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子痫前期患者CD4+CD25+调节性T细胞亚群的改变及意义
目的：探讨子痫前期患者CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）亚群改变及在PE免疫耐受失衡中的作用。方法选取PE患者（观察组）30例，同期正常晚期妊娠（对照组）20例。分别采集PE患者和正常晚期妊娠妇女外周血，采用流式细胞术检测Treg以及活化记性相关（CD45RO、HLA- DR）、归巢相关（CCR4、CCR6、CD103）、功能相关（ICOS、CTLA-4、Galectin 1）和生存相关（PD1和CD95）标记分子的表达。采用免疫抑制实验检测外周血中 Treg 的免疫抑制功能。结果观察组患者外周血CD4+CD25+细胞的比例[(5.87±3.34)%]低于对照组[（6.65±1.18）%]，但差异无统计学意义。免疫抑制实验显示观察组患者外周血中Treg对CD4+CD25-T细胞的增值抑制作用与对照组无统计学差异。通过对Treg多个标记分子的检测进一步发现，ICOS和CCR6在观察组Treg上的表达水平显著低于对照组Treg（均P＜0.01）；CCR4和Galectin 1的表达水平较对照组低，而CD45RO、HLA- DR、CD103、CTLA、PD1和CD95的表达水平较对照组高，但两组间差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论 Treg亚群比例失调可能是导致子痫前期发生的重要因素。
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阻断ICOS抑制兔高危角膜移植排斥反应的实验研究
目的 建立兔角膜移植高危模型,通过阻断ICOS,探讨ICOSmAb对角膜移植排斥反应的影响.方法 将新西兰白兔50只随机分成空白对照组、实验组(植片为浸入含有不同浓度ICOSmAb的中期保存液中):A组(1 mg·L-1 ICOSmAb),B组(10 mg·L-1ICOSmAb),C组(25 mg·L-1 ICOSmAb),D组(250 mg·L-1 ICOSmAb),每组10只兔.观察术后受体植片角膜混浊情况和植片病理改变,应用流式细胞仪检测植片CD4+、CD8+T淋巴细胞表达情况.结果 实验A、B组的植片有较长的生存时间,各实验组及对照组植片平均存活时间(69±34) d、(75±31) d、(45±18) d、(10±3)d、(26±4) d.CD4+、CD8+T淋巴细胞表达明显降低(P＜0.05);A组植片组织病理学检查淋巴细胞浸润较对照组及其他实验组明显减少.结论 应用ICOSmAb阻断ICOS,可以明显抑制高危角膜移植排斥反应.
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B7/CD28家族共刺激分子在川崎病发病机制中的作用
目的 观察在川崎病(KD)患儿外周血单个核细胞(PBMC)B7/CD28家族分子:CTLA-4、BTLA、ICOS、CD80、CD86表达变化,旨在探讨B7/CD28家族分子在KD发病机制中的作用. 方法应用荧光定量PCR检测48例KD患儿和其中30例用丙种球蛋白(IVIG)治疗后患儿的CTLA-4、BTLA、ICOS mRNA表达的变化,部分患儿应用流式细胞术测定CD80、CD86表达状况.本研究以25例同龄健康儿童作为对照组.结果 (1)KD组与对照组相比:正性调节因子ICOS mRNA的表达显著升高(P<0.01);CD80、CD86表达升高(P<0.01);负性调节因子CTLA-4、BTLA mRNA的表达则显著降低(P<0.05, P<0.01).其中冠状动脉损害组较无冠状动脉损害组ICOS表达程度更高(P<0.01).(2)KD组中IVIG治疗前后进行配对比较:IVIG治疗后CTLA-4、BTLA mRNA表达显著回升(P<0.05),ICOS mRNA的表达则显著下降(P<0.05). IVIG治疗不敏感组与敏感组比较:ICOS表达前者显著升高(P<0.05),CTLA-4、BTLA表达显著降低(P<0.05). 结论 KD患儿B7/CD28家族分子正性调节因子过度表达,负性调节因子表达不足可能是KD免疫发病机制的重要环节.正性调节因子过度表达可能与KD冠状动脉损害有关; IVIG治疗可能在纠正KD淋巴细胞过度活化中发挥作用;正、负调控因子表达失衡程度可能与KD IVIG疗效有关.
