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当归四逆汤防治奥沙利铂致慢性周围神经病变
目的:通过观察化疗致周围神经病变(CIPN)大鼠疼痛行为学变化、脊髓N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)的表达,探讨当归四逆汤对奥沙利铂致CIPN的防治作用.方法:52只成年Wistar雌性大鼠随机分为5组,正常组、模型组、甲钴胺组(104 μg·kg-1)、当归四逆汤低、高剂量组(5.59,22.36 g·kg-1).造模前预防性给药7d,当归四逆汤高、低剂量组5 mL·kg-1ig,1次/d;甲钴胺组ip,2次/周；造模过程中继续给药,持续50 d.除正常组其余4组按照奥沙利铂4 mg· kg-12次/周ip共8次.给药期间每3日称体重；每周测定机械性缩足阈值(MWT).给药结束后,处死大鼠,剖取腰段L2～4脊髓、L4～5背根神经节(DRG),实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测L2 ～4脊髓NR2B mRNA水平.结果:大鼠体重d40后当归四逆汤低、高剂量组体重均上升,高于模型组及甲钴胺组(P＜0.01)；模型组与正常组比较,MWT明显下降(P＜0.05),当归四逆汤低、高剂量组、甲钴胺组与模型组比较MWT明显增高(P＜0.05)；模型组NR2B mRNA水平显著高于正常组(P＜0.05),当归四逆汤低、高剂量组可显著下调模型大鼠NR2B mRNA水平(P＜0.05),甲钴胺组效果不明显.结论:当归四逆汤组使CIPN大鼠L2～4脊髓NR2B mRNA水平减少,且与行为学表现有明显的相关性,当归四逆汤可能在CIPN的防治中起重要作用.
关键词： 奥沙利铂 CIPN N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基 当归四逆汤 -
针刺对血管性痴呆大鼠海马突触传递相关信号分子的影响
目的：观察针刺对血管性痴呆（VD）大鼠海马突触传递相关信号分子蛋白激酶C（PKC）、钙调蛋白激酶（CaMKⅡ）、N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基（NR2B）的影响，探讨针刺治疗VD的分子机制。方法采用栓子注入方法制作多发性脑梗死痴呆模型，实验大鼠随机分为正常组、模型组、针刺组和非穴组。针刺组针刺“足三里”治疗，非穴组于肋下髂嵴上10 mm（非穴）处针刺治疗，正常组和模型组大鼠施以与针刺组和非穴组相同强度的捉抓刺激。治疗结束后，ELISA检测PKC活性，Western blot检测CaMKⅡ蛋白表达；免疫组化检测CA1、CA3及DG区NR2B蛋白表达。结果 VD大鼠海马PKC活性、NR2B蛋白表达较正常组显著下降（P＜0.01）；针刺治疗后，PKC活性明显上升（P＜0.05），NR2B蛋白表达水平有上升的趋势。各组CaMKⅡ蛋白表达无明显变化。结论针刺增强海马神经元突触传递信号分子PKC活性，这可能是其治疗VD的重要分子靶点之一。
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四慧合剂对疲劳模型大鼠学习记忆及海马NMDA受体亚基NR2A 、NR2B及EphB2受体表达的影响
目的 研究疲劳模型大鼠学习记忆及海马N-甲基-D-天冬氨酸 (N-methyl D-aspartate,NMDA)受体NR2A 、NR2B亚基及EphB2受体表达的变化,并观察四逆散、生慧汤、四慧合剂对其影响.方法 采用多平台法,进行连续睡眠剥夺168 h复制中枢疲劳模型,将实验动物随机分为正常对照组、模型组、四逆散组、生慧汤组、四慧合剂组,每组10只;分别在睡眠剥夺6、30、54、78、102、126、150 h时间点灌胃给药及蒸馏水.应用Y迷宫观察大鼠学习记忆能力的变化,并使用实时荧光定量PCR(Real-time PCR) 技术定量分析大鼠海马NR2A、NR2B亚基及EphB2受体mRNA表达的变化.结果 与正常对照组比较,模型组大鼠Y迷宫正确百分率明显下降(P<0.05),海马NR2B和EphB2的mRNA表达明显减少(P<0.01),NR2A表达无明显变化.与模型组比较,四慧合剂组能明显提高大鼠迷宫成绩和海马NR2A、EphB2的mRNA表达(P<0.01),而四逆散组、生慧汤组差异无统计学意义.与四逆散组比较,四慧合剂组EphB2的mRNA表达明显增多(P<0.01).生慧汤组较模型组亦能明显增加NR2A的mRNA表达(P<0.01).结论 中枢疲劳能导致大鼠迷宫成绩下降和海马NR2B和EphB2基因表达下调.四慧合剂能增加大鼠的学习记忆能力,可能是通过上调大鼠海马NR2B和EphB2的mRNA表达所致.
