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热疗联合 IL-2逆转人肺腺癌细胞 A549/CDDP 的作用及其可能机制
目的：观察热疗联合白介素-2（IL-2）对人肺腺癌细胞株 A549/ CDDP 的耐药逆转作用，并探讨其可能作用机制。方法采用细胞培养技术，分别培养人肺腺癌细胞株 A549及其耐药细胞株 A549/ CDDP。42℃热疗，联合或不联合200 u·mL -1的 IL-2，同时在2μg·mL -1的 CDDP 作用下，分别干预敏感细胞株和耐药细胞株2 h 后，采用 MTT 法检测2种不同细胞对 CDDP 的敏感性，流式细胞仪间接免疫荧光法检测热疗、IL-2等不同条件作用下细胞中 P -糖蛋白（P-gp）、多药耐药蛋白（MRP）、肺耐药蛋白（LRP）的表达差异，以及细胞内荧光药物 CDDP 的聚集量的变化。结果分别联用热疗、IL-2时，较单用 CDDP，A549/ CDDP细胞的抑制率得到提高，A549/ CDDP 细胞 P-gp、MRP 表达下降，细胞内荧光强度增强，差异均有统计学意义（P 均﹤0.05）。热疗联合 IL-2合用 CDDP 时，A549/ CDDP 细胞的抑制率进一步提高，A549/ CDDP 细胞P-gp、MRP 表达明显下降，细胞内荧光强度显著增强，差异均有统计学意义（P 均﹤0.05），但 LRP 的表达差异无统计学意义（P ﹥0.05）。结论热疗、IL-2分别能部分逆转 A549/ CDDP 细胞对 CDDP 的耐药性；热疗联合 IL-2可进一步增强其耐药逆转效应。其逆转耐药机制，推测可能与抑制 P-gp、MRP 表达，增加细胞内药物 CDDP 的积聚有关。
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多药耐药相关蛋白在原发性肝癌患者外周血淋巴细胞及癌组织中的表达
目的 探讨多药耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、肺耐药蛋白(LRP)和谷胱甘肽巯基转移酶-π(GST-π)在原发性肝癌(HCC)患者外周血淋巴细胞及癌组织中的表达.方法 选择2014年1月至2015年1月在新乡医学院第一附属医院经影像学检查及病理学确诊的HCC患者69例(HCC组),采用免疫组织化学染色检测3种耐药相关蛋白P-gp、LRP和GST-π在HCC患者外周血淋巴细胞及癌组织中的表达水平;另选择40例健康人作为对照组,检测外周血淋巴细胞中P-gp、LRP和GST-π表达水平.结果 P-gp、LRP及GST-π在HCC组患者外周血淋巴细胞中的阳性表达率均高于对照组(P＜0.05).P-gp、LRP及GST-π在外周血淋巴细胞和癌组织中的阳性表达率比较差异均无统计学意义(P＞0.05).不同TNM分期HCC患者外周血淋巴细胞与癌组织中P-gp、LRP及GST-π阳性表达率比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 多药耐药相关蛋白P-gp、LRP和GST-π在HCC患者外周血淋巴细胞及癌组织中的表达一致,可以使用外周血淋巴细胞检测多药耐药相关蛋白.
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原发性肝癌中多药耐药蛋白谷胱甘肽转移酶及拓扑异构酶Ⅱ的表达与临床病理指标的相关性
目的 探讨原发性肝癌中谷胱甘肽转移酶(GST-π)及拓扑异构酶Ⅱ(Topo-Ⅱ)的表达与临床病理指标的相关性及其临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测GST-π及Topo-Ⅱ在原发性肝癌患者病理组织中的表达情况,分析GST-π及Topo-Ⅱ阳性表达与临床病理指标之间的关系,评价其临床意义.结果 原发性肝癌患者肝癌组织中GST-π的阳性表达与术前甲胎蛋白水平、肿瘤直径、有无癌栓及肿瘤包膜是否完整相关(P＜0.05),与患者年龄、肿瘤淋巴结转移(TNM)分期及病灶个数无关(P＞0.05);Topo-Ⅱ的阳性表达与患者术前甲胎蛋白水平、肿瘤直径、TNM分期、有无癌栓及肿瘤包膜是否完整相关(P＜0.05),与患者年龄及病灶个数无关(P＞0.05).结论 GST-π及Topo-Ⅱ阳性表达与肝癌患者临床病理指标密切相关,可作为判断肝癌患者预后的客观评价指标.