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狼疮肾炎患者外周血中ICOS、OX40、CD40表达量与病情活动的相关性研究
目的:研究狼疮肾炎(LN)患者外周血中ICOS、OX40、CD40表达量与病情活动的相关性.方法:选择在本院诊断为稳定期狼疮性肾炎患者和活动性狼疮性肾炎患者,分别作为稳定期LN组和活动性LN组;选择同期体检的健康志愿者作为对照组.测定外周血单个核细胞中ICOS、OX40、CD40的mRNA表达量及血清中细胞因子、病情活动相关指标的含量.结果:稳定期LN组和活动性LN组患者外周血单个核细胞中ICOS、OX40、CD40的mRNA表达量以及血清中IL-4、IL-5、IL-10、抗C1q抗体、抗,ds-DNA抗体的含量均显著高于对照组,血清中TNF-α、IFN-γ、C3、C4的含量均显著低于对照组;活动性LN组患者的上述变化较稳定期LN组更为显著;LN患者外周血单个核细胞中ICOS、OX40、CD40的mRNA表达量与血清中IL-4、IL-5、IL-10、抗C1q抗体、抗ds-DNA抗体的含量呈正相关,与血清中TNF-α、IFN-γ、C3、C4的含量呈负相关.结论:LN患者外周血中ICOS、OX40、CD40的高表达与Th1/Th2的偏移、病情的活动密切相关.
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ICOS胞外区基因修饰的树突状细胞对移植肾存活的影响
目的:探讨诱导共刺激分子(Inducible costimulator,ICOS)胞外区基因修饰的树突状细胞(Dendritic ceUs,DC)对移植肾存活的影响.方法:以BN、Lewis大鼠为肾移植供、受体;用ICOS胞外区基因重组腺病毒转染供体骨髓源性DC使之表达ICOS胞外区;将供体DC于肾移植前24 h经股静脉注入受体为实验组,未注射DC的受体为对照组;观察两组移植肾存活时间.术后第20 d,MTT法检测受体脾细胞对供体及无关抗原刺激的反应.结果:与对照组相比,实验组移植.肾存活时间显著延长[(23.2±3.08)d与(8.5±1.4)d],P<0.01).术后第20 d,实验组脾细胞对供体抗原刺激的反应明显低于正常对照(0.37±0.06)与(0.84±0.12),P<0.01,而对无关抗原刺激的反应与正常对照差异无显著性(0.76±0.11)与(0.69 4-0.09),P>0.05.结论:I-COS胞外区基因修饰的供体DC可以明显延长大鼠移植肾存活时间.
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鼠ICOSIg融合蛋白腺病毒的制备及其对胰岛细胞系NIT-1的感染
目的 制备mICOSIg腺病毒,研究其对胰岛细胞系NIT-1的感染情况,及可否使后者正确表达分泌mICOSIg.方法 从pMIG-ICOSIg质粒上切下ICOSIg融合蛋白的表达框,插入pAdtrack-CMV中构建腺病毒穿梭质粒pAdmICOSIg,在Adeasy-1大肠杆菌中进行同源重组,随后转染293 细胞进行病毒颗粒包装.收集病毒后感染NIT-1细胞,用免疫印迹证实mICOSIg在NIT-1细胞中的正确分泌表达. 结果 ICOSIg编码框被正确构建到pAdtrack-CMV中,并经测序证实无误.目的 病毒成功包装出来,并能有效感染胰岛细胞系NIT-1,免疫印迹证实培养上清中存在正确大小的mICOSIg融合蛋白.结论 成功制备了mICOSIg腺病毒,该病毒能有效将mICOSIg转入胰岛细胞系NIT-1,并能准确分泌mICOSIg蛋白.为研究1型糖尿病中ICOS信号通路在T细胞破坏胰岛细胞中的作用提供了有效的研究手段.
