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再生障碍性贫血T细胞受体Vβ基因表达及生血合剂对其的干预作用
目的 利用免疫学和分子生物学技术,着重从T细胞受体β链可变区(TCR Vβ)亚家族基因表达角度探讨再生障碍性贫血(AA)的免疫发病机制及中药复方生血合剂的治疗作用.方法 AA患者分别用生血合剂(治疗组10例)和环孢霉素(对照组10例)治疗6个月以上,采用RT-PCR、基因扫描方法检测治疗前后外周血单个核细胞TCR Vβ基因表达的变化.结果 20例AA患者Vβ 24个亚家族基因谱型倾斜,寡克隆亚家族所占百分率明显增多,与健康人(10名)比较差异有显著性(P＜0.01).30%～50%的AA患者存在Vβ2、Vβ5、Vβ6、Vβ15、Vβ16、Vβ22、Vβ23寡克隆亚家族,50%以上的患者存在Vβ8、Vβ21寡克隆亚家族.治疗后两组寡克隆亚家族均比治疗前减少(P＜0.05).结论 多个克隆性增殖的T细胞家族参与了AA的发病过程,生血合剂可改善TCR Vβ谱型倾斜程度,降低异常T细胞克隆性增殖,从而减少异常克隆的T细胞对造血组织的免疫损伤,有利于骨髓造血功能的恢复.
关键词： 再生障碍性贫血 生血合剂 T细胞受体 β链可变区亚家族基因 T细胞克隆性 -
非霍奇金淋巴瘤病人外周血T细胞TCR Vβ谱系的选择性利用和克隆性增殖分析
为了解B细胞性非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)和T细胞性非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)病人TCRVβ亚家族T细胞的分布及其克隆性的情况,利用RT-PCR分别扩增4例B-NHL和2例T-NHL病人外周血单个核细胞的TCRVβ 24个亚家族基因的CDR3,了解病人各Vβ亚家族的利用情况.阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度,以了解T细胞克隆性.结果显示,6例NHL病人外周血T细胞仅选择性表达6-12个Vβ亚家族,全部病人均选择了表达Vβ1,Vβ8,Vβ13和Vβ19,5例病人表达Vβ2和Vβ16,而全部病人均未能检测到Vβ4-6,Vβ10-12,Vβ15,Vβ17-18,Vβ20,Vβ22-23.基因扫描发现2例B-NHL和1例T-NHL病人的1-3个Vβ亚家族T细胞呈克隆性增殖.结论提示,B-NHL和T-NHL病人外周血T细胞具有相似的Vβ亚家族选择性利用的特点,部分病人存在与肿瘤细胞抗原相关的克隆性增殖的T细胞.
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异基因造血干细胞移植患者外周血TCR Vβ亚家族克隆性增殖动态变化及其与GVHD的关系
本研究观察异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)患者外周血T细胞受体(TCR)Vβ亚家族克隆性增殖的动态变化,分析T细胞的克隆性演变与GVHD的关系.利用RT-PCR方法扩增70例次allo-HSCT后患者(其中17例次出现GVHD)外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的互补决定区3(CDR3),PCR产物经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度,确定T细胞的克隆性.结果表明:移植患者T细胞增殖一般都经历由单克隆向多克隆演变的过程,在移植后60-90天时,逐渐由单克隆转为单克隆和多克隆表达大致各占一半.120天以后,无GVHD患者大多转为多克隆性表达;而GVHD患者受免疫抑制剂和GVHD的影响,直到1年以上仍有部分呈单克隆表达趋势.GVHD患者发生GVHD或靶器官受累明显的时候,外周血TCR Vβ亚家族的表达主要呈现单/双克隆的表现,而经过免疫抑制治疗病情好转后,部分患者出现由寡克隆表达转为多克隆增殖趋势.结论:移植后早期患者尤其是合并GVHD的患者,T细胞呈克隆性增殖和T细胞受体的倾向性利用;随着造血和免疫的恢复,TCR Vβ亚家族表达重新恢复趋向正常的多克隆性演变.
