2:5,6-dianhydro-3,4-diacetylgalactitol,DADAG)的抗脑白血病作用及机制.方法用小鼠脑内移植瘤模型、MTT法和DNA掺入法,观察DADAG对小鼠脑内移植瘤和体外白血病L1210细胞的作用,并探讨作用机制.结果 DADAG对DBA/2小鼠脑内移植白血病L1210细胞有明显的抑制作用;对体外白血病L1210细胞同样有很强的抗增殖作用,其IC50值为24.6mg·L-1.DADAG不可逆地抑制L1210细胞内DNA的生物合成.结论 DADAG的抗脑白血病作用与其抑制白血病细胞的增殖及DNA合成密切相关.
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二乙酰二脱水卫矛醇对小鼠白血病L1210细胞增殖的影响
目的研究二乙酰二脱水卫矛醇(1,2:5,6-dianhydro-3,4-diacetylgalactitol,DADAG)的抗脑白血病作用及机制.方法用小鼠脑内移植瘤模型、MTT法、DNA掺入法、流式细胞仪和Western blot法,观察DADAG对小鼠脑内移植瘤和体外白血病L1210细胞的作用,并探讨作用机制.结果 DADAG对DBA/2小鼠脑内移植白血病L1210有明显的抑制作用;对体外白血病L1210细胞同样有很强的抗增殖作用,其IC50值为24.6 mg *L-1.DADAG不可逆地抑制L1210细胞内DNA的生物合成.DADAG 24mg*L-1处理L1210细胞6 h后,细胞发生G2/M周期阻滞,24h后达高峰.细胞周期素B1蛋白水平在DADAG处理24h后开始下降,而磷酸化的细胞周期依赖性激酶CDK1在DADAG处理6h后开始上调,并呈时间依赖性.结论 DADAG的抗脑白血病作用与其抑制白血病细胞的增殖密切相关.
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乙酰二脱水卫矛醇对LI210细胞Caspase-3活性的影响
目的:探讨半胱氨酶-3(Caspase-3)在二乙酰二脱水卫矛醇(diacetyldianhydrogalactitol,DADAG)诱导小鼠白血病L1210凋亡过程中的作用.方法:MTT法观察DADAG对L1210细胞的生长抑制作用;透射电镜检测细胞凋亡;Caspase-3试剂盒测定细胞内Caspase-3的酶活性.结果:DADAG对L1210细胞有较强的体外增殖抑制作用,其IC50值为24.6 mg/L;DADAG可诱导L1210细胞发生凋亡及时间依赖性地升高Caspase-3酶活性.结论:Caspase-3在DADAG诱导的细胞凋亡中可能起重要作用.
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二乙酰二脱水卫矛醇对白血病L1210细胞增殖的抑制作用
目的探讨二乙酰二脱水卫矛醇(diacetyldianhydrogalactitol,Dadag)对小鼠白血病细胞株L1210细胞的增殖抑制作用及其机制.方法采用MTT比色法、平板集落形成实验和Hoechst 33258荧光染色法,分析Dadag对L1210细胞的生长抑制和凋亡影响.结果Dadag对L1210细胞有浓度依赖性的细胞毒性作用,抑制肿瘤细胞集落形成,并可诱导L1210细胞发生凋亡.结论Dadag对白血病L1210细胞的增殖抑制作用与其诱导肿瘤细胞发生凋亡密切相关.
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三尖杉酯碱对HL60和L1210细胞核DNA结构的影响
用国产抗肿瘤药物三尖杉酯碱处理HL60和L1210细胞,探讨药物对两种不同的白血病细胞以及在不同条件下培养的同种白血病细胞核DNA结构的影响.DNA凝胶电泳结果表明:(1)0.2μg/ml HT作用2 h的HL60细胞和HT作用2～24 h的L1210细胞有明显的DNA ladder.(2)HT处理6～24 h的HL60细胞、在DBA/2纯种小鼠体内培养的被HT处理不同时间的L1210细胞及所有对照细胞无DNA ladder.(3)HT处理24 h的HL60细胞和HT处理12 h的白血病小鼠体内的L1210细胞核DNA断裂成碎片,在琼脂糖凝胶上呈弥散状分布.
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当归酰天芥菜定对 L1210,HepG2和HCC细胞的抑制作用
目的: 研究当归酰天芥菜定(AH)的抗肿瘤活性及机制. 方法: 通过细胞生长曲线的绘制,分析AH对L1210细胞的抑制作用;通过MTT比色法,测定AH对L1210,HepG2和HCC细胞的抑制率;通过流式细胞术(FCM)检测AH对L1210细胞周期的影响. 结果: 在AH作用下,L1210细胞生长曲线斜率和大生长密度降低. AH 80 mg*L-1对L1210细胞的抑制率为18.18%;AH 320 mg*L-1对HepG2和HCC细胞抑制率分别为12.28%和10.24%. FCM检测表明,AH 80 mg*L-1作用24 h后,L1210细胞的G2-M期细胞明显增加(P<0.01). 结论: AH对L1210细胞有一定的抑制作用,对HepG2和HCC细胞抑制作用较差. AH对L1210细胞的抑制作用发生在细胞周期的G2-M期.
