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百事乐胶囊对慢性应激抑郁模型大鼠海马DG、CA3区神经元再生相关蛋白的影响
目的：探讨百事乐胶囊对慢性应激抑郁模型大鼠海马神经再生相关cAMP-CREB-BDNF信号通路的影响。方法将SD大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组及百事乐高、中、低剂量组,除空白组外,采用慢性温和不可预见性应激加孤养的方式建立大鼠抑郁模型,各组给予相应药物灌胃,连续21 d。开野实验、糖水消耗实验、定位航行实验及空间搜索实验检测大鼠行为学的变化,ELISA检测大鼠血浆中皮质酮含量,免疫组化检测海马DG、CA3区蛋白激酶A(PKA)、脑源性神经营养因子(BDNF)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)的表达。结果与模型组比较,百事乐高、中剂量组大鼠水平或垂直活动次数及蔗糖偏食度升高(P＜0.05,P＜0.01),百事乐高剂量组大鼠逃避潜伏期、目标象限潜伏时间缩短(P＜0.05),百事乐高、中、低剂量组血浆皮质酮浓度降低(P＜0.05),百事乐高剂量组海马DG、CA3区PKA、CREB、BDNF表达升高(P＜0.05)。结论百事乐胶囊可能通过cAMP-CREB-BDNF信号通路促进海马神经元再生而实现抗抑郁的作用。
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亚砷酸钠中毒对大鼠海马组织神经元及肾功能的影响研究
目的 观察亚砷酸钠(NaAsO2)中毒对成年SD大鼠海马组织CA3区的神经元及肾脏形态学的影响.方法 于2016年2-6月,48只12周龄雄性SPF级SD大鼠随机分为对照组及低、中、高染毒组,每组各12只.将NaAsO2用蒸馏水分别配制成5、10、20 mg/kg溶液分别供低、中、高染毒组大鼠自由饮用,对照组可自由饮用蒸馏水.建造染砷模型12周后,取4组大鼠脑组织海马部分和肾组织,HE染色光镜观察海马组织神经元与肾脏形态学改变;同时测定海马组织与肾组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力、还原型谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)含量.结果 不同剂量染毒组海马组织神经元与对照组比较,神经元胞体形态欠规则,排列稀疏且数量减少,镜下可见大量脱落及坏死的神经元.不同剂量染毒组的肾组织较对照组出现病理性改变,例如变性、坏死、组织出现水肿及炎性细胞浸润等.4组大鼠海马组织及肾组织SOD活力、GSH和MDA含量比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);其中低、中、高染毒组海马组织及肾组织SOD活力、GSH含量均低于对照组,MDA含量均高于对照组;中、高染毒组海马组织及肾组织SOD活力、GSH含量均低于低染毒组,MDA含量均高于低染毒组;高染毒组海马组织及肾组织SOD活力、GSH含量均低于中染毒组,MDA含量均高于中染毒组(P＜0.05).结论 NaAsO2中毒可使大鼠海马组织神经元形态结构及肾组织结构损伤,同时提示氧化应激可能参与NaAsO2致大鼠海马组织及肾组织的毒性作用.
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小檗碱对糖尿病大鼠海马CA3区PPARs和P-TEFb表达的影响(英文)
目的:观察小檗碱对2型糖尿病海马CA3区损伤的保护作用及其该过程中过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)α/δ/γ和正性转录延伸因子b(P-TEflb)的作用.方法:腹腔注射35 mg/kg链脲菌素加高糖高脂饲料喂养16周建立2型糖尿病大鼠模型,随后16周每天分别给予低中高剂量小檗碱75、150、300 mg/kg、非诺贝特100 mg/kg和罗格列酮4 mg/kg,处死大鼠后用HE染色检杳海马CA3区和免疫组化技术检测PPARα、δ、γ和Cdk9、cyclin T1的表达.结果:糖尿病大鼠海马CA3区的锥体细胞形状和排列变得不规则、数量减少,中高剂量小檗碱和罗格列酮能恢复受损伤的锥体细胞接近正常大鼠的水平.在海马CA3区几乎检测不到PPARγ蛋白的表达,中高剂量小檗碱和非诺贝特明显增加糖尿病大鼠中减少了的PPARα和PPARδ表达(P<0.01);中高剂量小檗碱和罗格列酮能明显使降低了的Cdk9和cyclin T1表达恢复至正常水平(P<0.01).结论:小檗碱调控海马CA3区PPARα/δ和正性转录延伸因子b(Cdk9和cyclin T1)蛋白的表达可能是其改善海马锥体细胞损伤的机制之一.
