首页 > 文献资料
-
促甲状腺激素生物素-亲和素酶促化学发光免疫分析方法的建立
目的 建立一种低成本、高灵敏度的检测血清促甲状腺激素(TSH)的生物素-亲和素酶促化学发光免疫分析方法.方法 引入生物素-亲和素放大系统,一株抗TSH的单克隆抗体包被微孔板,另一株标记生物素,辣根过氧化物酶标记链亲和素,鲁米诺作为发光底物,采用夹心法,建立TSH酶促化学发光免疫分析方法.结果 方法分析灵敏度为0.01mIU/L,批内变异系数为2.01％ ～5.40％,批间变异系数为2.96％ ～ 17.9％,回收率为90.6％ ～ 114.4％,高值促甲状腺激素血清样品经系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性关系,相关系数大于0.99,与原子高科TSH免疫放射分析方法和罗氏电化学发光分析法的测定值具有良好的相关性.结论 生物素-亲和素TSH酶促化学发光免疫分析方法具有成本低、灵敏度高、特异性高和稳定性好的特点,具有广阔的应用前景.
关键词： 促甲状腺激素 链亲和素化酶 生物素-亲和素系统 鲁米诺 酶促化学发光免疫分析 -
生物素化壳聚糖微球的体外抗癌活性
目的研究一套有预定位及肿瘤导向作用的药物载体系统.方法以生物素化无唾液酸胎球蛋白为分子识别系统,与肝癌细胞特异性结合,将包封有5-Fu的壳聚糖微球生物素化,作为药物载体,通过生物素-亲和素系统将二者桥连,用"三步法"研究微球体外抗肿瘤作用.结果亲和素-生物素化受体介导的生物素化壳聚糖微球能与体外培养的肝癌细胞特异结合并有显著的抗癌作用.结论生物素化微球-亲和素-生物素化受体(或单克隆抗体)系统可望在体内有预定位及肿瘤靶向作用,有广泛的应用前景.
-
肺癌放射免疫导向手术的动物实验和临床初步应用
目的:用手持型γ探测仪 (Gamma-detecting probe, GDP)对荷瘤小鼠肿瘤原发灶及微小转移灶行放射免疫探测,术中对肺癌的侵润范围及淋巴结转移进行了初步探测.方法:采用抗肺腺癌单克隆抗体LC-1生物素化预定位技术,进行肺腺癌小鼠RIGS动物实验.应用培普利欧霉素(peplomycin,PPM)和甲氧基异丁基异腈(methoxy-isobutylisonitrile,MIBI)为肿瘤示踪剂对肺肿瘤患者手术标本的放射性探测,以T/NT值判定探测标本的性质.结果:荷瘤小鼠的原发肿瘤和转移肺组织均有较高的T/NT比值.GDP探测鼠肺肿瘤转移的灵敏度、特异性和准确率为98%、96%和97%.临床应用GDP能准确地探测出肿瘤侵及范围和淋巴结转移,灵敏度、特异性和准确率为91%、88%和90%.结论:应用GDP可以探测出荷瘤小鼠体内肿瘤及其微小转移灶.PPM和MIBI用作肿瘤示踪剂可以有效地判别肺癌的侵润范围及淋巴结转移.
-
EV71抗原BA-ELISA检测方法的建立及应用
目的 建立EV71抗原生物素-亲和素酶联免疫(BA-ELISA)检测方法 ,并进行验证及初步应用.方法 以抗EV71抗体为包被抗体,利用生物素.亲和素系统建立双抗体夹心ELISA法,并对其灵敏度、特异性、准确性及精密性进行验证.采用该方法 检测组织培养及临床样品中EV71抗原的含量.结果 所建立的BA-ELlSA法在EV71蛋白含量625～156.25 ng/ml之间线性关系佳,R~2达0.9976,灵敏度为78.125～156.25 ng;与包括Cox A16在内的42种肠道病毒及相关病毒均无交叉反应;检测10份EV71阳性样品和10份阴性样品,结果 符合率均为100%;检测EV71原液和高、中浓度样品的变异系数分别为3.09%、6.69%和6.43%;可检出约10~3～10~4 CCID_(50),的活病毒及手足口病患者的大便悬液和部分咽拭子悬液中的病毒.结论 用生物素标记EV71抗体与亲和素系统建立的双抗体夹心ELISA法具有较高的特异性、灵敏度、准确性和精密性,为临床检验及抗原分析提供了参考.