关键词： 造血干细胞移植 移植物抗宿主病 T细胞受体Vβ亚家族 T细胞克隆性 基因扫描 -
利用基因扫描技术分析类风湿关节炎T细胞受体的表达
目的通过研究T细胞Vβ的表达探讨类风湿关节炎的发病机制,为新的治疗手段提供一定的理论基础. 方法应用半定量的逆转录多聚酶链反应及基因扫描技术分析类风湿关节炎、骨关节炎、截肢病人滑膜及外周血中T细胞受体Vβ基因的表达情况以及T细胞的克隆性,并选择呈现单克隆或寡克隆的部分Vβ基因进一步克隆与测序. 结果滑膜组织与外周血T细胞表达绝大多数Vβ基因.类风湿关节炎病人滑膜组织中Vβ基因的表达呈现更明显的不均衡状态,Vβ6、Vβ 17与Vβ 22为优势亚群,其中以Vβ 17的高水平表达为突出.大多数阳性表达的Vβ基因均呈多克隆性. 结论类风湿关节炎病人滑膜组织中Vβ基因表达无限制性,但是存在明显的不均衡性,某些特定Vβ基因的选择性表达支持类风湿关节炎为抗原或超抗原驱动的免疫过程.
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利用TCR Vβ基因分析GVHD患者的克隆性T细胞
应用RT-PCR扩增3例异基因造血干细胞移植术后合并慢性GVHD患者的外周血单个核细胞的TCRVβ24个亚家族的CDR3，了解患者TCR Vβ T细胞的表达，PCR产物进一步经基因扫描分析确定T细胞克隆性。结果显示，3例患者均有克隆性T细胞生长，它可能与GVHD的发生有关。
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基因扫描分析维持性血液透析患者外周血T细胞克隆性分布的特点
目的:了解慢性肾功能衰竭进行维持性血液透析(MHD)患者的外周血T细胞克隆性增殖的特性和意义. 方法:通过RT-PCR方法扩增11例膜性肾病(MGN)3例、膜增殖性肾炎(MPGN)3例、IgA肾病(IgAN)4例、局灶节段性肾小球硬化症(FSGS)1例.MHD患者外周血单核细胞T细胞受体(TCR)Vβ24个亚家族基因的CDR3,阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描的方法分析产物CDR3的长度及序列,了解T细胞的克隆性.结果:11例MHD患者中仅表达1～10个TCRVβ的亚家族,其中2例只表达Vβ3一个亚家族,分别为寡克隆及双克隆性.常见的TCR Vβ亚家族是Vβ3,其次Vβ8、Vβ19、Vβ22,再次为Vβ10、Vβ23.11例患者的透析时间与TCR Vβ表达呈显著负相关(r=-0.646,ρ=0.044);用协方差分析MGN、MPGN、IgAN三个病种的TCR Vβ表达差别:不同透析时间的TCR Vβ表达的数量不同(F=10.193,P=0.019),而MGN、MPGN、IgAN三个病种之间的表达量没有显著的差异(F=1.772,P=0.249).结论:MHD患者外周血存在着TCR Vβ亚家族T细胞倾斜分布的现象,并有克隆性增殖的特征,提示大部分MHD患者存在某些细胞免疫功能低下和有相同的免疫刺激原.透析时间愈长,TCR Vβ表达的数量愈少,提示长期血液透析可能是MHD患者的细胞免疫功能低下的一个原因;而 MGN、MPGN、IgAN三个病种之间TCRVβ的表达量没有显著差异.
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弥漫大B型非霍奇金淋巴瘤患者外周血TCR Vβ亚家族T细胞分布和克隆性增生特点
目的:了解弥漫大B淋巴瘤(DLBL)患者外周血T细胞的TCR Vβ基因谱系及克隆性增殖情况.方法:利用RT-PCR 方法扩增6例DLBL患者外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的互补决定区3(CDR3),PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性.结果:6例DLBL患者分别表达9～20个TCR Vβ亚家族.患者均存在1个或多个Vβ亚家族的克隆增殖T细胞,增殖形式包括寡克隆、寡克隆增殖趋势及双克隆.Vβ13和Vβ15 亚家族出现克隆增殖性T细胞的频率较高(66.7%).结论:DLBL患者外周血TCR Vβ亚家族T细胞的分布具有特点,表现为TCR Vβ亚家族T细胞呈限制性选用和克隆性增殖,这可能是淋巴瘤患者机体对淋巴瘤相关抗原产生的特异性免疫反应.