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急性白血病P-gP和GSTπ的表达及临床意义
目的:探讨初诊急性白血病(AI)耐药机制.方法:应用免疫酶法(APAAP)检测74例初诊急性白血病(AL)P-gp、GSTπr的表达及临床意义.结果:急性髓性白血病(AML)患者P-gp阳性率21%,GSTπ阳性率27%,两者均阳性13%;急性淋巴白血病(ALL)患者P-gp阳性率14%,GSTπ阳性率50%,两者均阳性9%.无论是AML还是ALL两者均无相关性.P-gp和GSTπ均阳性者完全缓解(CR)明显低于均阴性者(P＜0.05).结论:P-gP、GSTπ共阳性是AL预后不良的重要指标之一.
关键词： 白血病 多药耐药蛋白 谷胱甘肽-S-转移酶 -
人脑胶质瘤U251耐药细胞株的建立及耐药相关蛋白的筛选
我们通过模拟模拟临床给药方法,以阿霉素为诱导剂,建立理想的多药耐药细胞模型,并对已建立的耐药细胞株进行了多药耐药基因1(MDR-1)编码蛋白P-gp以及其它的耐药基因表达的蛋白如多药耐药蛋白耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药蛋白(LRP)、谷光甘肽转移酶π(GST-π)和DNA拓扑异构酶Ⅱ(TOPOⅡ)进行了定量研究,为阐明胶质瘤多药耐药机制并逆转耐药奠定基础.
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乳腺癌分子亚型中肺耐药蛋白和多药耐药蛋白的表达及其意义
目的 观察乳腺癌各分子亚型中肺耐药蛋白(LRP)和多药耐药蛋白(MRP)的表达,探讨其在乳腺癌表达中的意义.方法 采用免疫组织化学方法对105例乳腺癌组织进行分子分型,并检测LRP和MRP在乳腺癌各分子亚型中的表达,分析它们与各分子亚型及与雌激素受体(ER)、人类表皮生长因子受体-2(Her-2)之间的关系.结果 LRP在腺腔B型高表达(87.5％),差异有统计学意义;MRP在腺腔A型、腺腔B型、过表达型、基底样型和裸表达型乳腺癌的阳性表达率分别为62.50％、75.00％、54.55％、66.67％、70.00％,差异无统计学意义(P＞0.05).LRP与ER之间明显相关(r =0.28,P＜0.05),与Her-2无明显相关(r=0.001,P＞0.05);MRP与ER、Her-2均无明显相关(r=0.059,P＞0.05;r =0.008,P＞0.05).LRP和MRP之间呈明显正相关(r=0.309,P＜0.05).结论 LRP可预测乳腺癌尤其是腺腔B型乳腺癌的内源性耐药.
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多壁碳纳米管和富勒烯碳60对P-糖蛋白和多药耐药相关蛋白转运功能的影响
目的:比较多壁碳纳米管(MWCNTs)和富勒烯碳60(C60)对P-糖蛋白(Pgp)和多药耐药相关蛋白(MRP)转运活性的影响.方法:将表达Pgp和MRP的大鼠星形胶质细胞分别以MWCNTs和C60处理24 h.以流式细胞术检测细胞对PgP特异性底物罗丹明123和MRP特异性底物荧光素的摄取、潴留和外排转运动力学.并以透射电子显微镜观察细胞对两种材料的内化.结果:MWCNTs对罗丹明123和荧光素的摄取无明显影响,但浓度依赖性地增加两种底物在细胞内的潴留.动力学分析也表明MWCNTs明显降低细胞对两种底物的外排速率.与MWCNTs相比,C60对两种底物的摄取、潴留以及外排速率无明显影响.结论:MWCNTs可抑制Pgp和MRP介导的外排转运.不同的纳米结构可使碳的同素异形体表现出截然不同的细胞效应.
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多态变异对药物转运体活性影响及其临床意义
药物转运是药物反应个体差异及药物相互作用的重要环节.近年来,随着物质转运研究的深入,转运蛋白超家族成员正在不断增加.在已发现和命名的转运蛋白中,与药物转运有关的主要蛋白有ATP依赖性泵出转运体MDR1、有机阴离子转运蛋白(OATP).MDR1在胃肠道、肝脏和肾脏等组织广泛分布,影响药物的吸收、分布以及分泌排泄.MDR1基因的多态性影响其表达和功能,改变底物药物体内过程.有机阴离子转运蛋白在肝脏等组织特异表达,调节药物的分泌排出,其遗传多态性是相关药物异常反应的重要原因.