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神经病理性疼痛引起成年大鼠空间记忆损害和内侧前额叶的NMDA受体NR2B亚基下调表达
目的:探讨神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)引起的成年大鼠的空间记忆障碍与内侧前额叶(medial prefrontal cortex,mPFC) NMDA受体NR2B亚基表达的关系.方法:选择健康的Wiser雄性大鼠50只,随机分为5组(每组10只),分别为假手术组(sham operated group,SO组),神经病理性疼痛模型组(neuropathic pain group,NP组),生理盐水组(NS组),Ro25-6981组(Ro组)和CX546组(CX组).其中,NS组、Ro组和CX组是在NP模型基础上分别在mPFC区注射生理盐水、Ro25-6981和CX546.采用单侧坐骨神经主干慢性压迫法(chronic constriction injury,CCI)制备NP模型.SO组和NP组分别于术后第7d、14d、21 d和28 d测量机械缩足阈(mechanical withdrawalthreshold,MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL).术后第21～28 d,进行八臂迷宫实验.术后第24 d,利用立体脑定位仪将生理盐水、Ro25-6981或CX546分别注射到mPFC,制备成NS组、Ro组或CX组动物模型.迷宫实验完成后立即处死大鼠,通过RT-PCR、免疫荧光和Western Blotting方法测定内侧前额叶的NR2B亚基mRNA和蛋白表达水平.结果:与SO组比较,NP组的MWT和TWL降低(P＜0.05).与SO组比较,NP组的空间记忆功能明显减退(P＜0.05).与NS组比较,Ro组的空间记忆功能明显减退(P＜0.05),CX组的空间记忆功能明显改善(P＜ 0.01).与SO组比较,NP组与NS组的NR2B亚基mRNA和蛋白表达均明显降低(P＜0.05).与NS组比较,Ro组的mRNA和蛋白表达明显降低(P＜0.05),而CX组的mRNA和蛋白表达明显升高(P＜0.01).结论:NP所致空间记忆障碍可能与mPFC区的NR2B亚基下调表达有关.
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2型糖尿病大鼠早期认知功能改变及海马磷酸化N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基、Wnt3a和去整合素金属蛋白酶10表达的研究
目的观察T2DM大鼠早期认知功能改变及海马磷酸化N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基 (p-NR2B)、Wnt3a和去整合素金属蛋白酶10(ADAM10)的表达变化.方法将40只健康雄性SD大 鼠采用随机数字表法分为对照组(Con,n=20),糖尿病组(DM,n=20).Con组以普通饲料喂养8周后单 次空腹腹腔注射柠檬酸缓冲液.DM组以高脂高糖喂养8周诱导IR后腹腔小剂量注射STZ 35 mg/kg, 3 d后测血糖,血糖≥16. 7 mmol/L确诊T2DM.造模成功后10、20 d分别通过Y迷宫、八臂迷宫检测认 知功能改变,17、21、28 d取大鼠海马,Western blot测定海马p-NR2B、Wnt3a和ADAM10的表达.结 果与Con组比较,DM组在Y迷宫自发活动次数为(6. 9±3. 2)次,自主选择率(SA％)为(42. 2± 29. 5)％,差异有统计学意义(P<0. 05);DM组在八臂迷宫的1、3、6 d测试时间分别为(459. 2±143. 5)s、 (357. 3±131. 7)s、(274. 0±145. 1)s,较 Con组延长(P<0. 05),记忆错误(WME)、参考记忆错误(RME) 和总记忆错误(TE)比较,差异无统计学意义(P>0. 05).与Con组比较,DM组各时间点海马中 p-NR2B、Wnt3a和 ADAM10的表达降低(P<0. 05).结论 T2DM大鼠海马中 p-NR2B、Wnt3a 和 ADAM10的表达减少可能参与其早期认知功能的下降.