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新生儿脐血单个核细胞ICOS与转录因子表达的观察
新生鼠及人脐血的研究均表明,新生儿T细胞有向Th2细胞发育的潜能.可诱导共刺激因子(inducible co-stimulate factor,ICOS)是近年来发现表达在活化T淋巴细胞表面的一种新型膜分子,转录因子T-bet、GATA-3和Foxp3分别是Th1、Th2和CD4+CD25+调节性T细胞的特异性转录因子,它们均可影响T细胞分化的上游调节.
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ICOS和PD-1共刺激分子的免疫学作用
可诱导共刺激分子(inducible costimulatory molecule,ICOS)和程序性死亡-1(programmed death-1,PD-1)共刺激分子作为B7家族的新成员主要作用于已致敏的T淋巴细胞.ICOS、PD-l及其受体介导的信号途径,对免疫应答分别发挥正向、负向调控作用,正在成为对临床疾病进行免疫干预有希望的手段之一.
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ICOS:一种重要的新型诱导共刺激分子
抗原特异性T淋巴细胞免疫应答的有效产生及维持需要2种信号--MHC-肽提供的特异性的抗原信号,以及由APC表面共刺激分子提供的共刺激信号(Costimulatory signal).
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应用双向启动子RNA干扰技术抑制ICOS表达
目的应用双向启动子技术构建针对共刺激分子ICOS的逆转录病毒干扰载体,观察其对ICOS表达的影响.方法设计ICOS的干扰序列,构建基于双向启动子的逆转录病毒干扰载体MIW-ICOS,包装病毒后转染Hut78细胞,RT-PCR检测ICOS转录水平水平受抑制情况,FACS检测细胞表面ICOS蛋白表达受抑制情况.结果构建了针对ICOS三段序列的逆转录病毒干扰载体MIW-ICOS,并证实其中的一个干扰载体能有效抑制ICOS的表达.结论基于双向启动子的编号为245的ICOS逆转录病毒干扰载体能有效抑制Hut78 T细胞上ICOS的表达,为干预ICOS-ICOSL共刺激通路提供了有效手段.
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共刺激信号分子表达异常与自身免疫性疾病的关系
目的分析类风湿性关节炎(RA)和系统性红斑狼疮(SLE)细胞免疫异常中共刺激活化信号途径的异同点,探讨细胞活化的共刺激信号途径对于RA和SLE发病的意义.方法采用流式细胞术分析SLE和RA患者T细胞表面共刺激分子CD28、CD152/CTLA-4、CD154/CD40L和ICOS表达情况.结果①RA患者CD4+T细胞比例明显增加,SLE患者以CD8+T细胞增加显著.②SLE患者CD4+和CD8+T细胞上CD28和CD152的表达增加;RA患者T细胞亚群上CD28分子的表达减少,CD152分子的表达增加.③RA患者CD4+T细胞上CD154分子表达增加,CD8+T细胞上CD154分子表达减少,T细胞亚群上可诱导共刺激分子(ICOS)的表达无明显变化;SLE患者CD4+和CD8+T细胞上CD154或ICOS分子的表达均减少.结论RA和SLE患者机体的免疫异常中存在着明显的分子信号途径差异.
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滤泡辅助性T细胞(Tfh)的研究进展
T细胞辅助B细胞抗体的生成是体液免疫应答的中心环节.但直到近,科学家们才对T细胞辅助B细胞的细胞及分子机制有了更清楚的认识.滤泡辅助性T细胞(T follicular helper cells,Tfh)是近明确的一种新的CD4+T细胞亚群,其主要功能是辅助B细胞参与体液免疫.Tfh的表型和功能与其他CD4+T细胞亚群有所不同,包括趋化因子受体的表达(如CXCR5)、定位和迁移(Tfh存在于B细胞滤泡)及其辅助B细胞的功能.Tfh产生的细胞因子IL-21在Tfh功能中处于核心地位,通过与其受体IL-21R结合,可有效地刺激B细胞分化成抗体形成细胞.因此Tfh细胞相关分子(如ICOS或IL-21)的高表达或低表达,很可能与某些自身免疫性疾病或免疫缺陷疾病的发病有关.
