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小鼠NKT细胞体外扩增的初步研究
目的 探索小鼠脾脏NKT细胞的分离、纯化及体外培养扩增的方法 .方法 分离小鼠脾细胞,制成单细胞悬液,α-半乳糖神经鞘胺醇(α-galactosylceramide,α-Galcer)和rhIL-2作用下刺激其活化增殖,不同时间点取样,利用双色免疫荧光抗体标记技术和流式细胞术(FACS)检测NKT细胞纯度,并用MTT法检测其对靶细胞K562的杀伤活性.结果 脾NKT细胞在第0、4、8、12天计数细胞总数为0.5×107、(1.3±0.1)×107、(1.9±0.2)×107和(2.2±0.2)×107,第0、4、8、12天纯度分别为(6.27±1.04)%、(8.54±1.58)%、(10.65±1.95)%和(21.36±4.34)%;α-Galcer和rhIL-2作用下,纯化的NKT细胞较脾新鲜分离的单个核细胞对靶细胞K562的杀伤作用强.在效靶比20∶1时,培养时间为4、8,12天的NKT细胞杀伤率分别为52.7%、71.2%和85.7%,明显高于脾MNC 33.8%(P＜0.05).结论 在α-Galcer和rhIL-2作用下,小鼠NKT细胞得到扩增,细胞纯度约为22%.在效靶比20∶1时,NKT细胞对K562细胞杀伤率约为86%.
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手足口病患儿淋巴细胞亚群免疫特征检测及价值
[目的]总结手足口病（ HFMD）患儿外周血T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞及NKT细胞免疫特征，探讨其在HFMD疾病发生发展中的机制及临床检测价值。[方法]应用流式细胞术检测152例HFMD患儿、45例健康对照组幼儿外周血中T淋巴细胞（ CD3＋细胞、CD3＋CD4＋细胞、CD3＋CD8＋细胞）、B淋巴细胞（ CD3－CD19＋细胞）、NK细胞（CD3－CD56＋细胞）、NKT细胞（CD3＋CD56＋细胞）百分率，采用SPSS 13．0统计分析软件，分别对HFMD发病期与健康对照组、HFMD发病期与HFMD恢复期、HFMD重型组与HFMD普通组进行各组淋巴细胞亚群百分率间均数比较，两组间均数的比较方差齐时采用两个独立样本的t检验，方差不齐时用t＇检验，P＜0．05为差异有统计学意义。[结果] HFMD发病期CD3＋细胞、CD3＋CD4＋细胞、CD3＋CD8＋细胞、NK细胞百分率及CD4＋／CD8＋比值低于健康对照组；NKT细胞、B细胞百分率HFMD发病期高于健康对照组，各组间均数的比较，差异均有统计学意义（P＜0．05）。 HFMD发病期CD3＋细胞、CD3＋CD4＋细胞、CD3＋CD8＋细胞、NKT细胞百分率及CD4＋／CD8＋比值低于HFMD恢复期；B细胞、NK细胞百分率HFMD发病期高于HFMD恢复期，各组间均数的比较，差异均有统计学意义（P＜0．05）。 HFMD重型组CD3＋细胞、CD3＋CD4＋细胞、CD3＋CD8＋细胞、NKT细胞百分率及CD4＋／CD8＋比值低于HFMD普通组；B细胞、NK细胞百分率HFMD重型组高于HFMD普通组，除NKT细胞外，其余各组间均数的比较，差异均有统计学意义（P＜0．05）。[结论] HFMD患儿淋巴细胞亚群免疫功能紊乱。 HFMD发病期淋巴细胞亚群中CD3＋细胞、CD3＋CD4＋细胞百分率降低，B细胞百分率增高；HFMD恢复期NKT细胞百分率增高。淋巴细胞亚群免疫特征检测可作为HFMD患儿疾病转归分析指标。
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艾迪注射液联合化疗对食管癌患者免疫功能的影响
目的 比较艾迪注射液联合化疗与单纯化疗对食管癌患者的疗效、毒副反应及免疫功能的影响.方法 将61例食管癌患者随机分为两组.观察组在化疗开始起同时应用艾迪注射液,每次100 mL加入0.9％生理盐水500 mL静脉滴注,每天1次,连用10 d.对照组为单纯化疗.化疗方案均为DF方案(顺铂与5-氟尿嘧啶的联合用药).结果 观察组有效率36.7％,对照组为22.6％,无显著性差异(P＞0.05).观察组白细胞下降率明显低于对照组,差异有显著性(P＜0.05).观察组治疗前后免疫功能变化无显著性差异(P＞0.05).对照组患者免疫功能化疗后显著低于化疗前(P＜0.05).结论 艾迪注射液联合化疗治疗食管癌,可降低化疗对患者免疫功能的影响及毒副反应,改善NKT细胞活性.
