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原因不明复发性自然流产患者绒毛组织中STAT4和STAT6的表达
目的:探讨原因不明复发性自然流产(URSA)患者绒毛组织中STAT4和STAT6蛋白的表达.方法:采用免疫组化技术检测正常早期妊娠妇女(20例)和URSA患者(20例)绒毛组织中STAT4、STAT6蛋白的表达,并分析两者的相天性.结果:正常妊娠组和URSA组绒毛组织中STAT4和STAT6均呈阳性表达,主要表达于绒毛滋养细胞的胞质,胞核多数无明显着色.URSA组绒毛组织中sTAT4阳性信号平均灰度值(148.00±24.38)高于正常妊娠组的(116.75±9.26)(t'=5.730,P＜0.001).URSA组绒毛组织中STAT6阳件信号平均灰度值(121.50±7.98)低于正常妊娠组的(161.60±17.78)(t'=10.392,P＜0.001).URSA组和正常妊娠组绒毛组织中STAT4与STAT6的表达水平均呈负相关(r=-0.589,-0.647,P均＜0.001).结论:URSA患者绒毛组织中STAT4的高表达和STAT6的低表达可能诱导T辅助淋巴细胞1/2失衡,进而导致URSA的发病.
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抑制性寡脱氧核苷酸对小鼠CD4+T细胞T-bet、STAT4及STAT6表达的影响
目的 探讨体外实验中,抑制性寡脱氧核苷酸(Sup ODN)对小鼠脾脏CD4+T细胞转录因子T细胞表达的T盒(T-bet)、信号转导子和转录激动子(STAT)4及STAT6表达的影响.方法 分离小鼠脾脏淋巴细胞,免疫磁珠阳选法纯化CD4+T细胞,流式细胞仪分析分选纯度,在抗-CD3ε抗体、抗-CD28抗体、白细胞介素(IL)-12作用下,加入Sup ODN或对照寡脱氧核苷酸(Con ODN)培养72 h后,常规提取核蛋白.Western-blot测定核蛋白中磷酸化的STAT(pSTAT)4、pSTAT6和T-bet蛋白表达.结果 与Con ODN组和PBS组比较,Sup ODN 组中T-bet和pSTAT4的表达水平明显降低(P＜0.05),而pSTAT6表达水平明显升高(P＜0.05).结论 Sup ODN可能通过下调pSTAT4和T-bet的表达,体外抑制小鼠CD4+T细胞向Th1细胞的功能性分化,上调pSTAT6的表达,促进Th2细胞的分化.
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人STAT4基因真核表达载体构建和在HEK293细胞中表达
目的 构建STAT4基因的真核表达载体,在人胚肾细胞系HEK293中表达.方法 设计引物、采用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞中获得STAT4的cDNA全长序列,在PCR产物两端加上SalI和BamHI限制性内切酶识别序列,将pEGFP-C1载体和PCR产物用SalI和BamHI进行双酶切,将STAT4 cD-NA定向克隆到pEGFP-C1中,从而构建了重组质粒pEGFP-STAT4;经酶切和测序鉴定正确后,将pEGFP-STAT4体外转染HEK293细胞,瞬时表达带有GFP标签的STAT4融合蛋白；采用荧光显微镜技术和免疫印迹技术检测融合蛋白的表达.结果 RT-PCR扩增了2 247 bp的STAT4 cDNA全长,经测序分析与GenBank中已知序列一致；重组质粒pEGFP-STAT4转染HEK293细胞中,可检测到瞬时表达的GFP-STAT4融合蛋白.结论 成功构建重组质粒pEGFP-STAT4,在真核细胞HEK293中能被表达.