-
BA-ELISA定量检测人血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa、CD62p的表达及其临床应用
目的 建立测定血小板膜糖蛋白功能的生物素-亲和素-酶联免疫吸附(BA-ELISA)方法,并探讨其临床应用价值.方法 采用抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa( GPⅡb/Ⅲa)单抗7E3和抗血小板CD62p单抗SZ51及生物素-亲和素系统建立BA-ELISA方法,并应用该方法检测50名健康志愿者、30例急性心肌梗死(AMI)、30例急性脑梗死(ACI)和30例糖尿病(DM)患者的血小板膜糖蛋白功能,并与流式细胞术(FCM)测定结果进行比较.同时,应用该方法对抑制性单抗SZ21和阿司匹林抑制血小板活化的功能效果进行测定.结果 该方法检测血小板计数敏感度低达3.13×109/L(7E3包被板)和6.25×109/L(SZ51包被板),批内和批间变异系数分别为6.23％～8.35％和4.38％～5.78％.测得AMI、ACI和DM患者ADP诱导的(未诱导的)血小板的GPⅡb/Ⅲa和CD62p表达量均显著高于健康志愿者(均P＜0.01).BA-ELISA测定表明,SZ21和阿司匹林可抑制ADP诱导的血小板功能(但P＞0.05).该方法和FCM同时测定健康志愿者、AMI、ACI和DM患者的GPⅡb/Ⅲa和CD62p表达水平.测定数据经直线回归分析得r =0.86.结论 BA-ELISA检测血小板的膜糖蛋白,可精确判断血小板的功能状态,为指导临床预防、诊治、评估疾病提供简便、可行的方法.活化的血小板膜糖蛋白测定可从凝血的角度对上述疾病的早期诊断、病情进展的判断、抗血栓药物的评估及疾病预后的判断起到辅助作用.
-
钛种植体表面固定生物素的实验研究
目的：利用生物素-亲和素系统，将生物素共价键合在钛基材表面，为钛种植体表面接枝生物活性分子提供新的实验方法。方法使用3-氨丙基膦酸( APP)对钛基材表面进行酸蚀处理并使其获得游离氨基，由碳二亚胺( EDC )介导，通过与羧基反应形成酰胺键以实现生物素-亲和素系统在钛种植体表面的固定。结果通过环境扫描电镜、傅立叶变换红外光谱、X射线光电子能谱、免疫荧光等检测方法对样品进行表征，证实钛基材表面已成功接枝生物素。结论采用生物素-亲和素系统，可以在氨基化的钛基材表面成功接枝生物素，为钛种植体表面生物化修饰的研究提供新的方法和思路。
-
原发性肝癌的白蛋白靶向超声造影剂的二步法制备
目的 运用生物素-亲和素系统制备表面带有肝癌细胞膜蛋白的单克隆抗体的白蛋白微泡,并探讨其体外特异性与稳定性作用.方法 将亲和素作为微泡的原材料之一,与白蛋白按一定比例混合,声振出外壳含亲和素蛋白的超声微泡显影剂.再与已生物素化的Hab18G单克隆抗体进行偶联,并采用玻片凝集法检验抗体的活性是否正常.以高表达Hab18G蛋白的人肝癌细胞和几乎不表达Hab18G蛋白的肝星状细胞分别为对象进行花环形成实验,检验靶向微泡的特异性结合作用.结果 以此法制备的靶向微泡的玻片凝集反应呈阳性;花环实验中,可见靶向微泡沿着人肝癌细胞的轮廓呈线性排列,形成花环,而肝星状细胞表面未见明显免疫微气泡附着.结论 通过二步法,运用生物素-亲和素系统能够将抗体有效地偶联到白蛋白微气泡表面,制备出特异且稳定的靶向超声造影剂.
-
生物素化壳聚糖微球用于体外肿瘤靶向治疗
生物素-亲和素介导的肿瘤靶向治疗是近几年来肿瘤早期诊断、治疗研究的热点.将包封有TNFα的壳聚糖微球生物素化,以生物素化无唾液酸胎球蛋白为导向系统,采用"三步法"研究了微球体外抗肿瘤毒性实验.结果表明: 生物素化壳聚糖微球对体外培养的肝癌细胞SMMC-7721有显著的抑制作用(抑制率为60.8% ,P<0.01).
