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构建稳定表达RFP及嘌呤霉素抗性的K562细胞株
目的 构建稳定表达红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)和嘌呤霉素(puromycin)抗性的K562-PM-RFP细胞株,便于慢性粒细胞性白血病研究中K562细胞的观察和筛选.方法 采用PCR法获得RFP片段,将其插入到慢病毒pGC-FU-3FLAG-IRES-Puromycin 载体中获得pGC-PM-RFP重组质粒,经脂质体转染到293T 细胞中获得慢病毒LV-PM-RFP,有限稀释法检测慢病毒在293T细胞中的转染效率,用包装获得的慢病毒感染K562细胞,经嘌呤霉素筛选获得RFP阳性的K562-PM-RFP细胞株.结果 PCR及测序结果证实目的 基因RFP正确克隆至慢病毒质粒中,经慢病毒LV-PM-RFP感染的K562细胞能在嘌呤霉素抗性培养基中存活,并稳定表达RFP.结论 成功构建了慢病毒重组质粒pGC-PM-RFP,并获得了携带RFP及嘌呤霉素抗性基因的K562-PM-RFP细胞株.
关键词： 红色荧光蛋白 慢病毒重组质粒 嘌呤霉素 人白血病K562细胞 -
IQGAP1在调节足细胞细胞骨架重组中的作用
目的:研究支架蛋白IQGAP1在足细胞骨架重组中的作用.方法:用嘌呤霉素(PAN)刺激小鼠足细胞,实时定量PCR检测IQGAP1 mRNA的表达,免疫印迹法检测足细胞IQGAP1蛋白的表达,激光共聚焦显微镜观察足细胞骨架F-actin分布,F-actin肌动蛋白评分系统(CFS)分析骨架重组;IQGAP1 siRNA和IQGAP1质粒转染足细胞,分别观察下调和上调足细胞IQGAP1表达对嘌呤霉素诱导足细胞细胞骨架重组的改变.结果:嘌呤霉素刺激足细胞后IQGAP1 mRNA和蛋白表达下调(P＜0.05),足细胞F-actin分布发生明显重组;转染IQGAP1 siRNA,嘌呤霉素刺激足细胞F-actin重组进一步加重;转染IQGAP1质粒,嘌呤霉素刺激足细胞F-actin重组减轻.结论:IQGAP1可能参与嘌呤霉素诱导的足细胞细胞骨架重组.
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嘌呤霉素氨基核苷大鼠肾病模型与阿霉素大鼠肾病模型的比较
目的 比较两种经典的大鼠肾病模型的制模方法及评价指标,为肾病模型的研究提供参考数据.方法 30只雄性SD大鼠被随机分为对照组,嘌呤霉素氨基核苷组(PAN组)和阿霉素组(ADR组).比较3组大鼠的制模方法,评价指标(包括不同时间点大鼠体质量,蛋白尿水平,血清白蛋白浓度,胆固醇浓度,肌酐和尿素氮水平,电镜下足突融合程度等),制模药品不良反应及实验费用等指标,评价两种模型的优缺点.结果 (1)成模后PAN组大鼠体质量,毛色等均无明显变化；ADR组表现为脱毛、毛色差、大便稀,且体质量显著低于对照组(P＜0.01).(2)PAN组制模第10天起24 h尿蛋白量显著高于对照组并持续至第15天(P＜0.01)；ADR组制模第15天始24 h尿蛋白量显著高于对照组并持续至第21天(P＜0.01).(3)PAN组制模第10天起血清白蛋白水平显著低于对照组(P＜0.01),制模第15天恢复；血清胆固醇水平在制模第10天显著高于对照组(P＜0.01),第15天恢复；ADR组血清白蛋白浓度在制模第15天显著低于对照组(P＜0.05),制模第21天恢复；两组大鼠不同时间点血肌酐和尿素氮浓度与对照组差异无统计学意义.(4)PAN组在制模第10天足突宽度显著宽于对照组(P＜0.01)；ADR组在第21天时足突宽度显著宽于对照组(P＜0.05)；(5)PAN组成功诱导1只大鼠(100 g)肾病模型费用为ADR组的3.1倍(578.10元比186.94元).结论 两种药物均可成功诱导大鼠肾病模型.PAN有制模方便、不良反应小、组间差异小、急性期发病快、周期短等优点,但价格昂贵；ADR给药途径较困难,不良反应及组间差异大,价格相对便宜.