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GABA及受体拮抗剂对大鼠海马CA3区长时程增强效应的影响
目的 探讨GABA在海马CA3区长时程增强(longterm potentiation,LTP)诱导和形成中的作用.方法 应用在体电生理研究方法,观察局部给予GABA及GABAA受体拮抗剂bicuculline对海马CA3区LTP诱导和维持的影响;应用高效液相色谱荧光检测技术测定LTP诱导90 min后实验侧海马组织GABA含量变化.结果 ①强直刺激PP纤维诱导LTP 90 min后,海马组织GABA水平(119.3±10.8)μmol·g-1 protein较对照组(206.4±24.7)μmol·g-1 protein降低(P＜0.01);谷氨酸含量与对照组比差异无显著性(P＞0.05).②强直刺激前5 min局部给予GABA 200 nmol,LTP诱导明显被抑制,相对PS幅值在各个时间点均低于LTP诱导组(P＜0.01)而与对照组接近(P＞0.05);给予GABAA受体拮抗剂甲基溴化荷包牡丹碱(bicuculline methbromide,BMB)1 nmol 1 min再给予GABA 200 nmol,发现GABA对LTP的抑制作用减弱,PS幅值高于只给予GABA组(P＜0.01).③强直刺激PP纤维诱导LTP形成30 min后,海马CA3区局部给予GABA 200 nmol,LTP效应被翻转,相对PS幅值在各时间点均低于LTP诱导组(P＜0.01)而与对照组接近(P＞0.05);给予BMB 1 nmol 1 min后再给予GABA200 nmol,GABA对LTP效应的抑制作用减弱,PS幅值高于只给予GABA组(P＜0.01)而低于LTP组(P＜0.01).④BMB 1 nmol可使低频测试刺激诱发的场电位PS幅值明显升高,90 min内稳定在基础幅值的194.8%±3.6%水平,与强直刺激诱导的LTP组PS幅值接近(P＞0.05).结论 GABA可抑制大鼠海马CA3区LTP的诱导和形成.
关键词： GABA 穿通纤维 CA3区 长时程增强(LTP) 海马 -
新生期重复吸入七氟烷的成年大鼠海马组织CA3区 Aβ、Tau 蛋白表达变化
目的：观察新生期重复吸入七氟烷对成年大鼠海马组织CA3区β淀粉样蛋白（ Aβ）和异常磷酸化微管相关蛋白（ Tau蛋白）的影响。方法取24只新生大鼠，随机分为A、B、C组，每组各8只。分别于出生7、14、21 d时将各组大鼠置于自制麻醉剂箱中，连接麻醉机，A、B、C组分别吸入2．6％七氟烷、1．5％七氟烷、（1 L O2＋l L空气）／min，每次1 h ，1次／d。待大鼠完全苏醒后放回原笼，常规饲养至出生95 d（成年期）备用。出生95 d检测各组成年大鼠海马组织CA3区Aβ和Tau蛋白。结果出生95 d时A、B、C组海马组织CA3区Aβ蛋白的相对表达量分别为0．431±0．092、0．417±0．097、0．334±0．100，磷酸化Tau蛋白的相对表达量分别为0．434±0．055、0．456±0．059、0．410±0．060。 A、B两组海马组织CA3区Aβ蛋白的相对表达量与C组相比，P均＜0．05；B组海马组织CA3区磷酸化Tau蛋白的相对表达量与C组相比，P＜0．05。结论新生期重复吸入七氟烷可导致成年大鼠海马组织CA3区Aβ和Tau蛋白表达升高。
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Fluoro-JadeB法检测异丙酚麻醉后新生大鼠海马神经元的变性死亡
异丙酚是临床常用的静脉麻醉药,因其具有起效快、苏醒迅速等特点,也被广泛应用于新生儿和婴幼儿的全身麻醉中[1].但是,异丙酚对发育期的大脑是否产生神经毒性,大家观点不一[2-3].我们采用Fluoro-Jade B(FJB)染色法,观察异丙酚麻醉后新生大鼠海马CA1区、CA3区和齿状回神经元的变性死亡情况.
