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纳米雄黄混悬液诱导Siha细胞凋亡及对HPV16E6/E7表达的影响
目的:探讨纳米雄黄混悬液对人宫颈癌Siha细胞的抑制增殖、诱导凋亡作用及其对HPV16E6和E7致瘤基因的影响.方法:采用微射流法制备纳米雄黄混悬液,应用不同质量浓度(6.25,12.5,25,50 mg·L-1)的纳米雄黄混悬液作用于Siha细胞不同时间(12,24,48,72 h),光镜和透射电镜观察实验组(不同质量浓度的纳米雄黄混悬液处理组)和对照组(不加药物的细胞)细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DNA Ladder形成;MTT比色法测定细胞生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期改变;RT-PCR方法检测HPV16E6和E7的表达.结果:纳米雄黄混悬液25～50 mg·L-1处理Siha细胞48,72 h后,细胞存活率降低,凋亡增加,作用呈时间-剂量依赖关系.电镜显示细胞呈典型的凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞DNA Ladder形成;流式细胞术检测证实细胞凋亡率与纳米雄黄混悬液作用浓度呈明显相关,与对照组相比,差异有极显著意义(P<0.01),且细胞呈G0-G1期阻滞.RT-PCR检测显示随着纳米雄黄混悬液作用浓度的增加,HPV16E6和E7的表达不同程度地受到抑制.结论:纳米雄黄混悬液对于Siha细胞具有诱导凋亡、抑制增殖的作用,其机制可能与其抑制HPV16E6和E7致瘤基因的表达有关.
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负载HPV16E6基因树突状细胞疫苗的构建
目的 以阳离子脂质体为载体,构建载入人乳头瘤病毒16型E6蛋白(HPV16E6)基因树突状细胞(DC)疫苗,研究其安全性及转染效率.方法 将pcDNA3.1-HPV16E6质粒与阳离子脂质体混合形成复合物后转染树突状细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态,流式细胞仪及免疫细胞化学检测基因表达效率.结果 转染后的DC可见胞浆内颗粒增多,胞质突起增加,细胞生长良好.免疫细胞化学、流式细胞仪结果DC转染率49.8%.结论 阳离子脂质体可用于DC疫苗构建,具有高效性及安全性.
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应用荧光定量聚合酶链方法检测宫颈组织中人乳头瘤病毒16E6基因
目的建立荧光定量聚合酶链(FQ-PCR)方法检测宫颈细胞中人乳头瘤病毒16型(HPV16)E6基因的方法.方法以220例新疆妇女宫颈不同病变组织DNA作为样本,人乳头瘤病毒16型(新疆株)E6基因(HPV16E6,AF327851)作为扩增的靶基因,同时以人β-肌动蛋白基因片段作为内参照,借助于设计的目的基因引物,两个特异的荧光探针,在筛选的FQ-PCR优化反应体系中,同时对两个基因片段进行扩增,得到HPV16E6的相对含量.结果对β-肌动蛋白阳性的宫颈不同病变组织中HPV16E6阳性率及其相对含量进行统计分析,新疆妇女宫颈脱落细胞标本96例中,HPV16E6阳性3例(3.3%);宫颈癌蜡块组织59例中HPV16E6阳性49例(83.0%);宫颈上皮内瘤变(CIN)蜡块组织65例中,HPV16E6阳性28例(75.7%);宫颈炎蜡块组织33例,HPV16E6阳性28例(93.3%).HPV16E6的相对含量随病情加重呈上升趋势,二者呈显著正相关,相关系数为O.83.结论建立的FQ-PCR检测宫颈不同病变组织内HPV16E6基因的方法,能反映单位细胞人乳头瘤病毒的复制情况,筛查宫颈癌患者,并可能应用于宫颈癌的风险评估和疗效观察.
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HPV16E6与抑癌基因p53在口腔癌中的表达及临床意义
目的:探讨HPV 16E6基因和p53基因在口腔癌中的表达,以及口腔癌的病理分级和临床分期与HPV 16E6基因及p53基因的相关性.方法:纳入173例口腔癌、98例口腔癌癌前病变以及79例癌周正常组织,采用免疫组织化学方法进行HPV 16E6和p53表达水平检测,统计口腔癌、口腔癌癌前病变、癌周正常组织以及不同病理分级和临床分期的口腔癌中HPV16E6基因及p53基因的阳性表达情况,采用SPSS21.0软件包对数据进行x2检验.结果:在口腔癌组织中,HPV 16E6的阳性表达率为81.5％(141/173),p53的阳性表达率23.7％(41/173);在口腔癌癌前病变组织中,HPV16E6的阳性表达率为39.8％(39/98),p53的阳性表达率为57.1％(56/98);在口腔癌癌周正常组织中,HPV16E6的阳性表达率为2.5％(2/79),p53的阳性表达率为89.9％(71/79).3组中HPV16E6的阳性表达率和p53的阳性率表达存在差异,其中,HPV16E6在口腔癌中的阳性表达率显著高于其他2组(P＜0.05);而口腔癌中p53的阳性表达率显著低于其他2组.随着口腔癌患者临床分期和病理分级的增加,HPV16E6阳性表达率逐渐升高,而p53的阳性表达率则显著下降(P＜0.05).结论:HPV 16E6蛋白和p53蛋白在口腔癌的发生与发展过程中可能发挥十分重要的作用.
