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青龙衣粉针剂抑瘤与免疫作用的实验研究
实验材料1实验动物昆明种小鼠,体质量18g～22g,雌雄兼用,由黑龙江省肿瘤研究所实验动物中心提供.
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载血卟啉PLGA微泡用于声动力治疗小鼠H22肝癌移植瘤
目的 研究超声联合载血卟啉PLGA造影剂对小鼠H22肝癌皮下移植瘤的声动力治疗作用. 方法 自制载血卟啉高分子材料PLGA造影剂并检测其基本特性.选择30只荷H22肝癌皮下移植瘤小鼠,随机平均分为5组进行治疗,绘制治疗后15天内肿瘤体积生长曲线,比较其质量抑瘤率,并采用TUNEL和PCNA检测各组小鼠肿瘤细胞凋亡情况及增殖活性. 结果 自制的载血卟啉PLGA微泡造影剂平均粒径为602.3 nm,分布均匀,包封率63.50%,载药量2.15%.治疗后,与其他各组比较,超声加载药微泡治疗组肿瘤生长曲线平缓,质量抑瘤率及凋亡指数均显著高于其他4组(P＜0.05),而增殖指数明显低于其他各组(P＜0.05). 结论 超声联合载血卟啉高分子纳米造影剂能够抑制小鼠H22肝癌移植瘤生长,促进其凋亡.
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海兔素对小鼠H22移植瘤侵袭及免疫调节影响
目的 观察海兔素对H22荷瘤小鼠肿瘤生长侵袭的影响及免疫调节作用.方法 昆明小鼠40只,随机分为模型组、海兔素低、中、高剂量组(n=10).各组小鼠左前腋下皮下接种Ha肝癌细胞,建立小鼠H22移植性肿瘤模型,次日除模型组外,海兔素低、中、高剂量组分别以25、50、1 00 mg/kg海兔素灌胃,于15 d后处死,剥离肿瘤,称重,计算抑瘤率;采用免疫组化法测定肿瘤组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)及增殖细胞核抗原(PCNA)表达,酶联免疫吸附试验测定血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.结果 低、中、高剂量海兔素组小鼠抑瘤率分别为28.31％、33.84％、42.96％,呈量效依赖性;经50、100 mg/kg海兔素处理后,小鼠肿瘤组织中MMP-9表达阳性率分别为(54.29 ±6.41)％、(29.31 ±3.15)％,明显低于模型组(74.80±8.06)％;VEGF和PCNA阳性表达逐渐下降,呈剂量效应关系(P＜0.05);中、高剂量海兔素组小鼠血清中IL-6和TNF-α水平[分别为(0.34 ±0.050)、(0.37 ±0.04)和(1.26±0.21)、(1.49 ±0.17) μg/L],均明显高于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 海兔素可抑制H22小鼠肿瘤增长,其机制可能与海兔素抑制肿瘤组织细胞外基质降解以及新生血管形成,同时提高机体免疫能力有关.
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凹顶藻萜类化合物对小鼠H22肿瘤生长及VEGF、PCNA表达的影响
目的:观察凹项藻提取物(Laurenciaterpenoid extract,LET)对接种H22细胞小鼠的肿瘤生长及血管内皮细胞生长因子(VEGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.方法:昆明小鼠随机分为5组(10只,组),即模型组、LET低中高剂量组(25、50、100 mg/kg·d-1)、环磷酰胺组(CTX对照组).各组小鼠左前腋下皮下接种H22肝癌细胞,第二天除模型组外,其余4组分别以不同剂量的LET、CTX灌胃,于15天后处死,完整剥离出肿瘤,称重,计算抑瘤率.免疫组化法测定肿瘤组织中VEGF、PCNA的表达.结果:LET低、中、高剂量组小鼠H22肿瘤质量增长均较模型组缓慢(P<0.05),抑瘤率分别为27.5%、34.9%、41.4%;同时LET中、高剂量组VEGF阳性表达较模型组显著减少(P<0.05),低剂量组未见明显变化,但LET各剂量组PCNA阳性表达较模型组显著减少(P<0.05).结论:LET各剂量组可以抑制小鼠H22肿瘤的生长,具有较高的抑瘤活性,且中、高剂量组能抑制VEGF的表达(P<0.05),低、中、高剂量组能抑制PCNA的表达(P<0.05).LET对肿瘤组织VEGF、PCNA表达的抑制作用可能是其抗H22肿瘤及抗血管生成的一个重要原因.