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慢性捆绑应激致大鼠海马CA3区锥体细胞超微结构的变化
目的观察慢性捆绑应激紧张对大鼠海马神经元超微结构的影响.方法实验组采用捆绑器每天捆绑6h,21d后用透射电镜观察海马CA3区锥体细胞超微结构的变化.结果实验组海马CA3区锥体细胞细胞器减少,粗面内质网局部扩张并脱颗粒;线粒体肿胀,嵴数量减少;脂褐素增加;核膜内陷,核内外有空泡.结论慢性捆绑应激导致大鼠海马CA3区锥体细胞退化.
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EphA5/ephrinA5在癫癎大鼠海马CA3区的表达变化及作用
探讨EphA5及其配体ephrinA5在癫癎大鼠模型海马内表达变化及其在颞叶癫癎发病中的作用.方法将240只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组(n=120)和癫癎组(n=120),建立氯化锂-匹罗卡品颞叶癫癎大鼠模型.致癎后分别选取12 h、24 h、7 d、15 d、30 d和60 d 6个时间点为亚组(n=20),采用原位杂交法检测各亚组大鼠海马CA3区和齿状回(DG)ephrinA5 mRNA表达水平(n=9);采用免疫组化法检测各亚组大鼠海马CA3区和DG EphA5蛋白的表达水平(n=9);采用Neo-Timm银染法观察各亚组大鼠海马CA3区的苔藓纤维出芽情况(n=2).结果原位杂交结果显示:ephrinA5 mRNA在海马CA3区可见表达,但在DG无表达;与同时间点对照组相比,致癎后7 d、15 d,癫癎组大鼠海马CA3区ephrinA5 mRNA表达明显下调(P<0.05),在致癎后30 d、60 d,癫癎组大鼠海马CA3区ephrinA5 mRNA表达逐渐上调(P<0.05),且与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05).免疫组化结果显示:EphA5蛋白在大鼠海马CA3区及DG区均有表达,其水平变化趋势与ephrinA5 mRNA相一致.Neo-Timm银染法结果显示:致癎后7 d、15 d,癫癎组大鼠海马CA3区存在明显苔藓纤维出芽.结论配体ephrinA5协同受体EphA5在海马CA3区的表达下调,可能共同参与了CA3区的苔藓纤维出芽作用机制,并与癫癎的发生、发展关系密切.
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条件性恐惧记忆形成中大鼠海马CA1/CA3区Hsp90表达变化
目的 探讨大鼠条件性恐惧记忆形成过程中海马CA1/CA3区Hsp90表达变化.方法 电击组和对照组大鼠各9只,分别给予或不给足底电击,1h和24 h后检测大鼠的僵住反应,然后牺牲动物,分别提取海马CA1和CA3区蛋白,Western blot检测NR2B及Hsp90表达情况.结果 电击组大鼠在1h和24 h的僵住反应时间百分比分别为(49.1±18.6)％和(75.7±19.6)％,明显高于对照组[(分别为(14.0±4.5)％,(32.1±22 7)％],差异有统计学意义(P＜0.05).24 h大鼠海马CA 1/CA3区Hsp90及CA1区NR2B表达电击组均明显高于对照组(P＜0.05).结论 条件性恐惧记忆形成中大鼠海马CA1/CA3区Hsp90蛋白表达升高,活性增强.Hsp90可能参与了条件恐惧长时记忆的形成.