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1,25(OH)2D3抑制嘌呤霉素氨基核苷酸肾病大鼠足细胞凋亡
目的 观察1,25(OH)2D3,对嘌呤霉素氨基核苷酸(PAN)肾病大鼠足细胞凋亡的影响.方法 72只雄性SD大鼠随机分为健康对照组(NC)、PAN组和1,25(OH)2D3治疗组[1,25(OH)2D3 0.2 μg·kg-1d-1灌胃].一次性尾静脉注射PAN 100 mg/kg体质量建立足细胞损伤的PAN肾病动物模型.于3、7、14、21 d分批处死动物,分别检测不同时间点尿蛋白量(24 h)和肾功能.光镜和透射电镜观察肾组织学改变.TUNEL法检测足细胞凋亡.RT-PCR、免疫荧光、免疫组化分别检测nephrin、TGF-β1 mRNA和蛋白的表达.Western印迹检测磷酸化(P)-Smad2/3的表达.结果 (1)PAN组各时间点BUN、Set、尿蛋白量(24 h)[7 d时,(20.26±4.87)lng比(1.01±O.41)mg,P＜0.01]均高于同期的NC组,而肾小球足细胞显著减少[14 d时,(10.9±4.2)个,肾小球切面比(31.9±6.2)个,肾小球切面,P＜0.011,且足突增宽融合.1,25(OH)2D3治疗组各时间点尿蛋白量(24 h)[7 d时(9.95±3.82)mg]和BUN、Scr显著低于PAN组(P＜0.05),且肾脏病理改变减轻.(2)PAN组7 d时nephrin mRNA和蛋白的表达显著降低,nephrin由正常的沿毛细血管襻线状分布向颗粒状、团快状改变,足细胞凋亡数显著增加[14 d时,(37.4±7.9)个/肾小球切面].与PAN组相比,1,25(OH)2D3治疗组各时间段nephfin mRNA和蛋白的表达显著增加,且保持着正常的沿毛细血管襻线状分布,足细胞凋亡数显著减少[14 d时,(21.9±6.2)个,肾小球切面,P＜0.01].(3)PAN组TGF-β1 mRNA和蛋白的表达以及p-Smad2/3蛋白的表达均高于NC组(P＜0.01),1,25(OH)2D3治疗组TGF-β1mRNA和蛋白的表达以及P-Smad2/3蛋白的表达低于PAN组(P＜0.01).结论 1,25(OH)2D3能有效地抑制PAN诱导的足细胞凋亡,减少尿蛋白,其对足细胞损伤的保护作用可能与抑制TGF-β1信号通路有关.
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新生小鼠足细胞损伤对肾小球发育的影响
目的 探讨新生小鼠中足细胞损伤对肾小球发育的影响及其机制.方法 于新生ICR小鼠出生后1 d注射嘌呤霉素(puromycin aminonucleoside,PA),并以注射生理盐水作为对照.观察出生后第2、4、8、12、30、60、90天时肾重/体重、尿蛋白、血压及组织学的改变.应用免疫组化及定量RT-PCR方法测定肾皮质内肾母细胞瘤基因(WT-1)、CD31、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flk-1、血管生成素(angiopoietin,Ang-1、Ang-2)及其受体Tie-1、Tie-2的表达水平.结果 注射PA后,新生小鼠肾重、体重均明显低于对照组.出生后第2天(注射PA后1d)时,肾小球足细胞出现足突广泛融合和微绒毛的脱落;第12天时,肾小球内CD31的表达明显下降,部分肾小球萎缩、发育不良,肾皮质浅层小球成熟指数明显下降;第30天时,原先发育不良的肾小球逐渐被吸收;第60天时,剩余肾小球出现系膜区的扩张和小球节段性硬化.PA鼠在第30天时出现蛋白尿;第60天时血压显著增高.定量RT-PCR显示,第2天时肾皮质Ang-1表达明显上调,Flk-1及Tie-2明显下降.结论 PA可以在早期损伤的新生ICR小鼠足细胞,改变VEGF、血管生成素系统的表达,导致肾小球毛细血管袢发育不良及在后期产生蛋白尿、高血压和肾小球硬化.