关键词： 弥漫大B细胞性淋巴瘤 T细胞受体Vβ基因 T细胞克隆性 基因扫描 -
CML相关TCRVα亚家族T细胞的克隆性分布特点
目的 了解慢性粒细胞白血病(CML)患者外周血TCR Vα亚家族T细胞的克隆性分布特点.方法 采用RT-PCR扩增10例CML患者外周血的单个核细胞的TCR Vα29个亚家族基因,分析其TCR Vα亚家族的利用情况.PCR产物进一步经基因扫描分析,了解其CDR3长度以判断T细胞的克隆性.结果 不同病人外周血中所能检测出的Vα亚家族数量不等(1～21个),以Vα3、Vα4、Vα8、Vα10和Vα14为常见,并在Vα1、Vα2、Vα3、Vα4、Vα5、Vα8、Vα10、Vα12、Vα14、Vα15、Vα16、Vα19、Vα21和Vα23中发现克隆性生长T细胞.结论 CML病人外周血T细胞的TCR Vα亚家族选用呈现明显的选择性并出现克隆性T细胞,这可能与机体对白血病相关抗原产生特异性免疫有关,且克隆性增殖Vα亚家族分布以个体特异性为主.
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B-ALL病人TCR Vβ基因谱系和克隆性分析
目的了解B-ALL病人外周血T细胞的TCR Vβ基因谱系及其克隆性增殖情况.方法利用RT-PCR方法扩增13例初发未治B-ALL病人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的互补决定区3(CDR3),PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性.结果 13例B-ALL病人分别表达2～18个Vβ亚家族.13例病人均存在1个或多个Vβ亚家族的克隆增殖T细胞,增殖形式包括寡克隆及寡克隆增殖趋势、双克隆和单克隆.Vβ21和 Vβ23亚家族出现克隆增殖性T细胞的频率较高.结论 B-ALL病人外周血T细胞的TCR Vβ谱系呈现优势利用的特点,并存在克隆性增殖的T细胞,这可能是机体对白血病相关抗原产生的特异性免疫反应;Vβ21和 Vβ23亚家族T细胞发生克隆增殖改变的趋向性比较明显,可能与B-ALL相关抗原刺激有关.
关键词： B细胞-急性淋巴细胞白血病 T细胞受体Vβ基因 T细胞克隆性 -
AML-M6患者外周血TCR Vβ亚家族T细胞限制性增殖情况
0 引言多数肿瘤和白血病患者存在细胞免疫缺陷情况,通过T细胞受体基因分析各家族基因的表达情况,可以进一步明确患者外周血中所缺失的T细胞亚家族的情况,而通过T细胞克隆性分析,可以了解患者体内是否存在白血病抗原相关的克隆性增殖T细胞,从而为白血病特异性免疫治疗提供依据.
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淋巴瘤白血病患者TCR Vβ亚家族T细胞的分布及其克隆性
目的:了解B细胞淋巴瘤白血病(LL)患者TCR Vβ亚家族T细胞的分布及其克隆性.方法:利用RT-PCR分别扩增3例LL患者外周血单个核细胞的 TC R Vβ 24个亚家族基因的CDR3,以了解患者各Vβ亚家族的利用情况,然后将阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度,了解T细胞克隆性.结果:患者中仅存在2～6个Vβ亚家族T细胞.基因扫描分析显示,2例患者外周血中的Vβ1 、Vβ 3或Vβ4亚家族出现克隆性增殖T细胞. 结论:LL患者外周血存在倾斜性分布和克隆性增殖的Vβ亚家族T细胞,这可能是机体T细胞受白血病细胞相关抗原的刺激作用而引起机体产生相应的特异性抗白血病的免疫反应.
