首页 > 文献资料
-
RNA干扰Tb人舌癌细胞整合素连接激酶基因表达可抑制移植瘤生长
目的 研究对Tb舌癌细胞的整合素连接激酶(ILK)进行特异性siRNA沉默后,下游信号分子Akt、GSK3β磷酸化状态及对移植瘤生长和自发性转移的变化.方法 建立特异性siILK表达载体和无同源性的对照载体,通过Lipofectamine 2000介导稳定转染人舌鳞癌Tb细胞,然后将Tb、Tb vector和Tb silk 3组细胞分别注入裸鼠皮下构建移植瘤模型,5周后检测瘤大小和质量,对裸鼠肺及瘤组织行常规病理学检查,用免疫荧光技术检测癌细胞的p-Akt和p-GSK3β等的表达,并对瘤组织内血管生成情况进行观察.结果 Tb组、Tb vector组肺组织均发现自发性转移瘤,Tb siILK组肺组织未发现自发性转移瘤;Tb siILK组移植瘤细胞形态较其他二组体积减小,核分裂相较少,核质比例缩小;Tb siILK组在体内和体外实验中的p-Akt和p-GSK3β表达较其他二组均明显下降;Tb siILK组移植瘤质量(1.68± 1.35)g较Tb组(3.58±1.04)g与Tb vector组(3.64 ±0.65)g分别降低了53.0％和53.8％(P＜0.05);Tb siILK组移植瘤血管[(5.6±2.2)/视野]生成较Tb组[(15.3±2.3)/视野]和Tb vector组[(14.6±1.4)/视野]也明显减少(P＜0.05).结论 特异性ILK表达沉默抑制Tb舌癌移植瘤的血管生成和瘤细胞增殖,可能与其抑制下游信号传导分子Akt及GSK3β的磷酸化有关,提示ILK有望成为肿瘤治疗的靶基因.
-
中频交变磁场抑制人舌鳞癌细胞的增生
目的 探讨不同强度的交变磁场辐照对人舌鳞癌细胞(TCa8113)增生的影响.方法 不同强度的交变磁场(5mT、8mT、11mT)对人舌鳞癌细胞进行连续3天的辐照刺激,每天1h,通过MTT法和流式细胞术检测细胞的增生、凋亡和细胞周期的变化.对照组(假实验组)采用相同的实验条件和作用时间但不加磁场辐照.结果 MTT法检测实验组与对照组辐照后24h、48h、72h的OD值,通过SPSS软件分析显示实验组比对照组的OD值显著降低(P<0.01).流式细胞术检测电磁场组与对照组细胞凋亡率无差异.但细胞周期有显著改变(0.5mT).结论 不同强度的交变磁场辐照对人舌鳞癌细胞增生有明显抑制作用,并可阻滞细胞周期,但对舌鳞癌细胞的凋亡未发现明显影响.
-
雌激素受体在人舌鳞癌中的表达及β-雌二醇对其增殖的影响
目的:观察雌激素受体(ER)在人舌鳞癌Tca8113细胞系细胞上的表达,研究β-雌二醇(estradiol, E2)对培养的舌癌细胞增殖的影响.方法:用免疫细胞化学方法和RT-PCR方法检测雌激素受体在人舌鳞癌细胞上的表达,将β-雌二醇(β-E2)作用于体外培养的人舌鳞癌细胞,测定3H-TdR掺入量,并用流式细胞仪测定细胞周期.结果:经免疫细胞化学和RT-PCR方法可检测到ER-α和ER-β在人舌鳞癌细胞上均有表达,其中ER-β表达相对较弱.不同浓度的β-E2可增加3H-TdR掺入量,并存在着剂量效应.10-6mol/L的β-E2能使人舌鳞癌细胞处于G1期的细胞比例从对照组的76.5%下降至62.3%,而处于S期和G2期的细胞比例从23.5%上升至37.7%,细胞的DNA合成增加,促进细胞的增殖.β-E2对舌癌细胞的促增殖作用可被Tamoxifen阻断.结论:在人舌鳞癌细胞上有雌激素受体的表达,且β-E2在体外能明显促进培养的人舌鳞癌细胞的增殖.