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凹顶藻萜提取物对荷H22肿瘤小鼠氧化应激及p53和MMP-9表达的影响
肝癌是严重危害人类生命健康的顽症之一.近年来,海洋萜类化合物的天然抗氧化、抗肿瘤活性已引起人们的广泛关注[1].凹顶藻是海洋萜类化合物的重要来源,课题组前期已从三列凹顶藻中成功获得总萜含量为63.3%的凹顶藻萜提取物,并进行一系列体内外实验,获得了可喜的研究结果[2-4].但目前关于凹顶藻萜类化合物对H22肿瘤p53和MMP-9表达及氧化应激水平的影响,国内外尚未见相关报道.本实验以凹顶藻萜提取物为干预物,观察其对小鼠H22肿瘤的抑制作用,现将结果报道如下.
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枸杞多糖对荷H22肝腹水瘤小鼠免疫功能的影响
目的:观察枸杞多糖(LBP)对荷H22肝腹水瘤小鼠免疫功能的影响.方法:昆明小鼠40只,分成4组(n=10),腹腔注射200μL的H22肝腹水瘤细胞(10<,6>mL<'-1>),24 h后分别以5、10或20 mg/(kg·d)的LBP和等体积生理盐水灌胃,记录各组小鼠成瘤期和生存期.另取40只,随机分成4组(n=10),同上处理,连续喂养14 d后处死小鼠,分别计算胸腺指数和脾指数;分离小鼠骨髓树突状细胞(DC),流式细胞术检测CD86、CD11 a的表达,Western blot检测白介素12(IL-12)P40的表达;诱导培养小鼠脾脏T淋巴细胞,MTT法检测分别以4组小鼠骨髓DC致敏的T淋巴细胞对H22肿瘤细胞的杀伤活性.结果:LBP可延缓荷瘤小鼠的成瘤期,延长其生存期(x<'2>=28.808和35.410,P均<0.001);提高其胸腺指数和脾指数(F=262.396和126.976,P均<0.001);使骨髓DC CD86、CD11a和IL-12P40的表达升高(F=3 122.694,1469.946和252.590,P均<0.001);DC致敏的T淋巴细胞杀伤活性增强(F=122.539,P<0.001).结论:LBP可以促进荷H22肝腹水瘤小鼠骨髓DC的成熟.
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高效液相色谱法测定小鼠肿瘤中β-榄香烯的含量
目的:建立小鼠肿瘤中β-榄香烯的含量分析方法并测定静脉给予β-榄香烯固体脂质纳米粒和乳剂1 h后小鼠肿瘤中β-榄香烯的浓度.方法:采用HPLC法,色谱柱为Hypersil BDS C18(4.6 mm× 200 mm,5 μm);流动相;乙腈-水(90∶10);检测波长为208 nm;流速为1 mL·min-1.建立小鼠皮下移植性H22肿瘤模型.结果:β-榄香烯与肿瘤中其他组分能很好分离,在0.4～24.0 mg·L-1范围内线性关系良好(r=0.999 5).相对回收率大于97%.结论:本方法简单、准确、专属性强,可用于测定实体肿瘤中β-榄香烯的含量.
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不同证候H22荷瘤小鼠肿瘤ABC转运蛋白家族基因转录特征
目的:观察不同证候H22荷瘤小鼠肿瘤组织ABC转运蛋白家族基因表达的特征.方法:对来源于早期邪毒壅盛和单纯气虚、中期阳气虚和中晚期气阴阳虚四种证候小鼠H22肿瘤组织4张Affymetrix GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array数据标准化处理后,筛选其中的ABC转运蛋白基因进行差异分析.结果:从芯片中共筛选出与ABC转运蛋白有关的基因47个,以邪毒壅盛小鼠肿瘤基因转录活跃,气虚次之,阳气虚低;四种常见证候间共有25个基因转录具有明显差异;Abce1和Abcf1等7个基因中在四种常见证候肿瘤中转录水平高.结论:Tap1(Abcb2)和Abed2等6个高表达基因可能是邪毒壅盛型小鼠肿瘤增长快的重要因素;不同证候荷瘤小鼠肿瘤组织中的ABC转运蛋白基因转录既存在一定共性又存在很大差异,进一步证明了H22荷瘤小鼠证候客观存在的物质基础,为中医辨证论治提供分子依据.