关键词： 糖尿病 2型 海马 N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基 Wnt3a 去整合素金属蛋白酶10 认知 -
鞘内注射丹参酮ⅡA对坐骨神经慢性压迫性痛大鼠脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸受体表达的影响
目的:研究丹参酮ⅡA对坐骨神经慢性压迫性痛大鼠脊髓背角内N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)表达的影响,探讨丹参酮ⅡA的镇痛机制.方法:SD雄性大鼠随机分为假手术组和模型组.模型组又分为生理盐水组和处理组.模型组在手术当日及术后每日在大鼠鞘内注射生理盐水0.1ml和丹参酮ⅡA20mg/kg,连续注射14d.检测各组大鼠在手术前及术后14d的机械痛阈和热痛阈;术后第14天,免疫组织化学检测大鼠脊髓背角内NR2B的表达.结果:与假手术组比较,生理盐水组大鼠的机械痛阈和热痛阈明显降低,NR2B的表达增多;与生理盐水组比较,处理组的机械痛阈和热痛阈明显升高,脊髓背角内NR2B的表达下降,差异均有统计学意义.结论:鞘内注射丹参酮ⅡA对坐骨神经慢性压迫性痛模型大鼠的镇痛作用可能与降低脊髓背角内NR2B的表达有关.
关键词： 丹参酮ⅡA 脊髓背角 N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基 坐骨神经 慢性痛 -
脑缺血/再灌对蒙古沙土鼠海马突触体酪氨酸磷酸化的影响
用蒙古沙土鼠双侧颈总动脉结扎(BCAO)前脑缺血模型, 研究缺血/再灌对海马突触体蛋白酪氨酸磷酸化的影响及NMDA受体(NR)非竞争性拮抗剂氯胺酮(ketamine, KT)、 L-型电压门控钙离子通道(L-type voltage gated calcium channel, L-型VGCC)拮抗剂硝苯吡啶(nifedipine, ND)及非NR拮抗剂6,7-二硝基喹恶啉上卫四(6,7-dinitroquinoxaline-2,3-dione, DNQX)对其变化的影响.结果如下: (1) 缺血15 min导致蛋白酪氨酸磷酸化水平明显下降, 再灌引起包括180 kD蛋白在内的多种蛋白酪氨酸磷酸化水平快速(再灌15 min)而持续(至少48 h)升高;(2) 脑缺血15 min, 再灌6 h, 蛋白酪氨酸磷酸化达高水平, 180 kD蛋白酪氨酸磷酸化水平为假手术对照组的1.8倍;(3) 缺血前腹腔注射KT或ND, 对缺血/再灌诱导180 kD等蛋白酪氨酸磷酸化水平升高均有拮抗作用, 但DNQX无此作用;(4) 免疫沉淀和免疫印渍证明, 180 kD 蛋白为NR2B, 且其蛋白表达在脑缺血/再灌时没有变化. 结果提示, (1) 脑缺血/再灌诱导NR2B等蛋白酪氨酸磷酸化增加, 激活NR通道, 加重神经元损伤;(2) NR通道不仅可被酪氨酸磷酸化调节, 而且NR通道和L-型VGCC都参与了脑缺血/再灌对NR2B等蛋白酪氨酸磷酸化水平的调节, 两种通道拮抗剂可能对防治缺血性脑损伤有一定作用.