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STAT3和STAT4基因单核苷酸多态性与肝细胞癌的相关性
目的 探讨信号传导和转录激活因子3(STAT3)基因rs2293152位点和信号传导和转录激活因子4(STAT4)基因rs7574865位点单核苷酸多态性(SNPs)与肝细胞癌(HCC)遗传易感性的关联及与环境因素的交互作用.方法 采用病例对照研究方法,选取HCC患者256例作为观察组,同期健康体检者256例作为对照组,检测两组rs2293152、rs7574865位点SNPs.采用二分类Logistic回归模型分析rs2293152、rs7574865位点SNPs与HCC遗传易感性的关系,并探究rs2293152、rs7574865位点SNPs与环境因素的交互作用对HCC发病影响.结果 两组间rs2293152、rs7574865位点基因型分布差异均无统计学意义(P>0.05).rs2293152位点G等位基因和rs7574865位点G等位基因均可显著增加HCC发病风险(P<0.05).在饮酒与乙型肝炎病毒(HBV)感染人群中,rs2293152位点GG基因型相比GC+CC基因型,rs7574865位点GG基因型相比GT+TT基因型,HCC发病风险均显著升高(P<0.05).rs2293152、rs7574865位点SNPs与饮酒、HBV感染均存在正交互作用.结论 STAT3基因rs2293152位点和STAT4基因rs7574865位点SNPs与HCC遗传易感性明显相关,并与饮酒、HBV感染存在正交互作用,可增加HCC发病风险.
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子痫前期胎盘中 STAT4和 STAT6表达量与 sFlt-1、ADMA 生成及胎盘缺氧的相关性
目的：：研究子痫前期胎盘中 STAT4和 STAT6表达量与可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)及非对称性二甲基精氨酸(ADMA)生成及胎盘缺氧的相关性.方法：选择40例子痫前期孕妇作为研究的子痫前期组(PE 组)，选择同期在我院待产的40例健康孕妇作为研究的对照组，收集血清测定STAT4、STAT6、sFlt-1、ADMA 含量，收集胎盘测定 STAT4、STAT6、HIF-1α、HSP70表达量，行超声检查测定子宫螺旋动脉的 PI、RI、S/D.结果：PE 组胎盘及血清中 STAT4的表达量显著高于对照组、而 STAT6的表达量显著低于对照组；PE 组患者胎盘中 HSP70、HIF-1α的表达量显著高于对照组且与STAT4呈正相关、与 STAT6呈负相关，血清中 sFlt-1、ADMA 的含量显著高于对照组且与 STAT4呈正相关、与 STAT6呈负相关，子宫螺旋动脉的 PI、RI、S/D 显著高于对照组且与 STAT4呈正相关、与STAT6呈负相关.结论：子痫前期胎盘中 STAT4高表达及 STAT6低表达与胎盘缺氧密切相关.
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STAT4、PSORS1C1基因多态性与兰州汉族RA易感性关系研究
目的 研究rs7574865 (STAT4)、rs7234029(PTPN2)、rs2233945 (PSORS1C1)及rs33980500(TRAF3IP2)多态性与兰州地区汉族人群类风湿性关节炎(RA)易感的相关性.方法 针对rs7574865、rs7234029、rs2233945及rs339805004个位点设计引物,建立聚合酶链式反应-高分辨率熔解曲线分析(PCR-HRM)基因分型方法,对104例RA患者标本进行研究,并分析4个位点与兰州地区汉族人群RA易感的相关性.结果 rs2233945和rs7574865位点在病例组和对照组的基因型频率差异有统计学意义(x2=13.063,P=1.45×10-3;x2=31.044,P=1.81×10-7).在显性模型下,rs2233945 T基因(杂合型GT和纯合突变型TT)携带者患RA的风险明显降低(OR=0.481,95％CI:0.222-0.081,P＜0.05);rs7574865 T基因(杂合型GT和纯合突变型TT)携带者患RA的风险明显增加(OR=4.586,95％CI:2.455-8.566,P＜0.05).结论 本研究自建的PCR-HRM基因分型方法可对rs7234029、rs7574865、rs2233945和rs33980500位点进行常规化检测.rs7574865和rs2233945多态性与兰州汉族人群RA易感性相关.