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关于阻断共刺激通路诱导移植免疫耐受的实验动物研究进展
应用能够使T细胞活化的协同刺激分子的相应单克隆抗体或重组基因表达产物阻断某些共刺激信号通路如CD28/B7、CD154/CD40、LFA-1/ICAM、ICOSL/ICOSL等可以抑制T细胞活化、分化以及产生效应细胞.这些共刺激信号通路彼此独立但又可能存在潜在的协同效应.本文综述在有关诱导受体对供体移植物特异性的免疫耐受以此延长移植物存活时间的实验动物研究,以期深入探讨免疫耐受机制以及某些处理因素对结果的影响,从而为此类实验的进一步开展甚至临床应用提供理论依据和实验支持.
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共信号分子CD28、ICOS、PD-1、CTLA-4在系统性红斑狼疮患者外周血中的表达水平及意义
目的:探讨共信号分子CD28、ICOS、PD-1、CTLA-4是否参与系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)的发病机制.方法:收集20例SLE患者与30名健康体检者外周血标本,通过免疫荧光标记及流式细胞术检测共信号分子CD28、ICOS、PD-1、CTLA-4在活跃期、非活跃期患者及健康对照者外周血CD4+T细胞表面的表达水平,同时将上述共信号分子与系统性红斑狼疮疾病活动性指数(SLEDAI)进行相关性分析.结果:在SLE患者中,CD28和ICOS的表达水平与健康组比较差异无统计学意义(P>0.05),PD-1较健康组明显高表达(P<0.001),CTLA-4较健康组低表达(P<0.01);在20例自身对照组中,CD28及PD-1在活跃期较非活跃期均高表达(P<0.05,P<0.01),而ICOS及CTLA-4的表达水平差异无统计学意义(P>0.05).且4种共信号分子的表达水平与SLEDAI评分均无相关性.结论:PD-1及CTLA-4、CD28可能参与SLE的发病机制,而ICOS可能与SLE的发病机制关系不大.
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通痹合剂乙酸乙酯部位调节活化T细胞双信号分子的机制研究
目的:明确通痹合剂抑制T淋巴细胞活化的活性部位,研究其对T细胞双信号分子的影响,阐明通痹合剂免疫调控作用的机制.方法:分离大鼠淋巴细胞,加入通痹合剂不同提取部位,ConA刺激48 h,流式细胞术(FCM)检测CD3阳性细胞表达CD71；加入不同浓度通痹合剂乙酸乙酯部位和甲氨蝶呤(MTX),ConA刺激48 h,FCM检测T细胞表达TCR、CD28和ICOS.结果:ConA刺激后CD3阳性细胞表达CD71显著上调至69.7％,通痹合剂乙酸乙酯部位(TBHJ)可抑制CD3+ CD71+表达(32.5％)；ConA刺激T细胞表达TCR、CD28和ICOS明显升高,与阴性对照组(Control)有非常显著性差异(P ＜0.001),TBHJ可明显抑制T细胞表达TCR、CD28和ICOS,尤其抑制ICOS作用较强,呈浓度依赖效应；MTX可明显抑制T细胞表达TCR、CD71.结论:TBHJ可明显抑制T淋巴细胞活化,其对T细胞活化的双信号分子途径均有下调作用,尤其以抑制ICOS明显,提示TBHJ可通过阻断CD28-ICOS第二信号途径,诱导免疫耐受.本研究为通痹合剂治疗类风湿性关节炎等自身免疫性疾病提供了实验依据.
关键词： 通痹合剂乙酸乙酯部位 T淋巴细胞 TCR CD28 ICOS -
他克莫司与环孢菌素A对肝移植受者CD4/CD8 T淋巴细胞亚群及共刺激分子的调节作用
目的:探讨他克莫司(Tacrolimus, FK506)与环孢菌素A(CsA)对肝移植受者T淋巴细胞亚群共刺激分子的调节作用.方法:采用荧光标记单克隆抗体(mAb)结合流式细胞技术, 测定移植术后使用FK506或CsA治疗2月末的肝移植受者外周血T细胞亚群及其表面共刺激分子CD28、CD152 和ICOS的表达情况.以健康志愿者(健康对照组)和患终末期肝脏疾病拟进行肝移植者(疾病对照组)为对照.结果:疾病对照组T细胞亚群平衡紊乱、共刺激分子表达异常(P＜0.05).治疗组肝移植受者T淋巴细胞亚群表达恢复至健康对照水平, T细胞表面CD28和ICOS分子表达显著降低(P＜0.05)而CD152分子表达明显升高(P＜0.05).比较不同药物治疗组:CsA治疗组CD4+T细胞表达和CD8+T细胞表面CD28、CD152分子表达均明显高于FK506治疗组(P＜0.05);其他指标无统计学意义(P＞0.05).结论:在常规血药浓度条件下FK506和CsA的对CD4/CD8T细胞亚群及共刺激分子的免疫调节作用存在差异.FK506对T细胞亚群的调节作用强于CsA.FK506可同时抑制正性共刺激分子CD28和ICOS表达并促进负性共刺激分子CD152表达, 而CsA对T细胞免疫抑制作用主要是通过促进CD152分子的高表达介导.