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基于多肽阵列技术构建穿膜肽靶向抑制Fyn与突触后致密物蛋白95相互作用的实验研究
目的 探讨基于多肽阵列技术合成的穿膜肽离体条件下抑制非受体酪氨酸激酶Fyn与突触后致密物蛋白(postsynaptic density protein,PSD)95相互作用,进而抑制含N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(N-methyl D-aspartate receptor subtype 2B,NR2B)的N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl D-aspartate receptor,NMDAR)过度磷酸化,减轻慢性疼痛的可行性.方法 ①通过多肽阵列技术的ovedapping平台确定Fyn的SH2结构域与PSD95的PDZ3结构域相互作用的结合基序,合成含此结合基序的短肽FynP,并与人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)-Tat蛋白转导结构域连接形成可进入细胞的穿膜肽FynP-Tat,同时合成乱序穿膜肽mFynP-Tat.②原代培养SD大鼠胎鼠脊髓背角神经元,通过免疫荧光检测不同浓度组(10、20、30 μmol/L)多肽内化细胞的效率.③用CCK8法检测不同浓度(10、20、100μmol/L)穿膜肽分别孵育神经细胞(6、24、48 h)的细胞毒性.④将神经细胞分为穿膜肽组(FynP-Tat组)、乱序穿膜肽组(mFynP-Tat组)和PBS组(对照组)进行孵育,用谷胱甘肽转移酶(glutathione S-transferase,GST) pull-down和Western blot验证抑制Fyn与PSD95相互作用的效率. 结果 ①通过overlapping确定Fyn与PSD95相互作用的结合基序为KGAYSL.②与FynP-Tat 10 μmol/L组[(77.3±1.4)％]比较,FynP-Tat 20 μmol/L组[(91.5±2.0)％]和FynP-Tat 30 μmol/L组[(93.4:2.2)％]的内化效率较高,差异有统计学意义(P＜0.05);与mFynP-Tat 10μmol/L组[(75.0±3.6)％]比较,mFynP-Tat 20 μmol/L组[(91.4±1.3)％]和mFynP-Tat 30 μmol/L组[(92.7±2.1)％]的内化效率较高,差异有统计学意义(P＜0.05);③与FynP-Tat(100 μmol/L,6h)组[(82.5±3.0)％]比较,FynP-Tat(100 μmol/L,24 h)组和FynP-Tat(100 μmol/L,48 h)组细胞活力[(75.1±1.5)％和(68.5±1.2)％]降低(P＜0.05);与mFynP-Tat(100 μmol/L,6h)组[(83.3±2.0)％]比较,mFynP-Tat(100 μ mol/L,24 h)组和mFynP-Tat(100 μmol/L,48 h)组细胞活力[(75.6±2.9)％和(68.1±0.7)％]降低(P＜0.05);④与mFynP-Tat组、PBS组比较结果显示,FynP-Tat能够抑制PSD95结合到GST-Fyn融合蛋白上(P＜0.05),但不会抑制PSD95结合到GST-NR2B融合蛋白上(P＞0.05). 结论 离体条件下,基于多肽阵列技术合成的穿膜肽FynP-Tat能够进入神经细胞,细胞毒性低,可有效抑制Fyn与PSD95的相互作用.