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卡介菌多糖核酸对哮喘大鼠肺组织IL-12/STAT4信号通路的影响
目的 探讨卡介菌多糖桉酸(BCG-PSN)对支气管哮喘大鼠肺组织白介素12/信号转导子及转录激活子4(IL-12/STAT4)信号通路的影响及其在气道炎症中的作用.方法 将40只雄性SD大鼠随机分成正常对照组(A组),哮喘模型组(B组),卡介菌多糖核酸组(C组)和地塞米松组(D组),每组10只.采用鸡清卵蛋白 (OVA)致敏和激发的方法制备哮喘大鼠模型.苏术精-伊红(HE)染色观察肺组织病理形态学改变,用免疫组化法观察IL-12和STAT4在大鼠哮喘模型肺组织中的表达分布.结果 模型组肺组织IL-12和STAT4蛋白表达较少,其平均灰度值显著高于对照组(P＜0.01);地塞米松组和卡介菌多糖核酸组肺组织IL-12和STAT4蛋白表达较多,其平均灰度值显著低于哮喘组(P＜0.01),而地塞米松组和卡介菌多糖核酸组之间差异无统计学意义;卡介菌多糖桉酸组STAT4的表达与IL-12呈正相关(r为0908,P＜0.01).结论 卡介菌多糖核酸调节气道炎症可能是通过调控IL-12/STAT4信号通路的基因表达实现的.
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STAT4Bax、c-myc 在非小细胞肺癌组织中的STAT4与Bax、c-myc在表达及相关性分析
目的:分析信号转导与转录激活因子-4(signal transducer and activator of transcription -4,STAT4)、Bax与c-myc在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织及正常肺组织中的表达,并比较STAT4与Bax、c -myc之间的关系,初步探讨STAT4与NSCLC发生发展的关系.方法:应用免疫组化染色SP法,检测STAT4、Bax与c-myc在40例NSCLC组织和20例正常肺组织中的表达情况.结果:①STAT4在NSCLC组织中的表达明显高于正常肺组织(P＜0.01).②STAT4在腺癌组织中的表达显著高于鳞癌(P＜0.01).③STAT4与Bax在NSCLC组织中的表达比较无相关性（P＞0.05）.④STAT4与c-myc在NSCLC组织中的表达比较无相关性(P＞0.05).结论:①STAT4在NSCLC组织中表达增加,且与肿瘤的组织学类型有关,提示STAT4在NSCLC的发生过程中可能发挥了某种作用.②STAT4在NSCLC组织中的表达与Bax、c-myc无相关性,提示STAT4可能没有从促凋亡及癌基因相关途径发挥其作用.
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STAT4基因单核苷酸多态性与云南汉族人群SLE发病的相关性研究
目的 研究云南地区汉族人群STAT4 基因单核甘酸多态性(SNP),研究其与SLE 疾病的易感性.方法 结合国内外全基因组关联分析数据及本课题组前期研究结果,采用Sequenom MassArray 质谱阵列技术对378 例SLE 患者和389 例正常对照进行SATA4 基因(rs10168266,rs10181656,rs11889341,rs13017460,rs1551443,rs16833249,rs2459611,rs3024879,rs3024886,rs3024894,rs3024895,rs3024933,rs3821236,rs4555370,rs6712821,rs7568275,rs7574865,rs7599504,rs8179673,rs932169) 20 个位点的基因分型.结果(1 STAT4 的6个SNP 等位基因频率在云南人群SLE 患者和正常对照组之间的差异有统计学意义(P＜0.05),并以rs10181656 为显著(P ＝5.41E-09),且相关程度较欧洲人群高; (2 对STAT4 的SNP 位点rs10181656 进行分层分析,病例组中的蝶型红斑、粘膜溃疡、血液改变、肾损害、抗ds-DNA、ANA 和浆膜炎与对照组之间G等位基因频率比较分布均有统计学意义(P＜0.01.结论 STAT4 基因多态性与云南汉族人系统性红斑狼疮易感性相关; STAT4 基因rs10181656 G 等位基因增加了SLE 病人发生关节炎、蝶型红斑、肾损害、粘膜溃疡、抗ds-DNA、ANA、血液改变、浆膜炎的风险.