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感染免疫中ICOS和PD-1在调节性T细胞上的表达及平衡
调节性T细胞(Treg)是一个具有免疫调节作用的T细胞亚群,在机体免疫防御、识别并清除外来抗原、维持免疫耐受和免疫应答稳态中具有非常重要的作用.可诱导共刺激分子(ICOS)和程序性死亡分子l(PD-1)主要表达于已活化的T淋巴细胞,对免疫应答分别发挥正向、负向调控作用,辅助维持机体免疫的自稳状态,确保宿主获得佳的适应性免疫有重要作用,在感染性疾病的发生发展中有重要意义.且两个分子在Treg上均有上调表达,可调节Treg在免疫应答中的作用,将有希望成为对临床疾病进行免疫干预的靶位之一.现就感染免疫中ICOS/PD-1在Treg上的表达及平衡进行简要综述.
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ICOS-B7h,-对新的T细胞协同刺激分子的结构和功能
T淋巴细胞是免疫细胞的重要组成部分,在细胞免疫和体液免疫的诱导均中发挥着重要作用.既往研究表明,T细胞活化是一个复杂的信号转导过程,它不仅需要T细胞受体(TCR)识别抗原呈递细胞(APC)表面的MHC:抗原肽复合物,产生第一活化信号,而且还需要两者之间其他辅助分子的相互作用提供第二活化信号,即协同刺激信号.
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T-B细胞协作研究的重大突破——滤泡辅助性T细胞的发现,一个新的CD4+效应T细胞亚群
二十世纪60年代,Claman和Miller等[1,2]分别采用照射或胸腺切除的小鼠模型,同时过继转移正常小鼠骨髓细胞和胸腺细胞,或过继转移胸腺细胞或胸导管淋巴细胞,才能产生针对羊红细胞抗体,发现了B细胞对某些抗原(后称为T细胞依赖抗原)刺激产生抗体必须要有T细胞的辅助.
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联合阻断CD28和ICOS对兔高危角膜移植排斥反应的影响
目的:建立兔角膜移植高危模型,通过联合阻断CD28和ICOS,探讨CTLA4-Ig及ICOSmAb对角膜移植排斥反应的影响.方法:实验动物随机分成4组,每组10只.联合阻断组:植片为浸入含有CTLA4-Ig和ICOSmAb的中期保存液中.ICOS组:植片为浸入含有ICOSmAb的中期保存液中.CTLA4组:植片为浸入含有CTLA-4Ig的中期保存液中.对照组:单纯角膜移植,不做CTLA-4Ig和ICOSmAb处理组.观察术后受体植片角膜混浊情况和植片病理改变,RT-PCR方法检测植片IL-2,IL-10mRNA的表达情况,应用流式细胞仪检测植片CD4+,CD8+T淋巴细胞表达情况.结果:联合阻断组兔角膜移植片存活时间(92±18)d,较其它3组明显延长(P＜0.05);术后21d联合阻断组移植物中IL-2mRNA表达明显降低(P＜0.05),CD4+,CD8+T淋巴细胞表达明显降低(P＜0.05);植片组织病理学检查淋巴细胞浸润较其它3组明显减少.结论:应用CTLA4-Ig和ICOSmAb联合阻断CD28和I-COS,可以明显抑制高危角膜移植排斥反应,提高移植的存活率.