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RNA干扰下调PPP2R5C对T-ALL TCR Vβ亚家族分布和克隆增殖的影响
目的：基于前期利用靶向PPP2R5C基因的小干扰RNA（PPP2R5C-siRNA）抑制白血病T细胞增殖的结果，进一步了解 PPP2R5C-siRNA 对 T-ALL 样本中 TCR Vβ亚家族基因谱系及其克隆性增殖情况．方法：利用PPP2R5C-siRNA 转染2例初发未治疗T-ALL病人外周血单个核细胞（PBMC），设无关序列对照组（SC）和空白对照组（NC）；利用实时定量PCR检测PPP2R5C基因表达水平．利用RT-PCR扩增各组样本中24个TCR Vβ亚家族基因的互补决定区3（CDR3）；阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度，了解其Vβ亚家族T细胞克隆性．结果：PPP2R5C-siRNA 处理后明显下调PBMC中PPP2R5C基因表达水平．2例初发T-ALL外周血中分别可检测到10和17个Vβ亚家族，多数Vβ亚家族T细胞为多克隆性，病例1中Vβ9和Vβ17为寡克隆性，而病例2中，Vβ14和Vβ16呈寡克隆性；经过RNA干扰处理后，TCR Vβ亚家族表达率降低，仅检测到3和4个Vβ亚家族，分别为Vβ2， Vβ3，Vβ16和Vβ17．其中2个Vβ家族的寡克隆性模式发生改变，病例1中，Vβ17转为多克隆，而病例2中，Vβ16也转变为多克隆．结论：RNA 干扰下调白血病T细胞PPP2R5C基因表达抑制细胞增殖时，在一定程度上影响TCR Vβ亚家族T细胞增殖和克隆模式变化，对正常T细胞功能可能存在一定影响．
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T-ALL及T细胞株相关TCR Vβ基因谱系和克隆性分析
目的了解T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)患者外周血中的T细胞及T细胞株的TCR Vβ基因谱系及其克隆性增殖情况.方法利用RT-PCR方法扩增6个不同的T细胞株和6例初发未治T-ALL病人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的互补决定区3(CDR3),PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性,部分T细胞株的单克隆PCR产物进一步进行序列分析.结果与正常人外周血表达全部24个Vβ亚家族不同,6例T-ALL病人分别表达5～12个Vβ亚家族.6例病人均存在1个或多个Vβ亚家族的寡克隆或双克隆增殖T细胞,另外,还有一些Vβ亚家族多克隆模式发生改变,呈现寡克隆性增殖的趋势.T细胞株多显示为表达一个Vβ亚家族的单克隆T细胞,不同T细胞株的CDR3长度和序列不尽相同.结论T-ALL患者外周血T细胞的TCR Vβ谱系出现限制性改变,均可检测到克隆性增殖T细胞,尚需进一步鉴定其性质(肿瘤性或抗原特异性增殖),对于检测微小残留病变和设计抗白血病独特型疫苗均有一定的意义.
关键词： T细胞-急性淋巴细胞白血病 T细胞株 T细胞受体Vβ基因 T细胞克隆性 -
AML-M1相关TCR Vβ克隆性增殖T细胞的研究
目的了解急性髓细胞白血病M1亚型(AML-M1)患者外周血TCR Vβ亚家族T细胞的克隆性分布特点.方法采用RT-PCR扩增9例M1患者外周血的单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因,分析其TCR Vβ亚家族的利用情况.PCR产物进一步经基因扫描分析,了解其CDR3长度以判断T细胞的克隆性.结果不同标本中可检测到 2～5个Vβ亚家族T细胞,以Vβ2、Vβ3、Vβ17和Vβ19为常见,并在Vβ2、Vβ3、Vβ5、Vβ8、Vβ9和Vβ19中发现克隆性生长T细胞.结论 M1病人外周血TCR Vβ亚家族T细胞表达呈现明显的选择性和克隆性增殖情况,这可能与M1细胞相关抗原有关,且克隆性增殖Vβ亚家族分布以个体特异性为主.
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T细胞受体Vβ基因谱系分析在血液肿瘤研究中的应用
分析T细胞受体(TCR)Vβ基因谱和CDR3长度可以确切了解TCR Vβ亚家族T细胞的表达和克隆性.目前TCR Vβ基因谱分析已广泛应用于判断血液肿瘤和免疫相关疾病患者的免疫功能状态及某些致病克隆的确定;评价不同造血干细胞移植后的免疫重建;探索性区分临床移植物抗白血病效应和移植物抗宿主病;以及为血液肿瘤的免疫靶向治疗提供依据等.