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CD3+ CD56+ NKT细胞与Vα24+iNKT细胞的检测及其表型特点分析
为了比较CD3+ CD56+ NKT细胞与CD3+ TCRVα24+ iNKT细胞在外周血淋巴细胞中的相对比例及其表面分子表达的差别,本研究采集了健康人外周全血,用四色荧光抗体染色和流式细胞术检测CD3+ CD56+ NKT细胞和CD3+TCRVα24+ iNKT细胞在淋巴细胞中的比例,及其亚群表型及活化分子CD69的表达情况.检测结果表明,在正常人外周血淋巴细胞中CD3+ CD56+ NKT细胞所占比例为3.90％士2.89％,以CD8亚群占多数(57.61％±17.35％);而CD3+TCRVα24+ iNKT细胞所占比例仅为0.39％士0.19％,且以CD4亚群占多数(56.60％±19.66％).两种NKT细胞的相对数量之间存在显著正相关(r=0.467,P＜0.05),但两类细胞之间极少重叠.CD16和CD161在CD3+ CD56+ NKT细胞上的表达量显著高于在CD3+ TCRVα24+ iNKT细胞上的表达量(P均＜0.01).活化分子CD69在两种细胞上的表达量均较低(P＞0.05).本研究结果表明,正常人外周血CD3+ CD56+ NKT细胞与CD3+ TCRVα24+ iNKT细胞在相对数量、亚群及表型上存在显著差异,是两种截然不同的NKT细胞.
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变应性鼻炎患者NKT细胞数量和功能分析
为了研究NKT细胞是否参与变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)发病或通过细胞因子调控而影响该疾病发生,本研究通过分析AR患者外周血NKT细胞数量和增殖和产生细胞因子格局的动态变化来探索NKT在AR发病中的调节作用.通过用流式细胞仪分析其特异性NKT细胞表面标志发现,AR患者和正常人的外周血NKT细胞数量无明显差异.继之用NKT细胞特异性刺激剂α-GalCer进行NKT细胞增殖的动态分析,结果也提示AR患者和正常人的外周血NKT细胞增殖格局无明显差异.但是,用ELISA分析了AR患者外周血NKT细胞受α-Galcer刺激后分泌细胞因子格局后发现:AR患者的NKT细胞分泌IL-4和IL-5在72 h、96 h时比正常对照组明显增加,而分泌IL-12和IFN-γ的量则明显低于正常对照组.提示AR患者的NKT细胞可能通过分泌IL-4和IL-5上调Th2细胞功能,同时分泌IL-12和IFN-γ能力降低,提示AR患者的NKT细胞诱导Treg和自身的调节能力均降低.这些因素的综合可能是NKT细胞参与AR发病的重要途径之一.
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NKT细胞在CFA促进的Th1型免疫应答中的作用
为探索CFA促进小鼠对蛋白质抗原产生Th1介导的特异性免疫应答的机制,我们用OVA+CFA和OVA+IFA免疫C57BL/6小鼠,并于第3天、第8天后用MACS+FACS法分离引流淋巴结中NKT细胞,在体外经CD3单抗刺激2 d后测定其分泌的细胞因子数量及格局.同时于免疫后第8天分离引流淋巴结抗原特异性T细胞,测定其分泌细胞因子的格局;并于再次免疫后2周检测小鼠血清抗体类型.ELISA结果显示,与OVA+IFA组相比,OVA+CFA免疫小鼠引流淋巴结NKT细胞和抗原特异性T细胞分泌IFN-γ的能力均显著升高(P<0.05),且血清抗体类型以IgG2a为主.表明CFA促进抗原特异性Th0细胞极化为Th1细胞可能是通过激活NKT细胞使之在免疫应答局部产生大量的IFN-γ而实现的.