关键词： 蛋白转导结构域 N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基 多肽阵列 结合基序 -
丁苯酞对db/db小鼠学习记忆及海马NR2B受体的影响
目的 观察丁苯酞对2型糖尿病db/db小鼠学习记忆及海马N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)表达的影响,探讨丁苯酞改善糖尿病认知功能障碍的机制.方法 将16只db/db小鼠按随机数字表法分为丁苯酞干预组(L-NBP组,n=8)和糖尿病对照组(DM组,n=8),同窝出生的db/m小鼠作为正常对照组(NC组,n=10).适应性喂养1周后,L-NBP组每日以溶于植物油中的丁苯酞灌胃,剂量为120 mg·kg-1,DM组与NC组则给予同等剂量的植物油灌胃,干预6周后,进行指标观察.应用Morris水迷宫检测小鼠的学习记忆能力.实时荧光定量PCR检测NR2B mRNA的表达情况.结果 与NC组比较,DM组小鼠逃避潜伏期延长和平均探索次数减少(P＜0.05),而L-NBP组小鼠较DM组上述学习记忆成绩明显改善(P＜0.05);与NC组相比,DM组和L-NBP组小鼠海马CA1区NR2B mRNA表达水平明显下降(P＜0.05),而L-NBP组较DM组NR2B mRNA表达水平明显增高(P＜0.05).结论 丁苯酞可改善糖尿病引发的认知功能障碍,推测其机制可能与上调海马NP,2B的表达有关.
关键词： 丁苯酞 糖尿病 认知功能障碍 db/db小鼠 N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基 -
脊髓钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ-NR2B信号通路参与小鼠骨癌痛的形成
目的 探讨鞘内注射钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ( CaMKII)抑制剂KN93对骨癌痛小鼠脊髓NR2B蛋白表达的影响及机制.方法 SPF级雄性C3 H/HeJ小鼠36只,采用随机数字表法分为3组:假手术组(S组n=8)、骨癌痛组(BP组n=8)和KN93组(K组n=20).BP组和K组采用股骨远端骨髓腔注射20μl含NCTC 2472纤维肉瘤细胞的α-MEM的方法制备骨癌痛模型,S组骨髓腔注入不含NCTC 2472细胞的同体积α-MEM.K组于接种肿瘤细胞后14d鞘内注射溶于20％ DMSO的KN93 60 nmol/5μl,BP组和S组鞘内注射20％ DMSO 5μl.分别于肿瘤细胞接种前1d、鞘内注射KN93或溶媒前1 h、注射后1,2,4,24h(T0～5)时各组随机取8只小鼠,采用von Frev丝测定机械痛阈,并于各时点随机取3只小鼠处死取脊髓L3～5节段,采用Western blot法测定NR2B蛋白的表达.结果 与S组[机械痛阈(1.78 ±0.31)g、NR2B(0.33 ±0.04)]相比,除K组T3时机械痛阈差异无统计学意义(P＞0.05)外,BP组[(0.50±0.11)g]和K组[ (0.52 ±0.10)g]机械痛阈均降低(P＜0.05),BP组(1.78±0 34)和K组T2～5[分别为(1.11±0.14)、(0.73±0.03)、(1.11±0 15)、(1.89±0.32)]脊髓组织NR2B蛋白表达均上调(P＜0.05)；与BP组相比,K组T2～4机械痛阈升高,NR2B蛋白表达下调；与给药前T1相比,除K组T2～4机械痛阈升高外,各组各时点该指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 鞘内注射KN93缓解小鼠骨癌痛的同时降低小鼠脊髓NR2B蛋白表达,CaMKII-NR2B信号通路可能参与了骨癌痛的形成.