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系统性红斑狼疮患者STAT4基因mRNA和血清中IL-12、IFN-γ的表达
目的 研究SLE患者STAT4的表达与患者血清中细胞因子IL-12、IFN-γ的关系,探讨它们在SLE发病中的作用与狼疮疾病活动程度的关系.方法 应用QPCR检测患者血液中STAT4的表达.应用ELISA方法检测正常对照组与SLE患者血清中IL-12、IFN-γ的水平.所有数据资料用Plink l.06及SPSS16.0软件进行统计分析.结果 (1) SLE病人STAT4 mRNA的相对表达量高于正常对照组(P＜0.01),STAT4表达水平与SLEDAI评分成正相关(r=0.385,P＜0.05)； (2) rs10181656 G等位基因的突变与STAT4 mRNA的表达水平升高有关；(3) SLE组IFN-r、IL-12含量高于正常组(P＜0.01)；IFN-r、IL-12含量与SLEDAI评分呈正相关(P＜0.05)；(4) STAT4 mRNA的表达与IFN-γ(r=0.335,P＜0.05)、IL-12 (r=0.401,P＜ 0.05)显著正相关,与其他临床及实验室指标蝶形红斑(r=0.471,P＜0.000)、粘膜溃疡(r=0.552,P=0.000)、浆膜炎(r=0.311,P=0.014)、肾损害(r=0.247,P=0.042)、血液损害(r=0.256,P=0.003 7)成正相关(P＜0.05).结论 (1)SLE患者中STAT4基因的表达水平增高并与SLE疾病活动相关,可以作为监测病情活动性的检测指标； (2)SLE患者的IFN-γ、IL-12异常高表达,而且与SLEDAI评分呈正相关,IFN-γ、IL-12可以作为判断SLE疾病活动的参考指标.STAT4对IL-12、IFN-γ的表达有正相调节作用,在基因水平上调控IL-12、IFN-γ并促进其mRNA的表达.
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慢性阻塞性肺病大鼠肺功能降低与Th1/Th2极化、STAT4/6表达的关系
目的 研究慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠Th1/Th2极化、转录信号转导子及转录激活子(STAT)蛋白表达及与肺功能的关系.方法 将60只大鼠随机均分为空白组、假手术组、模型组.采用脂多糖(LPS)复制COPD大鼠模型,模型复制成功后28 d,检测大鼠肺功能变化,采用HE染色观察大鼠肺组织形态学变化,ELISA检测血清IFN-γ、IL-4、IL-12、IL-13变化,采用PCR法检测大鼠肺组织IFN-γmRNA、IL-4 mRNA的表达、Western blot法检测大鼠肺组织STAT4、STAT6蛋白表达.结果 与空白组、假手术组比较,模型组大鼠肺组织炎性细胞浸润,血清IFN-γ、IL-12、Th1/Th2升高,肺功能和血清IL-4、IL-13降低；同时肺组织IFN-γmRNA和STAT4蛋白表达升高,IL-4 mRNA和STAT6蛋白降低(P＜0.05或P＜0.01).相关性分析显示,COPD大鼠肺功能参数分别与IFN-γ、Th1/Th2、STAT4蛋白呈负相关,与IL-4、IL-13、IL-4 mRNA、STAT6蛋白呈正相关(P＜0.01或P＜0.05).结论 COPD肺功能降低与气道炎症反应、Th1/Th2细胞失衡有关,STAT4、STAT6参与调控Th1/Th2细胞表达,共同导致COPD发生.
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STAT4的作用机制及其在疾病中的相关研究
JAK/STAT信号途径是继Ras途径之后的又一重要的细胞因子信号转导通路.在信号转导和转录活化因子(signal transducer and activator of transcription, STAT)家族的各成员中, 主要被IL-12激活的STAT4蛋白被认为在Th1/Th2的分化调控及因此失调引发的各种炎症性疾病中发挥着重要的作用.本文中从其基因、蛋白结构及作用机制的基础上, 重点介绍了近5年来利用STAT4基因敲除小鼠模型与各种相关炎症性疾病动物模型结合的手段研究STAT4的生理功能及其在相应疾病中参与机制的一些相关进展情况.
关键词： STAT4 Th1/Th2 STAT4缺陷小鼠模型 炎症性疾病
