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用肝肾共培养体系研究细胞毒性的方法学考察
目的 建立肝肾共培养体系,并证明此体系的合理性与可行性 方法 采用MTT法比较川楝素(20、40、80、160 μg/mL)、葛根素(200、100、50、25 μg/mL)、苦参碱(5、2.5、1.25、0.625 mg/mL)、汉防己乙素(50、25、12.5、6.25 mg/mL)在肝肾单独培养和共培养体系中对肝、肾细胞活力的影响.结果 2种体系中:川楝素仅对肝细胞的活力有抑制作用,葛根素对肝肾细胞均无抑制作用,苦参碱对肝细胞活力的抑制程度大于肾细胞,汉防己乙素对肾细胞活力的抑制程度大于肝细胞.结论 用肝肾细胞共培养体系与单独培养体系进行实验得出的结果一致,这2种体系均可用于药物对细胞的毒性研究,其中共培养体系能更好地反映药物对靶器官的选择性.
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汉防己乙素抗肝缺血再灌注损伤
汉防己乙素(demethyl-tetrandrine,d-Tet)与粉防己碱均为防己科千金藤属植物粉防己块根的有效成分.有报道粉防己碱具有免疫调节、抗炎、抗纤维化、抗氧化作用,还可作为一种非特异性钙离子拮抗剂,对心、脑、肝等器官的缺血再灌注损伤具有保护作用[1～3].但是关于肝缺血再灌注时细胞凋亡的报道较少,特别是汉防己乙素对其的影响.本研究探讨汉防己乙素对肝缺血再灌注时BCL-2和BAX蛋白表达的影响.
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汉防己甲素的合成
汉防己乙素在DMF中,1,5-二氮双环[4.3.0]-5-壬烯(DBN)作用下,用硫酸二甲酯甲基化得非选择性钙通道阻滞药汉防己甲素,收率大于70％,纯度为99.5％.该法反应完全,操作简单,提高了粉防己的资源利用.
关键词： 汉防己甲素 甲基化 汉防己乙素 非选择性钙通道阻滞药 -
汉防己乙素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤脂质过氧化动态变化的影响
目的观察汉防己乙素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤时脂质过氧化动态变化的影响.方法制作大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,随机分为假手术组、缺血再灌注组及汉防己乙素低、高剂量预处理组,每组10只.连续观察各组缺血前、缺血30 min、再灌注30 min、1 h及2 h血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)活性的动态变化,并观察汉防己乙素预处理组对各项指标的影响.结果缺血再灌注组各时点血清ALT、MDA呈逐渐升高的变化,SOD呈逐渐降低的改变;肝组织MDA、SOD变化各组均有差异; 汉防己乙素组与缺血再灌注组比较差异均有显著或非常显著意义(P<0.05或P<0.01) .结论肝脏缺血再灌注损伤时脂质过氧化呈进行性加重的变化; 汉防己乙素能抑制氧自由基的生成,增强对其的清除,具有较好的保护作用.
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汉防己乙素对人肺癌95D细胞凋亡的诱导作用及机制
目的 观察汉防己乙素对人肺癌95D细胞凋亡的诱导作用,并探讨其可能的作用机制.方法 取人肺癌95D细胞分为4组,实验1、2、3组分别加入8、16、32μmol/L的汉防己乙素,溶剂对照组加入等体积0.1%的DMSO.采用流式细胞仪测算各组细胞凋亡率,H2DCF-DA法测定细胞内活性氧(ROS)水平,Caspase-3活性测定试剂盒检测Caspase-3活性,半定量RT-PCR法检测BCL-2、BAX mRNA.结果 实验1、2、3组及溶剂对照组细胞凋亡率分别为6.71%±1.26%、17.07%±1.88%、25.78%±0.44%、5.41%±1.40%,ROS水平分别为117.7%±5.5%、151.0%±4.6%、212.0%±5.6%、100.0%±0.0%,Caspase-3活性分别为119.3%±5.7%、175.0%±13.1%、251.3%±17.0%、100.0%±3.0%,BCL-2 mRNA相对表达量分别为0.93±0.02、0.75±0.04、0.61±0.04、1.00±0.03,BAX mRNA相对表达量分别为1.10±0.02、1.63±0.04、1.85±0.04、1.00±0.02,实验1、2、3组与溶剂对照组相比P<0.05或<0.01.结论 汉防己乙素可诱导人肺癌95D细胞凋亡,这可能是通过升高细胞内ROS水平、活化Caspase-3、激活BAX、抑制BCL-2实现的.
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大孔吸附树脂在提取粉防己中汉防己甲素和汉防己乙素中的应用
目的:改进粉防己中汉防己甲素、乙素的提取工艺,使其操作简便,降低提取的成本和毒性.方法:利用D101大孔吸附树脂和硅胶柱层析进行分离、提取汉防己甲素和乙素.结果:得到纯度较高的汉防己甲素和乙素,得率分别为0.06%,0.016%,纯度均大于98%.结论:利用D101大孔吸附树脂和硅胶柱层析可以有效分得汉防己甲素和乙素,且得率较高,纯度已达到标准品的要求,可用作标准品的制备.该方法与传统的分离、提取方法比较,操作简便,并且降低了成本和毒性.
关键词： 粉防己 汉防己甲素 汉防己乙素 D101大孔吸附树脂 -
双苄基异喹啉类生物碱汉防己乙素的二维核磁共振谱
目的:系统研究汉防己乙素的核磁共振谱.方法:应用1D(1H,13C)和2D(1H-1HCOSY,HMQC,HMBC)NMR技术.结果:首次指定了汉防己乙素NMR谱中所有1H(13C)信号的化学位移.结论:2DNMR技术是解决汉防己乙素1H(13C)信号峰归属的关键.
关键词： 双苄基异喹啉类生物碱 汉防己乙素 二维核磁共振谱