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URSA小鼠模型中NKT细胞功能失调研究
利用原因不明复发性自发性流产(URSA)小鼠模型(CBA雌鼠×DBA/2J雄鼠),测定免疫性流产孕鼠不同孕期子宫蜕膜及胎盘内NKT细胞的数量及其分泌的细胞因子的格局,以调查NKT细胞数量和功能失调在URSA中的可能作用.研究结果显示,与正常孕鼠相比,流产模型鼠妊娠早期子宫和蜕膜中NKT细胞数量减少,分泌IFN-γ能力降低.我们推测,妊娠早期子宫胎盘和蜕膜NKT细胞数量和功能失调可能是导致URSA的机制之一.
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同种异基因骨髓细胞移植诱导嵌合体小鼠生成
采用C57BL/J和BALB/c两种小鼠进行骨髓细胞移植.移植前受体小鼠经6.0 Gy 60Co γ射线照射.用细胞染色法和流式细胞术分析了射线对小鼠淋巴细胞的损伤强度和照射后移植了骨髓细胞的小鼠在不同时间内的淋巴细胞亚群变化.结果表明,(1)6.0 Gy γ射线照射受体鼠,能杀伤95.5%的外周淋巴细胞,但是不影响自身H-2Kb分子在淋巴细胞表面表达的百分数.残留细胞中CD3+T细胞、NK1.1+淋巴细胞、CD3+/NK1.1+淋巴细胞的阳性率分别由照射前的40.44%增加到45.30%、1.13%增加到37.41%和1.07%增加到5.86%(P≤0.01);(2)小鼠的淋巴细胞数量从照射后30 d开始恢复,到190 d达到正常值;(3)照射后进行同种异基因骨髓细胞移植后的第60天,受体淋巴细胞表面自身H-2Kb抗原表达下降,CD3+/NK1.1+淋巴细胞百分数增加.随H-2Kb的抗原表达的恢复,CD3+/NK1.1+淋巴细胞百分数下降;(4)在细胞移植的第190天,受体小鼠(黑色)表型呈现出供体鼠(白色)颜色特征.在嵌合体小鼠外周淋巴细胞中,有2.5%为供体H-2Kd阳性细胞,CD3+/NK1.1+淋巴细胞百分数为1.88%,明显高于正常值(P≤0.01).以上结果表明,6.0 Gy 60Coγ射线照射能诱导免疫耐受,其耐受性的形成可能与初保存了高比率的CD3+T细胞和NK1.1+淋巴细胞,以及在耐受性形成中,CD3+/NK1.1+淋巴细胞数量的增加有关.
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NKT细胞及其在抗结核免疫中作用的研究进展
NKT细胞是一种同时具有T细胞与NK细胞表面标志的新型淋巴细胞.具有CD1d限制性的NKT细胞在抗结核免疫中具有重要作用.本文综述NKT细胞在抗结核病免疫中的研究进展.
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NKT细胞在母胎界面免疫调节中的作用
NKT细胞(natural killer T cell)是一类新型的免疫调节细胞,该类细胞同时表达T细胞表面受体(TCR)和NK细胞的抗原NK1.1.NKT细胞上的TCR通过限制性识别由CD1d分子提呈的脂类抗原,进一步被激活后可分泌多种细胞因子,从而调节机体的免疫反应.近年来逐渐认识到NKT细胞可能参与了母胎界面的免疫调节.
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NKT细胞在移植免疫中的作用
NKT细胞(natural killer T cells)作为一类具有独特生物学活性的细胞亚群,对移植免疫应答具有调节作用,在"特惠"免疫的形成、同种异体、异种移植免疫耐受的诱导以及GVHD的保护等方面扮演着重要的角色,但其确切的作用机制仍须进一步的探索.