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捆绑并倒悬复合刺激大鼠海马CA3区神经肽Y和Nestin的表达变化
目的:观察大鼠在严重的急、慢性应激条件下对学习和记忆的影响,这种影响是否会伴有海马内的Nestin、NPY的同步减少.方法:实验以捆绑并倒悬复合刺激3d和21d建立大鼠急、慢性应激模型,Morris水迷宫检测模型大鼠空间学习和记忆的能力；放射免疫方法测定大鼠血浆肾素、血管紧张素Ⅱ水平；免疫组织化学染色观察比较各应激大鼠海马区域NPY、Nestin、NF200阳性细胞表达.结果:急、慢性应激对大鼠的学习记忆能力均明显减退,海马组织内细胞明显受到损害,并以急性应激组更严重,表现为CA3区的Nestin、NPY表达和阳性细胞比例明显减少,而慢性应激大鼠缺乏表达NF200的成熟神经元.结论:成体海马神经组织内的NPY和细胞骨架蛋白系统共同参与了应激早期学习记忆能力减退和持续性脑损害的过程.
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海马CA3区损伤对齿状回颗粒细胞下层新生细胞向颗粒层迁移的影响
目的 明确海马CA3区损伤对齿状回颗粒细胞下层(SGZ)新生细胞向颗粒细胞层迁移的影响.方法 BrdU标记齿状回SGZ神经干细胞,Ibotenic acid或同体积生理盐水海马CA3区立体定位注射,4周后BrdU+ NeuN免疫荧光染色观察分析迁移到齿状回颗粒细胞层的新生细胞的数量和比例,分别采用t-test和两因素方差分析方法进行数据分析.结果 Ibotenic acid注射组动物CA3区锥体细胞大量死亡,损伤局限于损伤侧CA3区.与生理盐水组比较,Ibotenic acid组损伤侧迁移到海马齿状回颗粒细胞层的新生细胞数量和占齿状回BrdU阳性细胞总数的比例均明显降低(P＜0.01).结论 海马CA3区损伤阻碍了齿状回SGZ新生细胞向颗粒细胞层的迁移,提示与齿状回有相互投射关系的CA3区对SGZ新生细胞向颗粒细胞层的迁移有重要作用.
关键词： 海马 神经再生 齿状回颗粒细胞下层(SGZ) CA3区 -
Ghrelin对原代培养大鼠海马神经元内Ca2+浓度影响
目的 探讨胃促生长素(ghrelin)对SD大鼠海马神经元细胞内Ca2+浓度影响及可能的机制.方法 原代培养的SD大鼠海马神经元细胞,随机分为空白对照组(A组)、4 nmol/L ghrelin组(B组)以及YIL718+4 nmol/L ghrelin组(C组).A组细胞不做任何特殊处理;B组细胞在大鼠海马培养14 d后,用含有4 nmol/L gh-relin的培养液继续孵育24 h;C组细胞在4 nmol/L ghrelin处理大鼠海马神经元0.5h前,加入10 μmol/L的YIL718进行处理.然后采用confocal结合Fluo-4 AM荧光钙成像技术实时记录海马神经元细胞内Ca2+浓度及谷氨酸诱导的胞内钙Ca2+浓度.同时结合实时定量反转录聚合酶链反应技术对ghrelin可能引起的基因表达的变化进行分析.结果 与A组相比,4 nmol/L ghrelin处理24 h可升高胞内Ca2+的水平(F=5.671,q=4.489,P＜0.01),但可抑制谷氨酸诱导的细胞内Ca2+水平的升高(F=19.770,q=8.038,P＜0.001);YIL718预处理可消除ghrelin的影响(q=3.180,P＜0.05).Ghrelin可抑制海马神经元kcnj2 mRNA的表达(t=4.101,P＜0.05).结论 ghrelin可能通过激活GHS-R1a调节海马神经元细胞内游离Ca2+的浓度,提示ghrelin/GHS-R1a通路对海马神经元的活动有调控作用.Ghrelin抑制谷氨酸诱导的神经元细胞内Ca2+浓度升高,可能是其抑制海马依赖性记忆形成的细胞基础.