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丁苯酞对酒精依赖大鼠海马硫化氢含量及NMDA受体2B亚基表达的影响
目的 研究丁苯酞(NBP)对洒精依赖大鼠海马硫化氢(H2S)含量及N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)表达的影响.方法 84只SD雄性大鼠随机分为6组,除正常组外,各组饮含6%(V/V)酒精水溶液28 d,饮6%(V/V)酒精水溶液14 d后,NBP低、中、高剂量组大鼠灌胃不同剂量NBP,检测戒断症状评分、海马组织H2S含量、胱硫醚β-合酶(CBS)活性以及NR2B的表达.结果 NBP中剂量组大鼠戒断症状评分[(12.27±1.19)分]、H2S含量[(30.25±8.82)nmol/g]、CBS活性[(72.44 ±7.46)nmol·g-1·h-1]及NR2B mRNA的表达(19.47 ±0.86)与实验对照组大鼠戒断症状评分[(14.09±2.21)分]、H2S含量[(44.50±6.65)nmol/g]、CBS活性[(79.06±4.57)nmol·g-1·h-1]及NR2B mRNA的表达(29.13±1.39)相比均降低,差异有显著性(P<0.05).NBP高剂量组大鼠戒断症状评分[(12.18±1.08)分]、H2S含量[(33.00±5.38)nmol/g]、CBS活性[(67.81±9.37)nmol·g-1·h-1]及NR2B mRNA的表达(23.12 ±1.86)与实验对照组大鼠相比均降低,差异有显著性(P<0.05).结论 NBP能够减轻酒精依赖大鼠的戒断症状,可能与NBP抑制H2S/CBS体系表达及抑制NR2B mRNA表达有关.
关键词： 丁苯酞 酒精依赖 硫化氢 N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基 -
艾芬地尔鞘内注射对骨癌痛模型小鼠痛行为的改善作用
目的 在小鼠骨癌痛模型上观察鞘内注射N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)拮抗剂艾芬地尔的镇痛效果.方法 将含2×105个纤维肉瘤细胞NCTC 2472的小必需培养基(α-MEM)注射到C3H/HeJ小鼠右侧股骨远端骨髓腔,制作骨癌痛模型(T组).同时设假手术组(S组,n =10),注入不含肿瘤细胞的α-MEM.所有小鼠均于接种前1 d,接种后第3,5,7,10,14天检测痛行为学指标,包括自发性抬足次数、机械痛缩足阈值(PWMT)和热痛缩足潜伏期(PWTL).骨癌痛模型制作成功的T组小鼠在接种后第14天,进一步分为艾芬地尔 2.5 μg、5.0 μg、10.0 μg组(I1、I2、I3 组,n =10)和对照组(C组,n =10),I1～I3组鞘内注射相应剂量的艾芬地尔,C组及S组给予溶媒,注药体积均为5.0 μl,鞘内注射后2 h、12 h、24 h再进行行为学检测.结果 与S组[(2.44±0.79)次]和术前基础值[(2.20±0.85)次]相比,肿瘤细胞接种后第14天T组小鼠自发性抬足[(13.16±1.78)次]显著增多( P ＜0.05),PWMT[(0.47±0.19)g]较S组[(1.70±0.31)g]和基础值[(1.83±0.23)g]降低( P ＜0.05),PWTL[(10.01±1.42)s]较S组[(17.62±1.07)s]和基础值[(18.32±1.57)s]缩短( P ＜0.05);给药后2 h、12 h,与C组及14 d 给药前比较,I2和I3组自发性抬足次数减少( P ＜0.05),PWMT增高( P ＜0.05),PWTL延长( P ＜0.05),且I3组比I2组对痛行为学的改善更显著( P ＜0.05);I1组给药后痛行为学无明显变化( P ＞0.05).结论 鞘内注射艾芬地尔有效改善骨癌痛小鼠的痛行为学反应.