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NK T细胞
NK T细胞是一个特殊的T细胞亚群,因表达NK细胞的表面标志NK1.1而得名.NK T细胞的共受体表型主要是CD4CD8,也可以是CD4+,少数为CD8+.NKT细胞大的特征是其TCRαβ中的α链编码基因在同一种动物中是恒定的,而β链编码的基因极其有限.NK T细胞在免疫调节、抗肿瘤和自身免疫的调节中起重要作用.
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免疫调节细胞的研究现况:NKT细胞
NKT细胞在免疫学的研究中日趋广泛.目前的进展揭示,该群细胞既有效应功能又有调节作用,其结构与功能的研究必将对一系列临床免疫病的病因学和治疗起到指导作用.本文旨在对NKT细胞研究的近况作一概括和阐述,希望对国内有关NKT细胞的结构和功能的研究起促进作用.
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H7N9禽流感患者外周血3种主要固有免疫细胞的变化及意义
2013年3月,在上海及安徽3例已死亡的患者体内首次分离出一种新型的禽流感病毒H7N9,该病毒可导致严重的致死性呼吸系统疾病[1].苏州大学附属第一医院是苏州市H7N9禽流感的定点收治医院,该院感染病科近5年来共收治26例H7N9禽流感患者,其中18例好转、7例死亡,另有1例自行出院,预后不明.目前认为H7N9禽流感患者机体免疫系统功能状况是决定病情发展和预后的重要因素.免疫系统包括免疫器官、免疫细胞和免疫分子,其中免疫细胞分为固有免疫细胞和适应性免疫应答细胞.本研究旨在探讨H7N9禽流感患者部分固有免疫细胞的变化,并阐明其变化的临床意义.
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NKT细胞在肝癌组织中的分布状况与肝癌局部免疫的研究
目的:通过双重免疫组织化学的方法来研究NKT细胞在肝癌组织、正常肝脏组织以及其它肝脏病变组织中的分布情况,探讨NKT细胞的数量分布变化与肝癌组织局部微环境免疫状态的关系.方法:采用双重免疫组化方法对上述组织石蜡切片染色,随机选取视野计数NKT细胞,然后统计分析.结果:①侵袭性高或有转移(有癌栓)的HCC组NKT细胞数低于侵袭性低或无转移(无癌栓)的HCC组:P＜0.05(P=0.038);②正常肝组织组NKT细胞数与肝癌癌周组织组NKT细胞数则无统计学差异:P＞0.05(P=0.731);③在肝癌组中,有包膜组和无包膜组两组数据在统计学上没有明显差异:P＞0.05(P=0.620);④小肝癌组和大(巨大)肝癌组两组数据在统计学上有显著差异:P＜0.05(P=0.026);⑤以术前AFP阴、阳性(20μg/L为标准),术前AFP阴性组和术前AFP阳性组两组数据在统计学上没有明显差异:P＞0.05(P=0.618).结论:①NKT细胞数与肝癌侵袭、转移性呈负相关,提示NKT细胞对肝癌的侵袭、转移有抑制作用;②正常肝组织(供体肝组织)及肝脏良性病变周围肝组织中NKT细胞的数量分布与原发性肝癌癌周组织中NKT细胞的数量分布没有明显的统计学差异,说明肝组织中NKT细胞的数量可能与原发性肝癌的易感性无关;③在肝癌的病理分型中,NKT细胞数量分布与肝癌的大小、癌栓的有无有关,与肿瘤包膜的有无、术前AFP的阴性、阳性无关.提示NKT细胞随肝癌的进展而受到抑制.
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α-半乳糖酰基鞘氨醇与肝脏疾病关系的研究进展
-α半乳糖酰基鞘氨醇(α-GalCer)是一种从海绵体中提取由CDld递呈的糖酯,由亲水性的碳酸化合物部分与疏水性的酰基鞘氨醇部分通过α连接形成.α-GalCer是NKT细胞的配体,在体内外均能有效激活NKT细胞,活化的NKT细胞在机体的自身免疫性疾病、感染性疾病、肿瘤以及移植排斥等方面发挥着重要的作用.
