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淫羊藿苷含药血清对体外培养骨髓间充质干细胞增殖及成骨性分化的影响
目的:研究淫羊藿苷含药血清(SI)对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)增殖和成骨性分化的影响.方法:以每0.25g/kg质量淫羊藿苷的剂量灌服成年大鼠,制得淫羊藿苷含药血清,以灌服等体积生理盐水制得对照血清.分别以2.5％,5％和10％3种血清浓度干预rBMSCs,MTT法检测细胞增殖率,同时检测成骨性诱导培养9d后的碱性磷酸酶(ALP)活性,筛选出佳血清浓度.以佳血清浓度干预rBMSCs的成骨性分化,比较SI组和对照组之间的钙盐沉积量、骨钙素分泌量；提取Total RNA,RT-PCR检测IGF-1,Runx-2与Osterix mRNA的表达情况.结果:所有浓度的含药血清均能抑制rBMSCs的增殖,但可提高ALP活性.5％的SI浓度为佳干预浓度,该浓度的含药血清可显著促进骨钙素的分泌和钙盐沉积,提高ALP活性,增强IGF-1,Runx-2与Osterix mRNA的表达.结论:淫羊藿苷经口服后的代谢产物抑制rBMSCs增殖,但可促进成骨性分化,提示淫羊藿苷可以通过口服途径给药,其代谢物是发挥抗骨质疏松活性的主要成分.
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淫羊藿苷促进体外培养大鼠骨髓间充质干细胞的成骨性分化
目的:研究淫羊藿苷对大鼠体外培养骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化的影响.方法:贴壁筛选法体外培养rBMSCs,采用1×10-5mol·L-1的淫羊藿苷进行药物干预,比较淫羊藿苷组和不加药的对照组之间碱性磷酸酶活性、碱性磷酸酶阳性克隆数(CFU-FALP)及钙化结节数量,提取总RNA,RT Real-time PCR检测bFGF,IGF-1,Osterix(OSX),Runx-2 mRNA的表达情况.结果:1×10-5mol·L-1淫羊藿苷可提高碱性磷酸酶(ALP)活性,增加钙化结节和CFU-FALP数量,促进与成骨性分化相关因子bFGF,IGF-1,OSX,Runx-2 mRNA的表达.结论:淫羊藿苷可显著促进rBMSCs的成骨性分化,提示淫羊藿苷具有开发为抗骨质疏松或促进骨折愈合新药的潜力.
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淫羊藿苷对体外培养骨髓基质干细胞成骨性分化的影响
目的 研究淫羊藿苷对体外培养骨髓基质干细胞增殖与成骨性分化的影响,了解其是否具有促进骨形成活性.方法 将10-8、10-7、10-6、10-5和10-4mol/L5种浓度的淫羊藿苷分别加入原代培养大鼠骨髓基质干细胞(rBMSCs)中,采用MTT法分析细胞增殖情况.在成骨性诱导培养条件下,比较淫羊藿苷组和不加药的对照组间在碱性磷酸酶阳性克隆数(CFU-FALP)、碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素分泌量、钙盐沉积量和钙化结节数等方面的差异,采用RT-PCR和实时荧光定量PCR分析成骨性分化的标志蛋白和细胞因子的基因表达差异.结果 淫羊藿苷无促进细胞增殖活性,但10-5mol/L及更高浓度抑制细胞增殖.10-5mol/L淫羊藿苷强烈促进原代培养rBMSCs的成骨性分化,表现在加药组的CFU-FALP数量、胞内ALP活性、骨钙素分泌量、钙盐沉积量和钙化结节数等在培养不同阶段均高于或显著高于对照组,包括骨涎蛋白、骨桥素、类胰岛素-I和BMP2等在内的多种标志蛋白和细胞因子基因表达水平也显著提高.结论 淫羊藿苷强烈促进骨髓基质干细胞的成骨性分化,表明其具有促进骨形成生理活性.