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组织型转谷氨酰胺酶在局灶节段性肾小球硬化大鼠肾脏中的表达和意义
目的探讨组织型转谷氨酰胺酶(tTG)在局灶节段性肾小球硬化(FSGS)模型大鼠肾脏中的表达及其意义.方法FSGS大鼠模型采用左颈静脉插管单次注射嘌呤霉素氨基核苷(PAN)方法建立,对照组大鼠注射等量生理盐水,20周后处死各组大鼠.肾组织切片用PAS染色,光镜下观察病理变化;用免疫组织化学、底物掺入免疫荧光法、Western印迹法分别观察肾内tTG蛋白分布、原位活性和蛋白水平变化;用免疫组化半定量方法分析细胞外基质纤连蛋白(FN)表达.结果模型组肾组织病理呈典型局灶节段肾小球硬化病变,伴大量蛋白尿.对照组肾组织tTG蛋白表达较弱,分布于肾小球内;模型组肾组织tTG蛋白分布于肾小球硬化部位.Western印迹结果显示模型组肾组织tTG蛋白水平比对照组增加2.61倍(P＜0.05).对照组肾组织tTG原位活性微弱;模型组肾小球tTG活性明显增强.模型组FN主要分布在肾小球,表达水平明显高于对照组(3.73±0.57比2.50±1.00,P＜0.05);并且tTG蛋白水平与FN水平呈显著正相关(r=0.73,P＜0.05).结论tTG可能通过交联细胞外基质蛋白,抵抗降解,参与FSGS发生发展.
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氟伐他汀通过抑制活性氧改善氨基核苷嘌呤霉素作用下足细胞β1整合素的表达
目的 探讨氟伐他汀对氨基核苷嘌呤霉素(PAN)作用下足细胞β1整合素表达的影响及其机制.方法 将体外培养的永生化人足细胞分为PAN、不同浓度氟伐他汀、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢(H2O2)处理组.用Western印迹和2’,7’-二氯荧光素-3’,6’-二乙酸酯(DCFHDA)法分别检测各组足细胞β1整合素和活性氧(ROS)的表达；噻唑蓝(MTT)法检测足细胞活力.结果 PAN和H2O2可显著下调足细胞β1整合素表达,上调ROS表达(均P＜0.05).低浓度氟伐他汀、SOD可逆转PAN对足细胞的上述作用,显著上调β1整合素、抑制ROS的表达(均P＜0.05).MTT结果显示PAN、高浓度氟伐他汀、H2O2显著降低足细胞活力(均P＜0.05)；低浓度氟伐他汀、SOD可改善PAN对足细胞活力的影响(均P＜0.05).结论 氟伐他汀可减轻PAN对足细胞的毒性,阻止足细胞β1整合素的下降,其机制可能与抑制PAN介导的ROS升高有关.
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地塞米松通过稳定podoein的表达和分布抑制嘌呤霉素对小鼠肾小球足细胞的损伤
目的 观察嘌呤霉素(PAN)和地塞米松(DEX)对足细胞分子podocin表达和分布的影响,探讨DEX改善蛋白尿的机制.方法 体外培养小鼠足细胞(MPC5),分为对照组、PAN组和DEX组.对照组用含0.02%DMSO的RPMI-1640培养液培养;PAN组加入PAN;DEX组同时加入PAN和DEX.处理后8 h、24 h和48 h,观察细胞形态并摄像,用图像处理软件分析各组细胞形态及胞体面积的差异.用RT-PCR、Western印迹和间接免疫荧光染色榆测各时间点pedocin mRNA和蛋白的表达及分布.结果 正常足细胞呈星形,胞体大并有树样突起,细胞相互连接.PAN刺激8 h,足细胞胞体面积缩小,为对照组的43%;24 h为10%;48h为5.7%(P<0.01);部分足细胞足突及细胞连接消失.DEX组在8 h、24 h和48 h,足细胞胞体面积显著大于PAN组,分别为对照组的43.9%、26.2%及29.6%(P<0.05),足突形态正常.PAN组podocin mRNA表达量呈下降趋势,蛋白表达量显著降低(P<0.01),分布异常.DEX组podocin mRNA和蛋白的表达量及分布与对照组相似,48 h时mRNA和蛋白的表达量均显著高于PAN组(P<0.05).结论 DEX直接作用于足细胞,稳定pedocin mRNA和蛋白的表达量及分布,该作用可能与其能保护足细胞及改善蛋白尿有关.