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CD11b+NKT细胞抑制Poly I:C诱导小鼠肝损伤中CD8+T细胞增殖反应
目的:研究Poly I:C诱导的肝损伤模型中肝脏内上调的CD11b+ NKT细胞对CD8+T细胞增殖反应的作用.方法:经腹腔注射Poly I:C(20μg/g)制备Poly I:C诱导小鼠肝损伤模型,流式细胞术检测CD11b+ NKT细胞的比例、T细胞增殖反应和CD8+T细胞的杀伤功能,ELISA法检测细胞培养上清中的细胞因子浓度.结果:Poly I:C诱导的肝损伤模型小鼠的肝脏中CD11b+ NKT细胞的比例显著上升[(71.7±5.3)％vs(12.4±3.6)％,P＜0.01].细胞因子表达谱分析发现,CD11b+ NKT细胞分泌IFN-γ、IL-4和IL-10的能力显著低于CD11b-NKT细胞.功能分析发现,CD11b+ NKT细胞能够显著抑制anti-CD3/CD28单抗诱导非特异性的和OVA特异性的CD8+T细胞增殖反应,而CD11b-NKT细胞没有此抑制功能;进一步分析发现,CD11b+ NKT细胞并不影响CD8+T细胞的杀伤功能.结论:Poly I:C诱导的肝损伤模型小鼠肝脏中CD11b+NKT细胞比例升高,该细胞能够负反馈抑制CD8+T细胞的增殖反应,但是并不影响CD8+T细胞的杀伤功能.
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肝脏NK/NKT细胞及其生物学意义
对天然杀伤细胞(NK cell)的研究近年受到高度关注.研究发现,肝脏NK/NKT细胞含量在机体天然免疫反应时可增加10倍,可能是机体大的专职天然免疫的器官,对抵御病毒、寄生菌、恶性转化细胞等的侵害具有十分重要的意义.本文就肝脏NK/NKT细胞的功能特点和生物学特性、当前的研究进展及热点问题以及进一步研究的思路和切入点作一述评.
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分枝杆菌主要抗原成分对C57BL/6小鼠肝脏NKT细胞的免疫作用
目的·评价分枝杆菌主要抗原成分对C57BL/6小鼠肝脏NKT细胞的免疫作用.方法·采用尾静脉注射法将牛分枝杆菌BCG活菌、全菌裂解物(WCL)、总脂抗原(TLIP)、培养滤液蛋白B(CFP-B)、脂聚糖(lipoglycan)分别免疫C57BL/6小鼠,免疫后第3、6、12日时分离小鼠肝脏细胞,用流式细胞术检测小鼠肝脏NKT细胞含量变化.以未经抗原免疫小鼠作为对照.结果·流式细胞术检测结果显示:对照组、lipoglycan组、CFP-B组、TLIP组、WCL组和BCG组小鼠肝脏内NKT细胞百分比分别为(0.040 0±0.020 62)％、(0.027 8±0.039 93)％、(0.035 6±0.047 46)％、(0.411 l±0.245 38)％、(0.118 9±0.054 19)％、(0.078 9±0.045 95) ％.统计学分析结果显示:小鼠肝脏内NKT细胞百分比,TLIP组和WCL组显著高于对照组(P＜0.01),且TLIP组高于WCL组;其余抗原组与对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).结论·分枝杆菌主要抗原成分中,TLIP可显著增加C57/BL6小鼠肝脏内NKT细胞数量.TLIP具有潜在的抗结核免疫作用,值得进一步研究.
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肾纤维化大鼠细胞免疫状态分析
目的探讨肾纤维化大鼠细胞免疫功能状态.方法建立阿霉素肾病大鼠模型,3H-TdR掺入法检测脾细胞增殖能力,流式细胞术检测外周血T细胞亚群、NKT细胞及Th1/Th2细胞.结果肾纤维化大鼠脾细胞对Con A诱导的增殖能力明显下降(P＜0.05),T亚群细胞的比例发生改变,随着肾纤维化的进程,CD3+、CD4+所占比例降低,而CD3+、CD8+细胞增多,CD4+/CD8+逐步下降(P＜0.05).外周血CD3+、CD56+细胞却呈上升趋势,机体处于明显的Th2偏移状态.结论肾纤维化大鼠出现明显的细胞免疫功能紊乱.