关键词： 艾芬地尔 N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基 骨癌痛 脊髓 -
N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基拮抗剂对帕金森病运动并发症大鼠行为及相关信号蛋白的影响
目的 探讨N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)拮抗剂CP-101.606对帕金森病运动并发症大鼠的行为效应及相关信号蛋白的影响.方法 将6-羟多巴胺立体定向注射于大鼠前脑内侧束建立帕金森病(PD)动物模型.对模型成功的PD大鼠接受每日2次左旋多巴(每公斤体质量50mg左旋多巴加每公斤体质量12.5mg苄丝肼)腹腔注射,持续22d.在第23天左旋多巴注射前,PD大鼠给予CP-101.606处理.评估旋转反应时间,采用蛋白印迹法检测纹状体区磷酸化NR2B、磷酸化钙调激酶Ⅱ( CaMKⅡ)及磷酸化谷氨酸受体1( GluR1 S831)表达情况.结果 NR2B拮抗剂CP-101.606逆转了左旋多巴所诱导的PD大鼠旋转时间的缩短；左旋多巴长期作用后引起磷酸化NR2B及下游相关信号蛋白磷酸化CaMKⅡ与磷酸化GluR1 S831升高至(145.3±6.5)％、(132.5±5.7)％及(105.6±6.3)％,而CP-101.606能下调三者磷酸化水平,其表达量分别为(102±4.9)％、(98.4±3.9)％与(49.5±4.2)％.结论 NR2B磷酸化可能通过介导N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体功能上调并激活其下游相关信号蛋白参与了帕金森病运动并发症的发生,抑制NR2B的药物可能是治疗PD运动并发症的一种新的治疗方式.
关键词： 帕金森病 运动并发症 N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基 -
亚急性1－溴丙烷吸入对雄性大鼠海马区SYP、GluR2、NR2B 蛋白表达影响
目的：探讨亚急性1－溴丙烷（1－BP）吸入染毒对雄性大鼠大脑海马区突触特异性标志物突触素（ SYP）、谷氨酸受体2亚基（GluR2）、N－甲基－D－天冬氨酸受体2B亚基（NR2B）蛋白表达的影响。方法将48只无特定病原体级成年雄性Wistar大鼠按体质量随机分为对照组和低、中、高剂量组4组，每组12只。采用动式吸入染毒法，对照组给予新鲜空气，各剂量组分别予质量浓度为1250、2500和5000 mg／m31－BP吸入，每天染毒6 h，每周染毒5 d，连续4周。染毒结束后处死大鼠，取出全脑，分离大脑（含海马组织）、脑干和小脑，分别采用实时荧光定量聚合酶链反应和免疫印迹法检测大鼠海马组织SYP、GluR2、NR2B的mRNA和蛋白相对表达水平。结果高剂量组大鼠于染毒第3周时出现反应迟钝和后肢肌力下降等表现。高剂量组大鼠染毒第1～4周体质量均低于同时间点对照组（P＜0．01）。高剂量组大鼠全脑、大脑和脑干质量均低于对照组（P＜0．05）。高剂量组大鼠海马组织海马3区和齿状回区可见少量神经元细胞坏死。各组大鼠海马组织SYP、GluR2和NR2B的mRNA相对表达水平分别比较，差异均无统计学意义（P＞0．05）。各组大鼠海马组织SYP蛋白相对表达水平比较差异无统计学意义（P＞0．05）；高剂量组大鼠海马组织GluR2蛋白相对表达水平低于对照组（P＜0．05），NR2B蛋白相对表达水平高于对照组（P＜0．05）。结论大鼠海马组织GluR2和NR2B蛋白可作为1－BP中枢神经毒性的生物标志物，但其具体的生理意义尚需进一步研究。
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脊髓NRSF在小鼠骨癌痛形成中的作用及其与NR2B表达的关系
目的 探讨脊髓神经元限制性沉默因子(NRSF)在小鼠骨癌痛形成中的作用及其与N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)表达的关系.方法SPF级成年雄性C3H/HeJ小鼠96只采用随机数字表法分为4组:骨癌痛组(n=24)、NRSF反义脱氧寡核苷酸组(AS-ODN组,n=24)、人工脑脊液组(n=24)和假手术组(n=24).前3组将含2×105个NCTC2472纤维肉瘤细胞的混悬液(含低有效的 α-MEM液体培养基)接种至小鼠右侧股骨远端骨髓腔制备骨癌痛模型,假手术组接种不含NCTC2472纤维肉瘤细胞的 α-MEM液体培养基.AS-ODN组于接种前及接种后2 d、4 d和6 d鞘内注射含AS-ODN 10μg的人工脑脊液5μL,人工脑脊液组注射等体积人工脑脊液.