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表皮生长因子受体和多药耐药蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其与化学药物治疗疗效的相关性
目的：探讨表皮生长因子受体（EGFR）与多药耐药蛋白（MDR）在非小细胞肺癌中的表达及与化学药物治疗（以下简称化疗）疗效的相关性。方法采用免疫组织化学二步法检测95例非小细胞肺癌（NSCLC）组织和15例正常肺组织中EGFR与肺耐药蛋白（LRP）、P-糖蛋白（P- gp）、多药耐药相关蛋白（MRP）及谷光甘肽转移酶（GST-π）的表达。结果95例NSCLC中，EGFR、LRP、P- gp、MRP及GST-π在NSCLC组织中的阳性表达率分别为50.53%、60.00%、40.00%、41.05%和55.79%。EGFR表达在有无吸烟史、不同病理类型（鳞癌vs腺癌）、不同TNM分期及有无淋巴结转移的NSCLC患者间比较，差异有统计学意义（<0.05）。LRP和MRP在腺癌中的阳性表达率高于鳞癌（<0.05），MRP在高分化癌的表达阳性率低于中、低分化（<0.05）。MRP与LRP、P- gp与GST-π的表达呈正相关（=0.341，=0.001；=0.213，=0.038），EGFR与LRP、P- gp、MRP、GST-π的表达无关（>0.05）。EGFR阳性表达的化疗有效率为37.5%，低于EGFR阴性表达的化疗有效率（66.0%）（<0.05）。结论 NSCLC组织中EGFR与多药耐药蛋白常阳性表达，形成MDR的4种蛋白相互联系，可能对耐药的形成起协同作用，EGFR可以作为评价NSCLC化疗疗效的客观指标。
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乳腺癌耐药蛋白的新进展
乳腺癌耐药蛋白是近发现的一种肿瘤多药耐药蛋白,它存在于细胞膜上与肿瘤耐药关系密切.因此,乳腺癌多药耐药蛋白有望成为一种新的治疗靶点.现主要综述,乳腺癌耐药蛋白的基因和蛋白的结构特点、作用方式、耐药特征、检测方法、其表达在临床中的意义及其介导的MDR(multidrug resisatnce)的逆转.
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死亡相关蛋白激酶在结肠癌耐药中的作用
目的 探讨死亡相关蛋白激酶(DAPK)在结肠癌耐药中的作用.方法 应用免疫组织化学(免疫组化)SP法检测61例结肠癌组织及32例癌旁组织中DAPK的表达.以氟尿嘧啶(5-FU)诱导建立的结肠癌耐药细胞系HCT116/5-FU为模型.通过转染DAPK-siRNA下调DAPK的表达(DAPK-siRNA组),转染FAM-siRNA(FAM-siRNA组)作为对照;通过过表达载体上调DAPK的表达(DAPK过表达组).采用实时定量荧光PCR及蛋白质印迹法检测3组的DAPK、多药耐药蛋白(MRP)和P-糖蛋白(P-gp)的mRNA及蛋白表达水平;MTT法及流式细胞法分别测定3组细胞在未经5-FU处理及浓度为8 μg/ml的5-FU处理下的细胞增殖和凋亡情况.结果 DAPK在结肠癌组织中的阳性表达率明显低于癌旁组织[18.0％(11/61)比90.6％(29/32),P＜0.05].与FAM-siRNA组比较,DAPK-siRNA组细胞中DAPK mRNA水平及蛋白表达水平均明显降低,DAPK过表达组则均显著升高(均P＜0.05).在5-FU处理下,相比FAM-siRNA组,DAPK过表达组细胞增殖受到明显抑制,细胞凋亡率明显升高(均P＜0.05);DAPK-siRNA组细胞增殖和细胞凋亡率均无明显变化(均P＞0.05).与FAM-siRNA组比较,DAPK过表达组两种耐药蛋白的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P＜0.05),而DAPK-siRNA组与FAM-siRNA组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 DAPK能够抑制结肠癌耐药细胞的增殖,促进其凋亡,并可能通过抑制MRP和P-gp的mRNA和蛋白表达,来增强结肠癌细胞对药物的敏感性.