-
辛伐他汀和普伐他汀对人舌鳞癌Tca-8113细胞的增殖、凋亡作用影响的初步探究
目的:初步探究辛伐他汀和普伐他汀对人舌鳞癌Tca-8113细胞的促进增殖抑制及诱导细胞凋亡的作用.方法:采用不同浓度(15、30、45、60、75μmol/L)的辛伐他汀和普伐他汀分别作用于Tca-8113细胞不同的时间(24/48h),采用M TT法检测两种药物对Tca-8113细胞的体外增殖抑制作用;光学显微镜下观察Tca-8113细胞形态学变化;采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果:辛伐他汀和普伐他汀均可抑制Tca-8113细胞的增殖与促进凋亡,呈现浓度和时间依赖性(P<0.05).结论:辛伐他汀和普伐他汀对人舌鳞癌细胞均有明显的抑制增殖、促进凋亡的作用,其中辛伐他汀的作用略高于普伐他汀.
-
RNA干扰整合素连接激酶基因表达对人舌鳞癌Tb细胞生长、迁移和侵袭能力的影响
目的 探讨沉默整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因表达对人舌鳞癌Tb细胞生长、迁移和侵袭能力的影响.方法 将ILK siRNA表达质粒和阴性对照质粒在脂质体介导下转染人舌鳞癌Tb细胞,稳定表达细胞株分别命名为Tb siILK和Tb vector组,并设正常Tb细胞对照组(Tb组).Western blot法检测细胞中ILK蛋白的表达；细胞免疫荧光法检测细胞中ILK、p-Akt和p-GSK3β的表达；光镜和HE染色观察细胞的形态学变化；划痕试验检测细胞的迁移能力；Transwell法检测细胞的侵袭能力；流式细胞术检测细胞的细胞周期和凋亡情况；MTT法检测细胞的增殖活力；Westem blot法检测沉默ILK基因后细胞中p-Akt、Akt、p-GSK3β、GSK3α/β、Snail的表达.结果 与Tb和Tb vector组相比,Tb siILK组细胞中ILK蛋白的表达水平显著降低(P＜0.01);ILK、p-Akt、p-GSK3β在胞质中的荧光信号明显减弱；大部分细胞的上皮形态特征更为明显；细胞的迁移距离和侵袭细胞数显著减少(P＜0.05)；G2-M期和G0-G1期细胞比例均显著增加(P＜0.01)；细胞的增殖活力显著减低；ILK基因沉默后,细胞中p-Akt、p-GSK3β和Snail蛋白的表达水平显著降低(P＜0.05).3组细胞的凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 抑制ILK基因的表达可通过Akt/GSK3β/Snail途径显著抑制人舌鳞癌Tb细胞的生长、迁移和侵袭能力,ILK有望作为治疗人舌鳞癌的靶基因.
-
乳杆菌A-2代谢产物对人舌鳞癌CAL-27细胞增殖与凋亡的初步研究
目的:初步研究乳杆菌A-2代谢产物(LSPM1和LSPM2)对人舌鳞癌CAL-27细胞的增殖抑制及诱导细胞凋亡.方法:乳杆菌A-2通过降解制备相应的代谢产物LSPM1和LSPM2;采用MTT法检测不同浓度的LSPM1和LSPM2(1.875mg/mL、3.75mg/mL、7.5mg/mL、15mg/mL和30mg/mL)对CAL-27细胞的体外增殖抑制作用;荧光显微镜下观察CAL-27细胞形态变化;采用流式细胞仪和DNA琼脂凝胶电泳法检测细胞凋亡情况.结果:不同浓度的乳杆菌A-2代谢产物LSPM1和LSPM2可以抑制CAL-27细胞的增殖,呈现明显的浓度依赖性;LPSM1可明显诱导CAL-27细胞凋亡,呈时间依赖性.结论:乳杆菌A-2代谢产物可以在体外抑制人舌鳞癌CAL-27细胞生长增殖,并诱导CAL-27细胞凋亡.