(1)各组小鼠于接种前(T0)及接种后5 d(T1)、7 d(T2)、10 d(T3)和14 d(T4)时分别测定机械缩足阈值(PWMT)和热刺激缩足反应潜伏期(PWTL).(2)各组小鼠于T1、T2、T3和T4时间点分别处死取脊髓腰膨大,采用Western blotting检测NRSF及NR2B蛋白表达.结果(1)与假手术组比较,骨癌痛组及人工脑脊液组T2、T3、T4时间点PWMT明显降低,T3、T4时间点PWTL明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);AS-ODN组T1、T2、T3、T4时间点PWMT及PWTL均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05).与骨癌痛组比较,AS-ODN组T1、T2时间点PWMT及PWTL均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05).(2)与假手术组比较,骨癌痛组、AS-ODN组及人工脑脊液组T1、T2、T3、T4时间点NR2B蛋白表达明显增高,NRSF蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05).与骨癌痛组比较,AS-ODN组T1、T2时间点NR2B蛋白表达明显增高,NRSF蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论脊髓NRSF在小鼠骨癌痛形成中具有重要作用,其对NR2B的调控作用参与了骨癌痛的形成.
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下调PTEN基因对慢性偏头痛大鼠NR2B亚基酪氨酸磷酸化和一氧化氮的影响
目的 利用RNAi重组腺病毒下调第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)的表达,探讨PTEN基因对慢性偏头痛大鼠三叉神经脊束核尾核(TNC)内N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基酪氨酸磷酸化(NR2B-pTyr)蛋白表达水平和一氧化氮(NO)含量的影响.方法 将SD雄性大鼠分为对照组、对照干预组、模型组和模型干预组.硬脑膜滴注炎性汤(IS)建立慢性偏头痛大鼠模型,TNC注射AdR-siPTEN,7d后观察大鼠行为学改变,检测大鼠TNC内PTEN、NR2B-pTyr和NO含量.结果 AdR-siPTEN可下调慢性偏头痛大鼠模型TNC中PTEN的表达;与模型组比较,IS干预慢性偏头痛大鼠的行为学症状明显缓解,大鼠的TNC内NR2B-pTyr表达水平及NO水平明显减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 PTEN参与调节慢性偏头痛的病理过程,下调PTEN基因可缓解IS谤导的慢性偏头痛大鼠的疼痛行为学,其机制可能与下调PTEN引起NR2B-pTyr表达量及NO水平降低有关.
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美满霉素对阿尔茨海默病大鼠认知能力和海马突触可塑性的影响
目的 观察美满霉素对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)大鼠空间学习记忆和海马长时程增强(long-term potentiation,LTP)以及N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(N-methyl-D-aspartate receptor subunit 2B,NR2B)表达的影响,探讨美满霉素对AD大鼠神经保护的作用机制.方法 选用健康雄性SD大鼠36只,随机分为对照组、模型组、美满霉素治疗组,每组12只.通过侧脑室注射Aβ25-35制作AD大鼠模型.Morris水迷宫检测各组大鼠空间学习记忆能力;在体电生理法记录各组大鼠海马LTP的诱导情况;免疫荧光组织化学法检测各组大鼠海马NR2B的表达.结果 与对照组相比,模型组平均逃避潜伏期和第一次到达原平台的时间明显延长,穿环次数明显减少(P＜0.05),海马LTP幅度明显降低,NR2B表达明显减少(P＜0.05);与模型组相比,美满霉素治疗组平均逃避潜伏期和第一次到达原平台的时间明显缩短,穿环次数明显增加(P＜0.05),海马LTP幅度明显升高,NR2B表达明显增加(P＜0.05).结论 美满霉素可以通过促进海马LTP的形成,上调NR2B的表达,改善AD大鼠认知功能障碍.
关键词： 阿尔茨海默病 美满霉素 突触可塑性 N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基