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淫羊藿次苷Ⅰ与其原型药物淫羊藿苷对rBMSCs成骨性分化的影响比较
目的 观察淫羊藿次苷Ⅰ (Icariside Ⅰ)与其原型药物淫羊藿苷(Icariin,ICA)对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨分化过程中碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)蛋白表达量及ALP、BGP、Osterix和Runx-2 mRNA表达的影响.方法 贴壁筛选法体外培养rBMSCs,以1×10-5 mol/L的ICA和Icariside Ⅰ对rBMSCs的成骨性分化进行药物干预.ELISA法检测ICA组、Icariside Ⅰ组和空白对照组及转化液组之间ALP活性、BGP分泌量;RT Real-Time PCR法检测ALP、BGP、Osterix和Runx-2 mRNA基因表达.结果 与空白对照组相比,Icariside Ⅰ与其原型药物ICA均可显著增强rBMSCs的ALP活性,促进BGP的分泌,提高ALP、BGP、Osterix和Runx-2的mRNA水平(P＜0.01).Icariside Ⅰ与ICA组比较,其ALP、BGP蛋白表达量及基因表达明显高于ICA组(P＜0.01),Osterix和Runx-2的基因表达两组无显著性差异.结论 Icariside Ⅰ 也能促进rBMSCs成骨性分化,并且其活性高于原型药物ICA,也是淫羊藿发挥抗骨质疏松活性的主要成分.②提示补肾中药淫羊藿其补肾壮骨作用与促进ALP、BGP蛋白分泌量,上调ALP、BGP、Osterix和Runx-2的mRNA水平有关.
关键词： 中医中药:淫羊藿次苷Ⅰ 淫羊藿苷 成骨性分化 -
淫羊藿素和脱水淫羊藿素对骨髓间充质干细胞成骨性分化影响的比较研究
目的 比较研究淫羊藿素和脱水淫羊藿素对体外培养大鼠骨髓阃充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化的影响.方法 贴壁筛选法体外培养rBMSCs,以1×10-5mol·L-1的淫羊藿素和脱水淫羊藿素对rBMSCs的成骨性分化进行药物干预,比较淫羊藿素组、脱水淫羊藿素组以及不加药的对照组之间碱性磷酸酶(ALP)活性、ALP阳性克隆数(colonies stained positive for alkaline phosphatase,CFU-FALP)、骨钙素分泌量、钙盐沉积量以及钙化结节数量的差异,Real Time RT-PCR法检测IGF-1、Osterix和Runx-2的基因表达情况.Western-blot法检测Ⅰ型胶原蛋白的分泌量.结果 淫羊藿素可显著增强rBMSCs的ALP活性,促进钙盐沉积和骨钙素的分泌,增加CFU-FALP和钙化结节数量,提高IGF-1、Osterix和Runx-2的mRNA水平,同时也可增强Ⅰ型胶原蛋白的分泌,而脱水淫羊藿素并未表现出类似效应.结论 淫羊藿素促进rBMSCs成骨性分化的活性显著高于脱水淫羊藿素,可能是二者异戊烷链上的构型差异,导致淫羊藿素的生物活性强于脱水淫羊藿素,提示我们可以通过对药物进行化学结构的改造,增强药效,降低毒性,从而研究开发出新型抗骨质疏松药物.
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淫羊藿对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响
背景：中药淫羊藿一直以来被用于骨质疏松的治疗和骨缺损的修复。目的：探讨淫羊藿对骨髓间充质干细胞成骨性分化的影响。
方法：应用数据库文献检索的方法获取淫羊藿对骨髓间充质干细胞成骨性分化影响研究的文献，对符合研究标准的文献进行深入的分析。通过检测淫羊藿诱导骨髓间充质干细胞成骨性分化过程中碱性磷酸酶、骨钙素、骨桥蛋白、转化生长因子β、骨形态发生蛋白、骨钙素、骨涎蛋白等，了解淫羊藿对骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化的机制。
结果与结论：淫羊藿对骨髓间充质干细胞的影响呈剂量依赖性，在诱导培养的早期淫羊藿苷可以提高细胞的磷酸酶活性，在诱导培养的晚期增加细胞钙化结节数，促进骨钙素分泌量，显著提高转化生长因子β1、骨形成蛋白2、胰岛样生长因子1、骨桥蛋白和骨涎蛋白等的表达水平。淫羊藿对骨髓间充质干细胞的增殖和成骨性分化有促进作用，可作为一种良好的骨诱导活性因子。 -
探讨Wnt信号通路与MSCs成骨分化
间充质干细胞(mesenchymal cells,MSCs)是近年来发现的一种易于扩增、具有多种分化潜能的细胞,在不同的诱导条件下,能够向成骨细胞,成软骨细胞,成肌细胞、脂肪细胞及基质细胞等不同的细胞系分化<'[1]>.MSCs的成骨分化受到多重信号通路的调控,如何定向诱导其成骨分化是解决骨组织工程中种子细胞来源的一个重要前提.近年来的报道称Wnt经典途径对生理成骨是必需的<'[2]>.