-
植物乳杆菌代谢产物和Ca2+诱导人舌鳞癌CAL-27细胞凋亡的研究
目的:探讨植物乳酸杆菌发酵乳清蛋白获得的代谢产物以及Ca2+对人舌鳞癌CAL-27细胞生长抑制作用和诱导细胞凋亡作用.方法:植物乳杆菌23201经复原乳清菊糖培养基培养,制备相应的代谢产物1(LPM1).利用草酸钠溶液沉淀LPM1中的Ca2+获得不舍Ca2+的代谢产物(LPM1-F)；采用MTT法检测不同浓度的LPM1和LPM1-F对CAL-27细胞体外增殖的抑制作用；通过吖啶橙染色法观察凋亡细胞的形态学变化；采用Annexinv-FITC/PI双染试剂盒检测早期凋亡率.结果:不同浓度LPM1和LPM1-F分别作用CAL-27细胞24 h,大抑制率分别达到(48.81±4.96)％和(56.70±2.33)％；荧光显微镜下观察,凋亡细胞皱缩,凝聚呈新月形或马蹄形,贴壁不良；流式细胞仪结果显示:经LPM1和LPM1-F处理的CAL-27细胞早期凋亡率均高于对照组.结论:植物乳酸杆菌代谢产物体外抑制CAL-27细胞生长,呈剂量的依赖性,并且诱导细胞凋亡,其中Ca2+对人舌鳞癌CAL-27细胞生长和凋亡无影响.
-
bax嵌合基因克隆及其在人舌癌细胞的表达
目的:构建能在人舌癌细胞中高效表达Bax蛋白的bax嵌合基因.方法:将RT-PCR获得bax基因编码序列克隆至原核表达载体pGEX-5T,再将bax cDNA 插入人α1(Ⅰ)胶原基因顺式作用元件(CIP)与报告基因CAT之间,构成 pSV-CIP-bax-CAT嵌合基因;用阳离子脂质体DOSPER将此嵌合基因转染至人舌鳞癌细胞Tca8113;用免疫狭缝印迹和ELISA方法分析报告基因CAT和目的基因bax在细胞中的表达.结果: bax基因编码序列及嵌合基因限制性酶谱正确;CAT表达的ELISA检测证实,转染是成功的,且CIP在Tca8113细胞中有促进其下游基因表达的作用(为对照组的15倍);免疫狭缝印迹和ELISA证实,转染细胞能高效表达Bax蛋白(为对照组的8倍).结论:bax嵌合基因 pSV-CIP-bax-CAT能在人舌癌细胞中高效表达Bax蛋白,为进一步研究bax基因对舌癌细胞生长与凋亡的影响奠定了基础.
-
反义hTERT对人舌鳞癌细胞裸鼠移植成瘤的抑制作用
多种癌基因及抑癌基因的异常累积是口腔癌癌变过程的重要机制.已有研究表明,端粒酶逆转录酶(TERT)与癌的发生发展密切相关.本研究将经过hTERT反义寡核苷酸预处理后的Tca 8113细胞接种于裸鼠,观察处理后的Tca 8113细胞对裸鼠皮下移植瘤成瘤的抑制作用,初步探讨hTERT为靶点用于开展体内抗癌研究的可行性.
-
乳杆菌A2代谢产物对人舌鳞癌细胞系Cal-27凋亡的诱导
目的：观察乳杆菌A2代谢产物LM1和LM2对人口腔舌鳞癌细胞系Cal-27细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。方法：将乳杆菌A2经复原乳清培养基培养制备相应的代谢产物1（LM1），除去代谢产物中的钙离子得到产物2（LM2）；用MTT法和流式细胞仪检测口腔舌鳞状细胞癌的细胞凋亡的情况；琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 片段的变化。结果：乳杆菌A2代谢产物LM1和LM2作用Cal-27细胞48 h时，大抑制率分别为（39.9±1.56）%和（30.5±6.85）%；An-nexinv-FITC/PI染色法检测LM2（8 mg/mL）培养40、44 h时，细胞早期凋亡率分别为19.93%和21.42%；琼脂糖凝胶电泳LM2（8 mg/mL）培养54 h时，在250~750 bp之间显现出典型的“梯”状DNA条带。结论：LM1和LM2能抑制口腔舌鳞癌细胞Cal-27的增殖，呈剂量依赖性关系，LM2能够诱导细胞凋亡。
-
舌鳞癌细胞中肿瘤特异性MAG E-A3基因的克隆
目的 从人舌鳞癌细胞株Tca8113中扩增出编码MAGE-A3全长抗原蛋白的基因序列,并对其进行测序及鉴定.方法 采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从人舌鳞癌细胞株Tca8113中获取MAGE-A3蛋白编码基因,通过TA克隆后的酶切鉴定以及基因测序鉴定MAGE-A3的正确性.结果 (1)RT-PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果示,GeneRuler 100bp DNA Ladder的1031bp和900bp之间出现一条明显的目的 条带,大小与附加了酶切位点的MAGE-A3目的 片段大小相符.(2)双酶切可见大小约3000bp和1000bp的目的 条带;单酶切可见大小约4000bp的目的 条带,结果与预期相符.(3)经DNA SIS MAX分析软件比对分析,测序结果与Pubmed基因库中查询获得的人MAGE-A3序列一致,MAGE-A3提取成功.结论 MAGE-A3的成功提取为进一步研究MAGE-A3抗原蛋白的表达及表达产物诱导特异性抗肿瘤免疫应答提供了实验基础,为抗肿瘤疫苗的研究提供了实验依据.
