首页 > 文献资料
-
冠心病血瘀证差异表达基因及其启动子甲基化状态的初步研究
目的 探讨冠心病血瘀证差异表达基因及其启动子甲基化的情况.方法 以家系冠心病血瘀证患者14例为观察对象,家系健康人7例为对照,采用表达谱芯片检测冠心病血瘀证差异表达基因.再收集冠心病血瘀证患者16例和健康人7例,选择其中2个差异基因进行启动子区甲基化特异性PCR(MS-PCR)研究,初步分析冠心病血瘀证差异表达基因及其启动子甲基化状态.结果 表达谱芯片结果通过倍数变化值(FC)＞3或FC＜1/3、Call=P筛选,共获取差异表达基因26个,选择KLF5和LRP12基因进行MS-PCR,冠心病血瘀证与健康人各启动子甲基化率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 冠心病血瘀证差异基因KLF5和LRP12的启动子甲基化状态和健康人比较无明显区别.
-
TAZ和KLF5在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义
目的：检测TAZ和KLF5在肝细胞癌（ HCC）及对应癌旁组织中的表达情况，分析两者的临床意义。方法：收集76例HCC及对应癌旁组织，运用免疫组化技术检测TAZ及KLF5的表达情况，分析两者与HCC临床病理特征之间的相关性。结果：TAZ及KLF5蛋白在HCC组织中的表达显著高于对应癌旁组织（P＝0.001；P＝0.035）；TAZ及KLF5蛋白表达与肿瘤病理分级（P＝0.007；P＝0.047）和TNM分期（P＝0.009；P＝0.040）显著相关；HCC组织中TAZ与KLF5蛋白表达显著正相关（ r＝0.651，P＝0.003）。结论：HCC组织中TAZ及KLF5过表达与恶性临床病理参数相关，且TAZ与KLF5蛋白表达正相关，提示TAZ可能通过抑制KLF5蛋白降解促进HCC进展。
-
Krüppel样锌指因子在血液疾病中的研究进展
Krüppel样锌指因子是真核生物中广泛存在的一类转录调控因子,参与细胞分化、增殖、凋亡和肿瘤形成等多种生理病理过程.其结构特点是羧基端高度保守,含有3个C2H2型锌指结构,与富含GC盒或CACCC序列的DNA结合；而氨基端的转录调控区在不同因子之间差异较大,发挥转录激活或转录抑制效应.现有研究显示多个Krüppel样锌指因子成员参与调控各类血细胞的生命活动.此文将就这几个与血液疾病发生有关的KLF样锌指因子作一概述.
-
FBXW7与KLF5在乳腺癌中的表达及临床意义
目的:研究FBXW7与KLF5在乳腺癌病变组织中的表达程度及两个因子同临床相应病理学特征之间的联系以及两者内在联系,并阐明其在人类乳腺癌形成过程中的作用机制.方法:选取经佳木斯大学附属第一医院确诊为乳腺癌并行手术治疗的患者病理蜡块,且再次由资深病理科医生证实,通过采用ElivisionTM Plus/HRP免疫组化方法,分别检测45例乳腺癌组织标本中FBXW7和KLF5两个与癌症相关基因的表达状况,同时在应用软件SPSS17.0的帮助下,采用传统的统计学计算方法分析上述两因子同临床相应的病理学特点间的关系,后探讨FBXW7和KLF5是否存在相关的临床指导意义.结果:乳腺癌中KLF5阳性表达率为82.22％,高于正常乳腺的17.78％;乳腺癌中FBXW7蛋白阳性表达为53.33％,低于正常乳腺中的100.00％;二组间差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论:KLF5在乳腺癌中表达明显增强,FBXW7在乳腺癌中表达明显降低,提示在乳腺癌发生中KLF5和FBXW7发挥一定作用,对KLF5、FBXW7的检测可作为重要生物学指标.