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CD2AP分子mRNA和蛋白的表达在肾组织及细胞损伤中的作用
目的 观察CD2AP分子mRNA和蛋白的表达在嘌呤霉素(PAN)肾病模型及肾小球足细胞系损伤中的作用.方法 将雄性SD大鼠64只随机分为肾病模型组和对照组,每组32只.肾病模型组大鼠尾静脉注射PAN 5 mg/kg,建立PAN肾病模型;对照组注射8 mg/kg生理盐水.分别于第2、4、6和8周每组各处死8只大鼠用于实验.体外培养小鼠肾小球足细胞系(MPC5),分为细胞刺激组和对照组,细胞刺激组给予PAN刺激足细胞,于刺激后12、24和48 h收集足细胞用于实验;对照组用RPMI 1640培养液培养足细胞.光镜下观察肾病模型组肾组织的病理学改变;倒置显微镜下观察细胞刺激组足细胞的形态变化;应用荧光定量PCR、Western blot和免疫荧光染色检测肾病模型组、细胞刺激组和对照组不同时间点CD2AP分子mRNA、蛋白表达及分布的变化.结果 (1)肾病模型组病理学变化为系膜和细胞外基质增生,部分或广泛肾小球呈局灶节段性硬化;肾病模型组注射PAN后第2周CD2AP分子mRNA和蛋白的表达量明显下降,一直持续至第8周.(2)细胞刺激组形态变化为刺激后12、24及48 h足细胞体积明显缩小,主要表现为足突回缩、消失及失去细胞间连接;细胞刺激组在给予PAN刺激后12 h CD2AP分子mRNA表达明显下降,mRNA表达下降持续至PAN刺激后48 h;CD2AP的蛋白表达在刺激足细胞12 h时无显著改变,在24和48 h时CD2AP的蛋白表达明显下降.(3)免疫荧光染色显示,正常情况下CD2AP均匀分布于足细胞的细胞核、细胞浆及细胞膜;细胞刺激组12和24 h CD2AP分布出现异常,在细胞核和细胞浆呈粗颗粒状分布,刺激48 h后在细胞膜和细胞浆出现分布缺失.结论 CD2AP在大鼠PAN肾病模型及体外培养肾小球足细胞系中mRNA和蛋白的表达明显下调,提示CD2AP分子是肾小球足细胞损伤的重要标志,CD2AP表达量及分布变化可能是临床上蛋白尿发生的分子机制.
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地塞米松对嘌呤霉素损伤足细胞nephrin mRNA表达的影响及意义
目的 观察嘌呤霉素(PAN)和地塞米松(DEX)干预后足细胞形态及nephrin mRNA表达变化,探讨DEX保护PAN诱导体外培养足细胞损伤的作用机制.方法 将体外培养的小鼠肾小球足细胞分为三组,分别为对照组、PAN组和DEX组.对照组加入等体积RPMI-1640培养液培养；PAN组加入PAN(终浓度50 mg/L)；DEX组同时加入PAN(终浓度50 mg/L)和DEX(终浓度1 mmol/L).培养8h、24 h和48 h后,相差显微镜下观察足细胞形态变化；用图像处理软件分析各组细胞胞体面积的差异.采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测培养24h、48 h时足细胞nephrin mRNA表达.结果 对照组足细胞形态正常,细胞胞体较大,可见树枝样突起及细胞间形成相互连接；PAN诱导足细胞损伤8h、24 h和48 h时,足细胞面积均较对照组明显缩小,分别为对照组的75％、46％和27％(P＜0.01),足细胞足突及细胞间连接消失.DEX组在干预8h、24 h和48 h时,足细胞胞体面积均明显大于PAN组(P＜0.01),部分足细胞可见足突及细胞间连接.PAN组足细胞培养24 h和48 h时,nephrin mRNA表达较对照组明显下降(P＜ 0.01)；DEX组干预后24h及48 h,足细胞nephrin mRNA表达均较PAN组显著升高(P＜ 0.01).结论 DEX对PAN诱导足细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与上调足细胞分子nephrin mRNA表达有关.