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胰高血糖素样肽-1及其类似物EX-4促进大鼠骨髓间充质干细胞的增殖与成骨分化
目的:观察胰高血糖素样肽-1(GLP-1)及其受体激动剂exendin-4(EX-4)对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与成骨分化的影响.方法:取大鼠股骨和胫骨全骨髓,采用贴壁法分离BMSCs并传代至第三代,培养2d后分成4组:BMSC组、诱导成骨组(osteoblast in-duced medium,OIM组)和诱导加药组,诱导加药组细分为GLP-1 (10-9～10-7 mol/L)或EX-4(10-9～10-7 mol/L)的不同浓度组,MTT法检测细胞增殖能力;测定碱性磷酸酶(ALP)活性;通过ALP染色及茜素红染色观察药物诱导BMSCs向成骨细胞分化、矿化的效果;采用RT-PCR方法检测ALP和Runx2成骨相关基因的表达情况.结果:与诱导对照组相比,GLP-1及EX-4各浓度处理组呈剂量依赖性显著促进细胞增殖(P＜0.05);ALP染色与茜素红染色结果显示,对照组无显色或显色不明显,而GLP-1及EX-4组均有阳性显色.GLP-1及EX-4可以显著提高ALP活性,并提高Runx2、ALP的表达水平.结论:GLP-1及EX-4不仅能够直接促进BMSCs增殖,并促进其向成骨细胞分化,GLP-1及EX-4可能在骨重建中发挥重要的作用.
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淫羊藿次苷Ⅱ通过激活雌激素信号通路促进骨髓间充质干细胞的成骨性分化
目的 研究淫羊藿次苷Ⅱ( icariside Ⅱ,ICS Ⅱ )对大鼠体外培养骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化过程中雌激素信号通路的影响.方法 贴壁筛选法体外培养rBMSCs,采用1×10-5 mol·L-1的ICS Ⅱ进行药物干预,比较ICS Ⅱ组、ICI组(ICI 182 78)、ICS Ⅱ+ICI组、Estrogen组、Esreogen+ICI组和不加药的对照组之间雌激素通路相关因子(包括ERα、PR和PS-2)的表达量,同时对比各组之间的成骨性指标,包括碱性磷酸酶活性、骨钙素和Ⅰ型胶原分泌量及钙盐沉积量.提取Total RNA,Real Time RT-PCR检测Runx-2、Osterix(OSX)、ERα、PR、及PS-2 mRNA的表达情况,同时提取总蛋白,Western blot法检测Ⅰ型胶原蛋白、ERα、PR和PS-2的分泌量.结果 ICS Ⅱ可明显增强碱性磷酸酶(ALP)活性,促进骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白的分泌和钙盐沉积,与成骨性分化相关的因子OSX和Runx-2的基因表达量也升高,但这些效应均可被雌激素通路的特异性阻断剂ICI 182.780所抑制.结论 ICS Ⅱ可促进rBMSCs的成骨性分化,但采用ICI 182.780阻断雌激素信号通路后,成骨性分化的指标随之降低,提示ICS Ⅱ是通过激活雌激素信号通路来促进rBMSCs成骨性分化的.
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陇中损伤散含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞增殖与成骨性分化的影响
目的:研究不同浓度的陇中损伤散含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与成骨性分化的影响.方法:取三月龄wistar大鼠骨髓,分离BMSCs进行原代培养,在第一次换液后分别加入2%,5%,10%的陇中损伤散含药血清,通过倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法测量骨髓间充质干细胞增殖情况;偶氮偶合法进行碱性磷酸酶阳性克隆(CFU-FALP)组织化学染色,yon Kossa染色法测定钙化结节数目,免疫细胞化学技术检测Ⅰ型胶原表达;于不同时间进行ALP活性及钙盐沉积量的测定.结果:陇中损伤散含药血清对BMSCs的影响呈剂量依赖性,其中以浓度为10%时作用强.MTT结果显示陇中损伤散含药血清能明显促进BMSCs增殖;损伤散含药血清还能显著促进其成骨性分化.结论:陇中损伤散活性代谢产物能促进BMSCs的增殖和成骨性分化;陇中损伤散对骨髓间充质干细胞的这种作用可能是其促进骨折愈合、防治骨质疏松的细胞学机制之一.