-
转录因子Slug与KLF5相互作用及其对肝癌细胞迁移能力的影响
目的 探讨转录因子Slug与KLF5之间的相互作用及Slug是否作为KLF5的下游信号因子影响肝癌细胞的迁移能力.方法 通过免疫沉淀实验和免疫荧光实验检测Slug与KLF5之间相互作用及共定位,并在肝癌细胞中转入Slug过表达质粒,以及使用shRNA抑制其表达,观察肝癌细胞迁移能力的改变.结果 在肝癌细胞中发现转录因子Slug的表达随KLF5的改变而改变,并且KLF5与Slug之间在蛋白水平存在相互作用及共定位.然而,在肝癌细胞中过表达或抑制Slug的表达并没有影响肝癌细胞的迁移能力.结论 KLF5与另一转录因子Slug存在相互作用及细胞中共定位,但是转录因子Slug并不是作为KLF5的下游信号因子影响肝癌细胞的迁移能力.
-
BCL6、KLF5、NCL基因在儿童急性淋巴细胞白血病中异常表达的特点
目的:研究转录因子基因BCL6、KLF5及核仁蛋白基因NCL在急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患儿骨髓细胞中的表达情况及其在不同疾病状态下的表达特点.方法:选取北京儿童医院2004年1月至2005年12月住院ALL患儿100例,另取由于骨骼畸形而在北京儿童医院进行外科手术的5例非ALL患儿作对照；以基因芯片检测ALL患儿骨髓细胞中异常表达基因,GeXP多重基因表达分析系统检测BCL6、KLF5、NCL基因在另外选取的10例配对ALL患儿初诊及缓解期的表达变化.结果:基因芯片筛查发现,在100例各哑型ALL标本中,BCL6和KLF5 mRNA表达均下调,NCL mRNA表达均上调.BCL6和KLF5 mRNA在10例ALL初诊患儿骨髓细胞中表达较低,完全缓解后表达升高(0.380±0.16 vs 0.850±0.10,0.074±0.021 vs 0.228±0.049；均P＜0.01)；NCL mRNA在ALL初诊患儿骨髓细胞中表达较高,完全缓解后表达降低(0.234±0.054 vs0.151±0.055,P＜0.01).在10例配对患者儿中,TEL-AMLI阳性及E2A-PBXI阳性组患儿的初诊及缓解期骨髓细胞中,该3个基因在两组中的表达变化趋势一致.结论:ALL患儿骨髓细胞中BCL6、KLF5基因在初诊时表达下调、在临床缓解后表达上调,NCL基因初诊时上调、临床缓解后下调；该3个基因似可作为白血病的分子标志物及效疗的监测指标.
关键词： 儿童急性淋巴细胞白血病 BCL6 KLF5 NCL GeXP分析系统 -
周期性牵张应力作用下KLF5对人牙周膜细胞增殖和成骨分化的影响
目的:探讨周期性牵张应力(cyclic tensile stress,CTS)作用下Kruppel样转录因子5 (Kruppel-like factor 5,KLF5)在人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)中的表达及其对hPDLCs增殖和成骨分化的影响.方法:酶解组织块法体外培养hPDLCs,对其施加形变率10％,频率0.5 Hz的周期性牵张应力1、4、8、12、24 h,采用RT-PCR和Western印迹法检测细胞中KLF5 mRNA和蛋白的表达.转染siRNA (si-KLF5)至hPDLCs沉默KLF5表达,RT-PCR检测KLF5 mRNA的表达.同时,将过表达碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF、FGF2)的pcDNA3.1-FGF2转染至稳定转染si-KLF5的hPDLCs,加力8h后,以CCK8法检测各组细胞的增殖活性,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测ALP活性,RT-PCR检测成骨分化因子Runx2和Osterix的mRNA表达,Western印迹法检测Runx2、Osterix、FGF2、GSK-3β、P-GSK-3β (ser 9)、β-catenin蛋白的表达.采用SPSS22.0软件包对数据进行统计学分析.结果:10％ CTS刺激呈时间依赖性地诱导hPDLCs中KLF5 mRNA和蛋白表达.si-KLF5转染可显著抑制10％ CTS诱导的hPDLCs的增殖,降低其ALP活性,减少Runx2和Osterix的mRNA和蛋白表达,并抑制FGF2-GSK-3β/β-catenin信号通路的激活;而过表达FGF2可以部分逆转沉默KLF5对hPDLCs增殖和成骨分化的抑制效应.结论:周期性牵张应力作用下,KLF5通过FGF2-GSK-3β//β-catenin信号通路影响人牙周膜细胞的增殖和成骨分化.