关键词： 肿瘤特异性 黑色素瘤相关抗原编码基因3 人舌鳞癌细胞 -
牡蛎活性肽对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨牡蛎活性肽BPO G50-Ⅱ对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响.方法 不同浓度BPO G50-Ⅱ作用于体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞,作用24、48、72 h时计数拒染活细胞数,计算生长抑制率(IR)和IC50.采用光镜、电镜观察48 h后细胞形态及超微结构变化;荧光染色法观察BPO G50-Ⅱ作用后的凋亡情况.结果 BPO G50-Ⅱ作用后IR明显降低,呈剂量与时间依赖性;24、48、72 h的IC50分别为1.50、0.57、0.20 g/L;电镜观察细胞出现明显凋亡,荧光显微镜下见细胞出现凋亡改变.结论 牡蛎活性肽对人舌鳞癌细胞株Tca8113体外增殖具有抑制作用,可引起细胞形态学改变并能诱导其发生凋亡.
-
干扰PTP4A1表达对人舌鳞癌细胞CAL27的影响
目的:探讨PTP4A1基因干扰对人舌鳞癌CAL27细胞增殖、凋亡及体外迁移的影响.方法:采用PTP4A1干扰慢病毒转染人舌鳞癌CAL27细胞,实时定量PCR和Western blotting验证PTP4A1干扰效果,分别采用MTT法、划痕试验检测细胞增殖、迁移情况,流式细胞术分析细胞凋亡,Western blotting分析caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达.结果:PTP4A1干扰慢病毒转染后,干扰组中CAL27细胞PTP4A1基因mRNA和蛋白表达均明显减少.与对照组比较,PTP4A1干扰后,细胞增殖、体外迁移能力均显著减弱(P<0.05);PTP4A1干扰后CAL27细胞凋亡率相比对照组显著增大(P<0.05),PTP4A1干扰促进CAL27细胞凋亡与上调caspase-3、Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达水平有关.结论:PTP4A1基因干扰可抑制人舌鳞癌CAL27细胞增殖活性和体外迁移能力,且促进舌鳞癌细胞凋亡.
-
激光共焦显微拉曼光谱技术在人舌鳞癌细胞检测中的应用
目的:采用激光共焦显微拉曼光谱技术对人舌鳞癌细胞CAL-27进行检测,并将其与正常人体口腔黏膜上皮细胞(NHOK)进行对比和分析,从而从分子层面区分CAL-27和NHOK.方法:培养CAL-27和NHOK,并用激光共焦显微拉曼光谱对其进行检测,以及采用主成分分析法和线性判别技术对其进行分析.结果:对比CAL-27和NHOK光谱差谱,发现谱宽于735、959、1 334、1 575 cm-1处,CAL-27的峰值比NHOK强,但在1 033 cm-1处,则相对要弱.结合主成分分析和线性判别技术的灵敏度为96.8％,特异性为90.3％,诊断率为93.5％.受试者操作特性曲线下面积为0.971.结论:采用激光共焦显微拉曼技术可区分CAL-27和NHOK.