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宫颈不同级别病变组织中HPV16E6及hWAPL基因表达情况及两者的关系
目的 探讨宫颈不同级别病变组织中人乳头状瘤病毒(HPV) 16E6及hWAPL基因表达情况及两者的关系.方法 选取宫颈不同级别病变患者120例,收集其病变组织宫颈液基细胞学样本及临床病理资料,应用液基细胞学技术和免疫细胞化学技术,研究hWAPL蛋白在正常宫颈、癌前病变及宫颈癌的液基细胞中的表达;检测宫颈HPV-DNA,研究正常宫颈、癌前病变及宫颈癌中HPV感染情况;比较hWAPL表达及HPV感染在正常宫颈、癌前病变及宫颈癌液基细胞中的分布特征,并进行统计学分析;在上述实验的基础上,进一步构建以宫颈液基细胞为检测对象的宫颈癌筛选模式.结果 HPV16E6及hWAPL在宫颈癌组的阳性表达率大于正常宫颈组、癌前病变组(P＜0.05);HPV16E6及hWAPL的表达强度大于正常宫颈组、癌前病变组(P＜0.05);HPV16E6及hWAPL蛋白在不同宫颈不同级别病变组织中表达具有相关性(P＜0.05).结论 hWAPL表达对宫颈上皮内瘤变的诊断有参考价值,hWAPL表达强度对进一步明确ASCUS中的组织学类型具有参考价值,值得临床推广与应用.
关键词： 宫颈肿瘤 癌 宫颈不同级别病变组织 HPV16E6 hWAPL -
HPV16E6和p53在口腔癌中的表达及相关性研究
目的 探讨HPV16E6和抑癌基因p53在口腔癌中的表达,及其与口腔癌临床分期、病理分级的相关性.方法 用免疫组织化学方法检测149例口腔癌、88例口腔癌癌前病变和49例癌周正常组织标本中HPV16E6和p53的表达,统计口腔癌不同临床分期和病理分级中HPV16E6和p53的阳性表达率.结果 口腔癌组织、口腔癌癌前病变组织和口腔癌癌周正常组织中HPV16E6的阳性表达率分别为79.9％ (119/149)、38.6％ (34/88)和2.0％ (1/49),p53的阳性表达率分别为24.2％(36/149)、55.7％(49/88)和91.8％ (45/49).随着临床分期和病理分级的增加,HPV16E6阳性表达率明显增加,而p53阳性表达率却明显减少(P＜0.05).结论 HPV16E6蛋白的表达升高和p53蛋白的表达降低可能会导致口腔癌的发生和发展.检测患者口腔癌组织中HPV16E6和p53的表达可用于评定口腔癌的恶性程度.
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siRNA抑制HPV16E6基因对鼻咽癌细胞生物学特性的影响
目的 通过RNA干扰(RNA interfering,RNAi)技术干扰E6癌基因的表达,探讨小干扰RNA(small interferirng RNA,siRNA)对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)HNE-1细胞生物学特性的影响.方法 针对人孔头瘤病毒(human papilloma vinus,HPV)16 E6基因设计合成4条siRNA,利用lipofectamineTM2000脂质体转染鼻咽癌HNE-1细胞.通过半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western blot检测转染后细胞E6 mRNA和蛋白变化,采用MTT检测转染后癌细胞的生长增殖情况,流式细胞仪PI染色法检测细胞的凋亡率.结果 转染有效siRNA后,PT-PCR及Western blot结果显示,HNE-1细胞E6基因mRNA和蛋白的表达明显降低,抑制率分别为66.3%、56.7%.MTT法检测显示,细胞的生长增殖受到明显抑制.流式细胞仪检测细胞凋亡,发现凋亡率增加.结论 siRNA可以有效干扰鼻咽癌HNE-1细胞内HPV16E6基因的表达,从而诱导肿瘤细胞的凋亡.
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两株宫颈癌细胞株中HPV16E6/E7蛋白的表达
目的:探索及检测宫颈癌细胞株Caski、SiHa细胞内HPV16(16型人乳头瘤病毒)E6/E7蛋白含量,筛选宫颈癌基因治疗研究的合适细胞株.方法:用间接免疫荧光染色及流式细胞术检测Caski、SiHa宫颈癌细胞株中HPV16E6、HPV16E7蛋白含量(荧光强度值).结果:Caski细胞中HPV16E6、HPV16E7蛋白含量分别为:20.72±6.35、56.80±4.30;SiHa细胞中HPV16E6、E7蛋白含量分别为:1.77±0.75、49.27±8.06.2细胞株间HPV16E7蛋白表达量无明显差异(P＞0.05).结论:Caski、SiHa宫颈癌细胞株中HPV16E6、E7蛋白的表达是不平行的.Caski细胞适用于以HPV16E6,HPV16E7蛋白为观察对象的研究,SiHa细胞可用于HPV16E7蛋白的研究,但不适宜用于以HPV16E6蛋白为观察对象的研究.
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新疆妇女宫颈脱落细胞HPV16E6基因的PCR及荧光定量PCR检测
目的了解新疆妇女人乳头瘤病毒16型(HPV16)的感染状况. 方法用PCR及荧光定量PCR(FQ-PCR)方法检测妇科门诊普通患者宫颈脱落细胞及分泌物中人乳头瘤病毒16型E6基因(HPV16E6 ) ,以普通门诊患者宫颈脱落细胞及分泌物DNA作为样本,以人乳头瘤病毒(HPV16E6)作为扩增的靶基因,同时以人β-actin 基因片段作为细胞内参照,借助于两对引物, 两个特异的荧光探针, 用荧光定量PCR(FQ-PCR)方法对这两个片段进行扩增, 得到单位细胞HPV16E6的相对含量;同时进行定性PCR检测. 结果宫颈脱落细胞标本159例中, β-actin阳性154例;HPV16E6阳性共12例,阳性率为7.8%.PCR与FQ-PCR结果基本一致,但FQ-PCR更敏感. 结论建立的FQ-PCR检测宫颈脱落细胞内HPV16E6 基因的方法,能反映单位细胞内病毒的复制情况,可用于性传播感染(STI)及宫颈癌的筛查.