-
低氧诱导因子-1α对KLF5表达调控的研究
目的 探索低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对转录因子KLF5的表达调控及其在细胞增殖中的作用.方法用低氧(1％O2或低氧模拟物CoCl2)处理293T细胞,通过qPCR和Western blotting检测HIF-1α、KLF5的mRNA和蛋白水平.用shRNA抑制HIF-1α的表达,再用低氧处理293T细胞后检测KLF5的表达水平.在293T细胞中过表达HIF-1α-P2A质粒,然后检测其对KLF5基因启动子驱动的luciferase及KLF5表达水平的影响.在HIF-1 α-P2A过表达的293T细胞转染shKLF5,通过CCK8检测细胞的增殖情况.共同转染KLF5和HRE-luciferase质粒,通过荧光素酶报告系统检测KLF5表达对HIF-1α转录活性的影响.结果 qPCR和Western blotting显示低氧可以稳定HIF-1α蛋白,同时在转录水平增强KLF5的表达;shRNA抑制HIF-1α表达可以抑制低氧诱导的KLF5表达上调,并且过表达外源性HIF-1α可以直接结合KLF5基因的启动子区并上调KLF5的表达;尽管单独过表达HIF-1α-P2A或者抑制KLF5的表达并不影响细胞增殖,但两者同时存在时可以明显促进细胞增殖;KLF5过表达可以明显抑制HIF-1α的转录活性.结论 KLF5是HIF-1α的直接靶基因,HIF-1α在转录水平调控KLF5的表达,而KLF5可能通过抑制HIF-1α的转录活性从而抑制HIF-1α的促增殖作用.
-
米非司酮衍生物FZU-00,033通过负调控KLF5表达抑制三阴性乳腺癌的生长
目的 米非司酮(MIF)在高浓度时可以抑制三阴性乳腺癌细胞的生长,文中旨在研究低浓度MIF的衍生物对三阴性乳腺癌细胞生长的影响. 方法 以三阴性乳腺癌细胞SUM149PT和HCC1937细胞为研究对象,将细胞分为DMSO组、MIF组(加10 μmol/L MIF)、5 μmol/L FZU-00,033组、10 μmol/L FZU-00,033组,处理24、48、72 h,用磺酰罗丹明B法检测细胞生长情况.取构建好的稳定过表达 KLF5 的三阴性乳腺癌细胞 HCC1937 进行实验,细胞分为 PCDH-DMSO 组(空载PCDH,DMSO)、PCDH-FZU-00,033 组(空载 PCDH,10 μmol/L 的 FZU-00,033)、KLF5-DMSO 组(过表达 KLF5,DMSO)以及KLF5-FZU-00,033组(过表达 KLF5,10 μmol/L 的 FZU-00,033). Western blot 方法检测药物处理后对细胞中 KLF5 表达、PARP剪切的影响.另在原有PCDH-DMSO组、PCDH-FZU-00,033组、KLF5-DMSO组以及KLF5-FZU-00,033组基础上增设5 μmol/L PCDH-FZU-00,033组(空载PCDH,5 μmol/L FZU-00,033)和5 μmol/L KLF5-FZU-00,033组(过表达KLF5,5 μmol/L FZU-00,033),Western blot方法检测FZU-00,033对过表达KLF5细胞的作用. 