-
生物素-亲和素系统在MR靶向成像中的应用
目的探讨利用生物素-亲和素系统的靶向定位效应和生物放大作用,提高MR分子成像的敏感性.方法制备生物素化HAb18单克隆抗体并测定其生物素化程度及抗原结合活性.将8只荷人肝细胞癌裸鼠静脉注射生物素化单克隆抗体600μg,24 h后腹腔注射80μg亲和素,30 min后再静脉给予Gd-DTPA-链霉亲和素.对实验动物行MR扫描,测量SET T1 WI平扫及增强后10、30min及2、6、12、24 h图像内肿瘤、肝脏、肌肉的信号强度,绘制信号强度-时间曲线,并计算其强化率及对比度噪声比.结果HAb18单克隆抗体经生物素化后,每个抗体分子平均可结合20个分子生物素,其抗原结合活性约为91%.增强后肿瘤信号强度缓慢升高,在注射对比剂后第6小时,肿瘤的强化率、比度噪声比达到大值,与其他各时间点有显著性差异.肝脏在注射对比剂后第6小时的信号强度达到高,而后信号强度下降,增强后12 h的信号强度与平扫相似.肌肉表现为轻度强化,增强后各时间点的信号强度与平扫相比无明显差异.结论利用生物素-亲和素技术对肿瘤进行MR靶向成像,具有特异性强化作用并能延长肿瘤的强化时间,但Gd-DTPA-SA的血池效应也造成了肝脏的持续强化.
-
静电吸附法与生物素-亲和素桥联法制备PSMA抗体靶向纳米微泡的对比实验研究
目的 比较静电吸附法和生物素-亲和素桥联法制备前列腺特异性膜抗原(PSMA)抗体靶向纳米微泡的物理特性和靶向黏附率.方法 分别应用静电吸附法和生物素-亲和素桥联法制备PSMA抗体靶向的纳米微泡,检测其物理性状;光镜下观察两种微泡与前列腺癌细胞LNCaP和C4-2的靶向能力,并与胃癌细胞MKN45对照;对比分析两种靶向纳米微泡的粒径、浓度及与前列腺癌细胞结合能力.结果 两种靶向纳米微泡均呈圆形,表面光滑,大小均匀,分散度好,无聚集,粒径均＜1000 nm.静电吸附法制备的靶向纳米微泡平均粒径为(702.96±66.65)nm,平均浓度为(3.46±0.30)×108/ml,与前列腺癌细胞LNCaP黏附率(77.2±3.19)％,与C4-2细胞黏附率(61.00±4.47)％;生物素-亲和素桥联法制备的靶向纳米微泡平均粒径为(609.90±37.40)nm,平均浓度约(4.52±0.19)×108/ml,与前列腺癌细胞LNCaP黏附率(96.60±1.14)％,与C4-2细胞黏附率(94.00±1.58)％.两种靶向纳米微泡的粒径、浓度及与前列腺癌细胞黏附率比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05);与胃癌细胞MKN45均无黏附.结论 生物素-亲和素桥联法是一种高效、灵敏、稳定、特异性强的PSMA抗体靶向微泡制备方法,较静电吸附法具有更大的优势.
-
肺癌放射免疫导向手术的动物实验研究
目的探讨放射免疫导向手术在检测小鼠肺腺癌动物模型肿瘤转移的灵敏度、特异性及可靠性.方法应用抗人肺腺癌单克隆抗体LC-1生物素化预定位技术,进行肺腺癌小鼠放射免疫导向手术.结果γ照相机体外显像和井型探测仪体内放射性分布探测的结果显示:在注射放射性核素2 h后,生物素化抗体预定位的荷瘤小鼠的肿瘤即有明显放射性浓集,其原发肿瘤和肺部转移灶的T/NT比值均显著高于未进行生物素化抗体预定位的荷瘤小鼠(P<0.01).应用手持型γ探测仪(GDP)对荷瘤小鼠进行体内探测,判别小鼠肺部肿瘤转移的灵敏度为96%,特异性为98%,准确率为97%.结论采用抗肺腺癌单克隆抗体LC-1生物素化预定位技术能明显提高小鼠肿瘤的放射性浓集,应用GDP进行小鼠体内探测可以探测出肿瘤及肺部微小转移灶.
-
两种甲型肝炎病毒抗原快速检测方法的建立
目的 建立两种甲型肝炎病毒抗原(HAV-Ag)检测试剂盒,并对其检测效果进行评价.方法 生物素标记甲型肝炎病毒抗体(HAV-Ab)与辣根过氧化物酶标记亲和素联合应用建立甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法；同时使用辣根过氧化物酶标记HAV-Ab作放大系统建立双抗体夹心甲型肝炎病毒抗原ELISA检测试剂,对比两种检测方法的特异性、灵敏度及实际应用效果.结果 用生物素标记甲型肝炎病毒抗体-辣根过氧化物酶标记亲和素作放大系统建立的甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法,较双抗体夹心ELISA检测方法灵敏度高1～2个稀释度；两种检测法均对10余种病毒无交叉,P/N值BA-ELISA检测法较高.结论 甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法是一种灵敏度高,特异性好,方便快捷的检测方法,可广泛应用于甲型肝炎病毒研究及临床检测中.而甲型肝炎病毒抗原双抗体夹心ELISA检测法,检测灵敏度适中,操作简单,更适用于甲肝疫苗生产检定.