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槐杞黄颗粒对嘌呤霉素肾病大鼠尿蛋白和血清白蛋白水平的影响
目的:检测槐杞黄颗粒对嘌呤霉素肾病大鼠尿蛋白及血清白蛋白水平的影响,探讨槐杞黄颗粒治疗肾病综合征的作用机制.方法:将60只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和槐杞黄组各20只,除对照组外,其余两组大鼠分别一次性腹腔注射嘌呤霉素15 mg/100 g,对照组和模型组分别用同等剂量蒸馏水和槐杞黄颗粒(2 g/kg)灌胃,比较三组大鼠24 h尿蛋白定量和血清白蛋白水平.结果:模型组和槐杞黄组24 h尿蛋白定量高于对照组(P＜0.05),第2天、第5天和第10天模型组24 h尿蛋白定量较槐杞黄组增多(P＜0.05),第15天和第20天模型组和槐杞黄组24 h尿蛋白定量比较差异无统计学意义(P＞0.05);血清白蛋白水平模型组和槐杞黄组较对照组低(P＜0.05),槐杞黄组较模型组高,第2天模型组和槐杞黄组比较差异无统计学意义(P＞0.05),其后时间点两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:槐杞黄颗粒可以减少肾病综合征大鼠蛋白尿的排出和提高嘌呤霉素肾病大鼠血清白蛋白水平.
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人工激活胚胎的性染色体分析和IGF-Ⅱ表达研究
目的观察钙离子载体A23187联合嘌呤霉素激活胚胎的性染色体和胰岛素样生长因子-Ⅱ(insulin-like growth factor-Ⅱ,IGF-Ⅱ)表达.方法收集体外成熟周期(in vitro maturation and intracytoplasmic sperm injection, IVM-ICSI) 和卵母细胞单精子显微注射(intracytoplasmic sperm injection, ICSI)中受精失败的卵母细胞95枚,采用钙离子载体A23187和嘌呤霉素激活.应用荧光原位杂交技术分析来源于2PN2PB胚胎的性染色体;免疫组化检测IGF-Ⅱ的表达,并与正常胚胎、孤雌胚胎相比较.结果钙离子载体A23187联合嘌呤霉素能有效地激活ICSI后22 h未受精卵母细胞,激活胚胎能发育到囊胚阶段.激活胚胎的性染色体为5枚XX,8枚 XY.激活胚胎的IGF-Ⅱ表达与正常胚胎相近,明显较孤雌胚胎增强.结论钙离子载体A23187联合嘌呤霉素是一种安全、有效的激活方式,有希望成为ICSI受精失败的有效补救措施.
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肾苏Ⅳ干预嘌呤霉素肾病大鼠足细胞损伤的机制研究
目的：探讨中药复方肾苏Ⅳ干预嘌呤霉素（PAN）肾病大鼠足细胞损伤的机制。方法：采用单次颈静脉注射法建立 PAN 肾病大鼠足细胞损伤模型。将60只 SD 大鼠随机分为 A 组（对照组），B 组（模型组）、C 组（肾苏Ⅳ低剂量组）、D 组（肾苏Ⅳ中剂量组）及 E 组（肾苏Ⅳ高剂量组），每组12只。治疗第1、2、3、4、6周末检测大鼠24h 尿蛋白定量（24hUpro）及血清白蛋白（ALB）水平；第1、6周末分别处死6只大鼠留取肾脏组织，检测肾小球足细胞 Neph-rin 、CD2AP 的表达变化；电镜观察肾小球足细胞超微结构的改变。结果：第6周末，C 、D 、E组24hUpro 水平均低于 B 组，P＜0．05；C 、D 、E 组 ALB 水平均高于 B 组，P＜0．05。 第6周末，C 、D 、E 组 Nephrin 、CD2AP 表达均高于 B 组，P＜0．05。 C 、D 、E 组大鼠肾小球基底膜增厚及足突融合程度较 B 组均明显减轻。结论：肾苏Ⅳ可降低 PAN 肾病大鼠24hUpro ，提高ALB 水平，促进足细胞骨架结构的损伤修复，阻抑足细胞损伤。
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MicroRNA-194过表达与抑制表达慢病毒载体的构建及对骨肉瘤细胞转染与筛选的方法学研究
目的:构建针对人microRNA-194过表达及抑制表达的慢病毒表达载体,寻找与探讨感染人骨肉瘤细胞系SO-SP-9607和U2-os的佳步骤和方法.方法:利用PCR方法调取相应目的基因进行酶切,经电泳回收后与目的基因进行连接,产物转化细菌感受态细胞,对克隆进行PCR鉴定和测序对比分析后,构建相应microRNA-194过表达及抑制表达慢病毒表达载体;在人骨肉瘤细胞系SO-SP-9607和U2-os转染及筛选过程中,根据不同阶段及浓度设定相应实验组,并设相应对照组.倒置显微镜观察转染效率,筛选情况,进行比较.结果:PCR及测序结果证实重组慢病毒表达质粒构建正确.过表达及抑制表达重组慢病毒的滴度分别为1.5×108TU/ml及4×108TU/ml.感染复数(multiply of infection,MOI)值测定,实验组及对照组转染效率无明显差异,获得MOI值及感染时间数据.通过新的综合设计,经筛选后获得转染效率满意的目的克隆细胞.结论:成功构建了microRNA-194过表达及抑制表达慢病毒表达载体,并通过新的综合考虑设计,对人骨肉瘤细胞系SO-SP-9607和U2-os进行转染和筛选后,可较快和较高效率获得满意目的细胞.