结果 与DMSO组比较,5 μmol/L FZU-00, 033组、10 μmol/L FZU-00,033组、MIF组在24、48、72 h均明显抑制SUM149PT、HCC1937细胞的存活(P<0.01),其中72 h DM-SO组、5 μmol/L FZU-00,033组、10 μmol/L FZU-00,033组、MIF组SUM149PT细胞存活率分别为[(100±4)%、(17±2)%、(5± 1)%、(58±1)%],HCC1937细胞存活率分别为[(100±7)%、(39±1)%、(30±1)%、(62±1)%];与MIF组比较,5 μmol/L FZU-00,033组、10 μmol/L FZU-00,033组在24、48、72 h对SUM149PT、HCC1937细胞存活明显抑制(P<0.01).相对于DMSO组而言,5 μmol/L FZU-00,033组、10 μmol/L FZU-00,033组、MIF组均显著抑制KLF5蛋白水平的表达且增加细胞凋亡;而与10 μmol/L MIF组相比,5 μmol/L FZU-00,033组以及10 μmol/L FZU-00,033组显著增加细胞凋亡.与PCDH-DMSO组相比,10 μmol/L PCDH-FZU-00,033组于48 h存活率降低[(100±6)% vs (39±2)%,P<0.05],72 h存活率亦降低[(100±3)% vs (21± 1)%,P<0.05];与 KLF5-DMSO 组相比,10 μmol/L KLF5-FZU-00,033 组于48 h 存活率降低[(100±1)% vs (47±1)%,P<0.05],72 h存活率亦降低[(100±1)% vs (27±1)%,P<0.05];同时,与10 μmol/L PCDH-FZU-00,033组相比,10 μmol/L KLF5-FZU-00,033组于48以及72 h能增加三阴性乳腺癌细胞的存活且有统计学意义(P<0.05).与PCDH-DMSO组相比,5 μmol/L PCDH-FZU-00,033组以及10 μmol/L PCDH-FZU-00,033组的细胞凋亡显著增加;与KLF5-DMSO组相比,5 μmol/L KLF5-FZU-00,033组以及10 μmol/L KLF5-FZU-00,033组的细胞凋亡亦显著增加. 结论 MIF的衍生物能抑制三阴性乳腺癌细胞的生长,其作用机制与抑制KLF5表达相关.
-
KLF5和Survivin蛋白异常表达与胃癌预后的关系
目的 通过分析KLF5和Survivin蛋白在胃癌组织中的表达,探讨KLF5和Survivin在胃癌发生、发展中的相互关系及二者对胃癌预后的影响.方法 采用免疫组化SP法检测79例胃癌组织和40例正常胃组织中KLF5和Survivin的表达,并根据检测结果进行相关性分析、Kaplan-Meier法进行生存分析、通过Cox比例风险模型分析KLF5和Survivin的表达与患者预后的关系.结果 79例胃癌组织中KLF5和Survivin的阳性率分别为46.84％和56.96％,二者表达均与肿瘤分化程度、临床分期、浸润程度及有无淋巴结转移显著相关(P＜0.05).经Spearman等级相关分析显示,KLF5和Survivin在胃癌组织中的表达呈正相关(rs =0.444,P＜0.05).Kaplan-Meier法生存分析显示,KLF5和Survivin阳性组的中位生存期(28个月和29个月)明显低于阴性组(48.5个月和50.6个月)(P ＜0.000 1).Cox回归分析表明,肿瘤浸润深度、临床分期、淋巴结转移以及KLF5和Survivin异常表达是影响胃癌患者预后的危险因素.结论 KLF5和Survivin高表达与胃癌分化程度、浸润和转移有关,并且二者间可能存在相互调节和协同效应,是胃癌不良预后的危险因素,可作为胃癌诊断及预后评价的客观指标.