关键词： 白血病 T细胞受体Vβ基因谱 T细胞克隆性 造血干细胞移植 -
职业铅接触工人外周血T细胞Vβ基因谱系明显缺失
目的:分析职业铅接触工人外周血中T细胞受体Vβ基因(TCR Vβ)谱系分布和克隆性特点,进一步了解铅接触后对T细胞免疫的影响.方法:利用RT-PCR分别检测6例职业铅接触工人和6例健康体检者的外周血中各TCR Vβ亚家族的表达情况；阳性产物经荧光素标记和基因扫描分析其CDR3长度以了解T细胞克隆性.结果:所有健康体检者均可检测到24个Vβ亚家族并呈多克隆,而6例职业铅接触工人外周血TCR Vβ亚家族表现明显的限制性利用,仅能检测到1～7个,并且多数所检测到的Vβ亚家族T细胞呈现为寡克隆或双克隆增殖,发生克隆性改变的亚家族主要集中在Vβ1和Vβ16.结论:职业铅接触可能在不同程度上影响机体TCR Vβ谱系的利用和克隆性改变,可能与铅的免疫毒性有关.
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苯中毒工人外周血TCR Vβ克隆性T细胞利用特点
目的:分析苯中毒工人外周血中克隆性增殖T细胞及其CDR3序列的特点.方法:利用RT-PCR方法扩增11例苯中毒工人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的CDR3, 阳性产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而了解其克隆性.结果:健康者外周血中可检测到24个Vβ亚家族, 11例苯中毒工人仅检测到2～10个Vβ亚家族.11例苯中毒工人均存在1个或多个Vβ亚家族T细胞出现寡克隆及寡克隆趋势.Vβ2、4、5、6和Vβ21的寡克隆T细胞出现频率较高.结论:苯中毒工人外周血TCR Vβ亚家族T细胞出现倾斜性分布和克隆性增殖, 这可能是机体苯中毒后所引起的特异性免疫反应.
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APL患者外周血TCR VβT细胞克隆性增生特点
目的了解急性早幼粒细胞白血病(APL)患者TCRVβ亚家族T细胞的分布及其克隆性.方法利用RT-PCR和基因扫描技术分析21例APL患者外周血单个核细胞的TCRVβ24个亚家族基因的CDR3长度,10例正常人作为对照.结果 21例患者外周血T细胞所表达的Vβ亚家族数量差别很大,2～21个Vβ亚家族不等,其中,以Vβ2(71.4%),Vβ15(61.9%)和Vβ5(57.1%)出现频率较高,而Vβ10和Vβ14出现频率低(14.3%).除2例外,患者外周血均可检测到某些Vβ亚家族的克隆性T细胞,主要为Vβ12,Vβ21和Vβ23克隆性T细胞.结论 APL患者外周血Vβ亚家族T细胞的倾斜性分布特点,并存在克隆性增生的T细胞,这可能是机体T细胞受白血病细胞相关抗原的刺激作用而引起机体产生相应的特异性免疫反应.
关键词： 急性早幼粒细胞白血病 T细胞受体基因 T细胞克隆性 -
弥漫大B细胞淋巴瘤患者外周血TCR Vα亚家族T细胞分布和克隆性增生特点
目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBL)患者外周血TCR Vα基因谱系及其克隆性增生情况.方法 用RT-PCR法扩增6例DLBL患者外周血单个核细胞中29个TCRα基因的互补决定区3(CDR3),经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度,确定T细胞的克隆性.结果 6例DLBL患者分别表达20～23个TCRVα亚家族.均存在1个或多个Vα亚家族的克隆增生T细胞,增生形式包括寡克隆、寡克隆增生趋势及双克隆.Vα6和Vα23、亚家族出现克隆增生性T细胞的频率较高(66.7%).结论TCRVα亚家族T细胞出现限制性选用和克隆性增生,可能是机体对淋巴瘤相关抗原产生的特异性免疫反应.