关键词： microRNA-194 慢病毒 骨肉瘤 嘌呤霉素 -
低蛋白血症大鼠模型的建立
目的:探讨大鼠尾静脉注射阿霉素(Adriamycin, ADR)建立低蛋白血症模型的可行性.方法:SD大鼠尾静脉一次性注射阿霉素5 mg/kg、7.5 mg/kg及10 mg/kg.观察给药后大鼠一般情况及尿量,检测尿蛋白、血清总蛋白、白蛋白、胆固醇、甘油三酯等指标,观察肾组织病理学变化,以嘌呤霉素为阳性对照.结果:阿霉素的三个剂量中,7.5 mg/kg及10 mg /kg组第4天开始出现尿蛋白,第15天血清总蛋白及白蛋白明显下降.两组大鼠均出现蛋白尿,血清白蛋白及总蛋白明显下降,血清胆固醇及甘油三酯升高,肾脏病理学结果符合低蛋白血症变化,但10 mg/kg组大鼠死亡率高.嘌呤霉素组亦出现类似变化.结论:大鼠尾静脉注射阿霉素7.5 mg/kg,15 d后可建立低蛋白血症动物模型.
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普罗布考对PAN致足细胞损伤模型中mTOR及氧化应激水平影响
目的 观察普罗布考对氨基核苷嘌呤霉素(PAN)致小鼠永生化足细胞损伤模型哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及氧化应激水平的影响,探讨普罗布考的肾脏保护作用机制.方法 PAN刺激体外培养的足细胞24 h,建立足细胞损伤模型.采用CCK-8方法检测不同浓度普罗布考作用下PAN损伤足细胞的细胞存活率.将足细胞随机分为正常组、PAN组(PAN 50 mg/L)、普罗布考组(PAN 50 mg/L+普罗布考40 μmol/L),予以相应药物刺激24 h.采用荧光酶标仪检测DCFH-DA荧光探针标记的足细胞中活性氧(ROS)水平的变化.采用荧光显微镜检测DCFH-DA荧光探针标记的足细胞荧光强度的变化.采用Western-blot方法检测各组足细胞mTOR蛋白表达水平.结果 CCK-8方法检测结果显示,PAN造成足细胞损伤后加入浓度为20、40、100 μmol/L普罗布考均使足细胞活性上升,与0 umol/L普罗布考组比较,差异有显著性(F=1 959.00,P＜0.05),其浓度为40 μmol/L时作用明显.荧光显微镜检测结果显示,PAN组足细胞内荧光强度增强.DCF荧光强度检测结果显示,PAN组细胞内ROS生成明显升高,与正常组比较,差异有显著性(F=33 525.19,P＜0.05);普罗布考组ROS生成明显减少,与PAN组比较,差异有显著性(P＜0.05).Western-blot方法检测结果显示,PAN可使mTOR表达水平明显升高,与正常组比较,差异有显著性(F=179.55,P＜0.05);普罗布考40μmol/L共处理细胞后,mTOR表达水平下降,与PAN组比较,差异有显著性(P＜0.05).结论 普罗布考可通过下调PAN导致的mTOR激活,降低ROS生成,减轻氧化应激水平,从而抑制足细胞损伤.
关键词： 普罗布考 嘌呤霉素 足细胞 他克莫司结合蛋白质类 氧化性应激