-
在结肠癌细胞中P53突变调控KLF5功能及表达变化的实验研究
目的 探讨在结肠癌细胞株中P53基因突变对KLF5基因功能及表达变化的影响.方法 通过对常见结肠癌细胞株的筛选,选取P53野生型及KLF5基因蛋白表达相对较低的细胞株作为研究对象,应用质粒构建过表达载体转染目的细胞,运用PCR及Western blot技术进行验证,再用细胞迁移、侵袭、增殖实验观察结肠癌细胞株中P53突变与否对KLF5基因功能及表达的影响.结果 通过应用Western blot技术对常见的7株结肠癌细胞株中KLF5基因蛋白表达以及应用Sanger测序对细胞株中P53突变情况的筛选,选取结肠癌细胞株RKO作为研究对象,在成功构建P53R175H过表达载体及KLF5干扰和过表达载体,并转染到RKO细胞株中,并行Western-blot验证后,运用细胞迁移、侵袭及增殖实验,发现在没有P53R175H突变的RKO结肠癌细胞株中,KLF5的过表达能抑制细胞的迁移、侵袭及增殖的能力,而敲除KLF5的表达后,可以发现细胞的迁移、侵袭及增殖能力明显增加;而在P53R175H突变后的结肠癌细胞株RKO中,KLF5的过表达则会导致RKO的迁移、侵袭及增殖能力明显增强,而敲除KLF5的表达后迁移、侵袭及增殖能力下降.同时也发现RKO细胞中P53的突变会导致KLF5的表达水平的下降.结论 在高表达P53突变的结肠癌细胞株RKO中,KLF5的蛋白表达水平下降,而且其基因功能则从抑癌向促癌方向转换.
-
KLF5沉默通过抑制NF-κB信号通路减少氧化应激条件下心肌细胞炎症因子分泌
目的 研究沉默Krüpple样因子5(KLF5)对氧化应激条件下心肌细胞炎症因子分泌的影响及机制.方法 心肌H9c2细胞用过氧化氢处理,qRT-PCR和Western blot检测细胞中KLF5 mRNA和蛋白表达水平.用KLF5 shRNA慢病毒感染H9c2细胞,给予过氧化氢处理后,qRT-PCR和Western blot检测细胞中KLF5表达水平.MTT检测沉默KLF5对过氧化氢处理的心肌细胞活性的影响,同时用qRT-PCR法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA水平,Western blot检测细胞中核因子-κBp65(NF-κBp65)蛋白水平.用NF-κB激活剂处理沉默KLF5的心肌细胞,MTT检测其在过氧化氢处理后细胞活性,qRT-PCR法检测过氧化氢处理后细胞中TNF-α、IL-1β水平.结果 过氧化氢诱导H9c2细胞中KLF5 mRNA和蛋白表达.KLF5 shRNA慢病毒感染可下调氧化应激条件下H9c2细胞中KLF5的表达.过氧化氢能够下调H9c2细胞活性,提高细胞分泌的TNF-α、IL-1β水平,促进细胞中NF-κBp65蛋白表达.沉默KLF5能够提高过氧化氢条件下H9c2细胞经活性,减少细胞分泌TNF-α、IL-1β,抑制细胞中NF-κBp65蛋白表达.NF-κB激活剂可以逆转沉默KLF5对过氧化氢处理的心肌细胞增殖活性、炎症因子分泌的影响.结论 氧化应激诱导心肌细胞表达KLF5,沉默其表达可以通过抑制NF-κB通路减少心肌细胞中炎症因子表达.
-
KLF5对吉西他滨诱导的肺腺癌细胞凋亡的促进作用及其机制
目的 研究krüppel-like factor 5基因(KLF5)的表达对吉西他滨介导的肺腺癌细胞凋亡的影响及分子机制.方法 在体外培养的肺腺癌细胞H441中,分别转染KLF5表达质粒和空载体对照质粒培养68 h后,加入100 nmol/L的凋亡诱导药物吉西他滨处理4h,使用细胞计数和流式细胞术方法检测细胞增殖和凋亡;Westernblot检测KLF5蛋白的表达,RT-PCR检测KLF5及凋亡相关基因CD95和BAX的表达;免疫荧光染色比较凋亡相关蛋白Caspase 3的表达.结果 Western blot结果证明KLF5转染成功.无吉西他滨诱导情况下,KLF5高表达对H441细胞的凋亡无显著影响,CD95和BAX基因的表达差异无统计学意义;吉西他滨诱导情况下,与对照组相比,KLF5高表达的H441细胞中凋亡细胞比例增加(P＜0.05),CD95和BAX基因的表达上升(P＜0.05),Caspase 3的表达上调.结论 在吉西他滨诱导下,体外KLF5高表达促进肺腺癌细胞H441的凋亡.其机制可能是通过抑制细胞增殖和修复激活Caspase 3、CD95和BAX等细胞凋亡通路相关蛋白实现.