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多药转运蛋白对癫痫大鼠脑内奥卡西平浓度的影响
目的 观察多药转运蛋白家族的成员P-糖蛋白(P-glycoprotein,PGP)和多药耐药蛋白(multi-drug re-sistance associated protein,MRP)对匹罗卡品慢性癫痫大鼠模型海马内神经元细胞外液中奥卡西平浓度的影响,证明奥卡西平是否为PGP和MRP的底物,探讨PGP和MRP参与难治疗性癫痫耐药的机制.方法 建立匹罗卡品慢性癫痫动物模型,将32只大鼠分为对照组、模型组、维拉帕米干预组、丙磺舒干预组(每组8只),于腹腔注射奥卡西平(80 mg/kg)后30、60、90、120、150 min,通过微透析及高效液相色谱技术,检测大鼠海马神经元细胞外液中的药物浓度.结果 维拉帕米干预后,癫痫大鼠海马细胞外液中奥卡丙平的浓度于给药后90～120 min(1.26±0.09、0.93±0.10)明显高于模型组(0.87±0.06、0.66 4±0.04),两组比较有统计学差异(P<0.05);丙磺舒干预后60～150 min,大鼠海马内细胞外液中奥卡两平的浓度(1.07±0.11、1.32±0.13、1.02±0.10、0.87±0.08)显著高于模型组(0.81±0.08、0.87±0.06、0.66±0.04、0.58±0.06)(P<0.05).结论 奥卡西平是PGP和MRP的底物,PGP和MRP能够选择性的将奥卡西平泵出血脑屏障外,降低癫痫病灶内的药物浓度,上述机制可能参与了难治性癫痫患者对奥卡西平产生耐药.
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MRP1介导的多药耐药及其逆转剂的研究进展
多药耐药蛋白1(MRP1)属于ATP结合的盒式(ATP.binding cassette,ABC)运输蛋白家族成员,它可以通过细胞膜转运多种抗肿瘤药,从而限制这些抗肿瘤药进入细胞,据此,人们着力于寻找抑制MRP1的分子,以逆转肿瘤化疗药的药耐性.在这篇综述,我们试图总结和突出在近5年内完成的对MRP1介导的多药耐药的调节剂的研究.特别,近年来由于中药资源丰富,作用靶点多,可针对多药耐药机制复杂的特点,有学者开始开发逆转肿瘤多药耐药的中药,我们收集了近年来中药多药耐药(MDR)逆转的报道,为寻找中药MRP1逆转剂引路.
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微波热疗对人乳腺癌阿霉素细胞MCF-7多药耐药蛋白及耐药性的影响
目的 探讨微波热疗对人乳腺癌阿霉素细胞MCF-7和阿霉素耐药细胞MCF-7/ADM的多药耐药蛋白表达和耐药性的影响.方法 应用Real-Time PCR法检测微波热疗对P-糖蛋白(P-gP)、多药耐药相关蛋白(MRP)表达的影响和高效液相色谱法(HPLC)检测微波热疗对细胞内阿霉素浓度的影响.结果 MCF-7/ADM细胞在微波热疗后4 h和24 h,P-gP、MRP表达量明显下降(P<0.01).微波热疗以后肿瘤细胞内阿霉素(ADM)浓度有明显上升(P<0.01).结论微波热疗抑制了耐药蛋白的表达,增加了细胞内的药物浓度,热疗可能是逆转化疗耐药从而提高化疗效果的一种有效手段.
关键词： 微波热疗 乳腺肿瘤 MCF-7/ADM细胞株 多药耐药蛋白 耐药 -
HIF-1α和 MRP的表达在肝癌组织中的相关性分析
目的：对肝癌组织中的低氧诱导因子‐1α（HIF‐1α）蛋白表达和多药耐药蛋白（MRP）表达之间的相关性进行分析。方法收集本院从2012年3月至2013年3月病理科的肝癌石蜡包埋标本共83例，对标本进行处理，制作组织切片，观察HIF‐1α的阳性表达、MRP的阳性表达情况。结果83例标本中有50例的 HIF‐1α呈阳性表达，阳性率为60．2％；其中中高分化肿瘤样本的HIF‐1α阳性率为74．1％，明显高于低分化的28．0％（P＜0．05）；而淋巴结肿瘤转移与否的 HIF‐1α阳性率则无显著性差异（P＞0．05）。83例样本中，有58例样本的MRP呈阳性，阳性率为70．0％；其中中高分化度的MRP阳性率为77．6％，明显要高于低分化的52．0％（P＜0．05）；而淋巴结肿瘤转移与否的MRP阳性率分别为76．3％、64．4％，其差异无统计学意义（P＞0．05）。在同一标本中MRP表达为阳性的，其 HIF‐1α表达也明显升高。结论肝癌组织中 HIF‐1α蛋白的表达与MRP表达有一定的相关性。
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P-糖蛋白介导药物相互作用的细胞模型研究概况
P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)是由多药耐药蛋白1(Multidrug resistance 1,MDR1)基因编码的能量(ATP)依赖性膜蛋白,可发挥外排泵作用,将细胞内的化合物逆浓度梯度转运至胞外.
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肾母细胞瘤术前化疗前后P-糖蛋白表达的变化及临床意义
目的：探讨肾母细胞瘤术前化疗耐药性的生物学特性及与疗效相关性。方法：对18例未术前化疗和经不同疗程术前化疗病理档案，以JSD-单克隆抗体对肾母细胞瘤组织多药耐药蛋白(P-glycoprotein,P-gp)进行免疫组织化学，检测P-gp在术前化疗不同疗程的表达，确定其耐药性；同时对15例资料记录完整、术前化疗＞5周的小儿肾母细胞瘤，通过B超随访测量术前化疗不同疗程肿瘤大小，了解其疗效及与耐药性的相关性。结果：术前化疗后的肿瘤细胞P-gp表达比未经术前化疗的肿瘤细胞强，而术前化疗疗程越长，肿瘤细胞P-gp表达越强，疗效降低。结论：术前化疗4周后疗效降低与瘤组织对化疗药物耐药性明显增强有关，免疫组织化学检测P-gp可为制定或更改肾母细胞瘤术前化疗方案及术后化疗方案提供有用的依据。
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髓样分化因子促进卵巢癌细胞耐药性的机制研究
目的 探讨髓样分化因子(myeloid differentiation factor88,MyD88)参与调节卵巢癌细胞耐药性的具体机制.方法 在卵巢癌耐药细胞株A2780/Taxol中采用特异性小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)抑制MyD88的表达,通过CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况以及细胞在紫杉醇处理后的存活情况.Western blot检测磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、X-连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)以及多药耐药蛋白(multidrug resistance 1,MDRl)的表达情况.进一步在A2780/Taxol细胞中通过LY294002抑制PKB/Akt信号通路,通过小干扰RNA抑制MDR1的表达,CCK-8试剂盒检测细胞在紫杉醇处理后的存活情况.结果 在A2780/Taxol细胞株中抑制MyD88的表达,细胞的增殖速度明显低于对照组(P＜0.05).A2780/Taxol细胞对紫杉醇的耐药性也明显降低,半数抑制浓度(IC50)降低至对照组的50％(P＜0.01),且p-Akt、XIAP和MDR1在药物刺激下的升高也被明显抑制.同时抑制p-Akt通路的活性或抑制MDR1的表达后A2780/Taxol细胞的耐药性也出现明显下降,IC50分别降低至对照组的80％和50％,且差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 MyD88蛋白通过调节PKB/Akt信号通路、XIAP抗凋亡蛋白以及MDR1的表达参与卵巢癌细胞对紫杉醇的耐药性.通过抑制MyD88可望改善卵巢癌治疗中的耐药现状.
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多药耐药蛋白在胆汁淤积中的作用研究进展
多药耐药蛋白(multidrug resistance proteins,MRPs)是位于多种极性细胞膜表面介导其底物依赖ATP自细胞内转运至细胞外的一类膜糖蛋白,属于具有ATP结合域的盒式跨膜转运子蛋白超家族(ATP binding cassette,ABC-transporter proteins superfamily)[1].
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MRP在非小细胞肺癌和正常肺组织中表达及其预后意义的研究
背景与目的肿瘤多药耐药是导致肿瘤化疗失败的主要原因.多药耐药相关蛋白(MRP)在非小细胞肺癌中的表达意义和导致耐药的机制倍受关注,其研究结果对逆转多药耐药、提高化疗疗效意义重大.本研究旨在探讨正常肺组织和非小细胞肺癌中MRP的表达及其与患者临床病理特征和预后的关系.方法采用SP免疫组织化学法检测62例具有完整随访资料的非小细胞肺癌组织标本中MRP的表达,并联合应用Western blot对30例新鲜非小细胞肺癌和相应正常肺组织中MRP的表达进行了研究.结果正常肺组织MRP表达水平明显低于肺癌组织(P<0.05).MRP表达与患者性别、组织分型、细胞分化程度、淋巴结转移均无明显关系(P>0.05).MRP阴性表达的非小细胞肺癌患者术后生存期为69.81月±17.41月,阳性者为25.38月±4.46月(P=0.015 6).MRP阴性的鳞癌患者术后生存期为79.86月±20.35月,阳性者为23.41月±4.48月(P=0.015);腺癌中MRP表达与生存期无相关性.COX模型分析表明,术后生存期与淋巴结转移(P=0.038)、MRP表达(P=0.035)呈显著负相关.结论非小细胞肺癌的MRP表达明显高于正常肺组织,MRP阴性的患者术后生存期明显长于阳性者,MRP表达可能是影响非小细胞肺癌预后的独立因素.