-
沉默整合素连接激酶基因对TCA8113舌癌细胞移植瘤生长的影响
目的 研究沉默TCA8113舌癌细胞整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因的表达,对其下游底物Akt和GSK3β磷酸化状态及对移植瘤生长和自发性转移的影响.方法 通过Lipofectamine 2000介导将特异性siILK表达载体和无同源性的对照载体,稳定转染人舌鳞癌TCA8113细胞,分为TCA8113组、TCA8113 vector组和TCA8113 siILK组,将3组细胞分别注入裸鼠皮下构建移植瘤模型,5周后检测瘤质量,对裸鼠肺及瘤组织形态学行常规病理学检查,使用免疫荧光技术检测体外和体内癌细胞p-Akt和p-GSK3β等的表达,并观察瘤组织内血管生成情况.结果 TCA8113组、TCA8113 vector组肺组织均发生自发性转移瘤,TCA8113 siILK组肺组织未发现自发性转移瘤;TCA8113 siILK组移植瘤细胞形态较其他2组体积减小,核分裂象较少,核浆比例缩小;TCA8113 siILK组在体内和体外实验中的p-Akt和p-GSK3β表达较其他2组均明显下降(P＜0.05);TCA8113 siILK组移植瘤质量较其他2组显著降低(P＜0.05),抑瘤率分别为84％和92％;TCA8113 siILK组移植瘤血管生成较其他2组也明显减少(P＜0.05).结论 沉默TCA8113舌癌细胞ILK表达可抑制其下游信号传导分子Akt和GSK3β的磷酸化,并抑制移植瘤血管生成,从而抑制移植瘤的生长.
-
沉默整合素连接激酶基因抑制TCA8113舌癌细胞生长和侵袭
目的 研究沉默整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因表达,对人舌鳞癌细胞生长、侵袭和转移能力的影响.方法 通过用ILK mRNA的特异性siRNA表达载体和无同源性的对照载体,在脂质体介导下稳定转染人舌鳞癌TCA8113细胞,分为TCA8113组、TCA8113 vector组和TCA8113 siILK组,通过筛选鉴定后,用MTT法、划痕试验和Transwell法分别检测细胞生长、迁移和侵袭能力,用Western blot分析细胞中ILK、p-Akt、p-GSK3β及Snail等的表达.结果 沉默ILK基因表达显著抑制了细胞的生长、迁移和侵袭能力,接种的第48、72、96、120小时,TCA8113 siILK组的抑制率分别为17％、29％、25％、42％,迁移能力较TCA8113组和TCA8113 vector组分别下降67％和66％,侵袭能力则较两个对照组下降了67％和68％,p-Akt、p-GSK3β及Snail的表达较TCA8113组和TCA8113 vector组分别降低了45％和53％,57％和61％,74％和73％.结论 抑制ILK基因的表达可通过Akt/GSK3β/Snail途径,显著抑制人舌鳞癌TCA8113细胞的生长、迁移和侵袭潜能,可作为治疗人舌鳞癌的靶蛋白.
-
重离子束与X射线辐照对人舌鳞癌细胞周期影响的比较
[目的]研究重离子和X射线辐照对人舌鳞癌Tb细胞周期影响的规律.[方法]采用X射线和离子束分别辐照人舌鳞癌Tb细胞,X射线照射剂量为0、2、4、6、8 Gy;重离子照射剂量为0、0.5、1、2.0、4.0Gy.PI荧光探针标记,流式细胞仪检测不同剂量组受照后在6 h、12 h、24 h的细胞周期变化.[结果]人舌鳞癌Tb细胞在X射线照射后,2.0Gv组激活G1期检测点,而4.0、6.0、8.0Gy组激活G2期检测点.重离子照射后,Tb细胞G2/M期阻滞明显增加,阻滞程度具有剂量和时间依赖性,并且0.5、1 Gy组细胞在12～24 h时间点出现"崩溃"现象,细胞阻滞解除:2Gy和4Gy组细胞表现为明显的G2/M阻滞,未出现"崩溃"现象.在2Gy辐照时对细胞G2期阻滞率达到70%,相当于6Gy X射线辐照.[结论]重离子和X射线对人舌鳞癌细胞周期影响不同,小剂量重离子束具有较高的生物学效应.
-
雌激素受体在人舌癌细胞系中的表达
目的:测定雌激素受体(ER)在人舌癌细胞系Tca8113以及高转移株Tb上的表达.方法:用免疫细胞化学方法和RT-PCR方法检测雌激素受体在人舌癌细胞上的表达,并对其表达量进行相对定量分析.结果:经免疫细胞化学和RT-PCR方法可检测到ER在人舌癌细胞上有表达.ERα在Tb细胞系的表达强于Tca8113;而ERβ的表达在Tca8113和Tb中相同,并且ERα/ERβ比值在脑转移株Tb中升高.结论:雌激素有可能通过它的受体对人舌鳞癌细胞产生一定的影响.ERα/ERβ比值的改变在舌癌发生和转移过程中可能起一定作用.
-
乳杆菌代谢产物诱导人舌鳞癌细胞的凋亡作用
目的:考察植物乳杆菌代谢产物对人舌鳞癌细胞系CAL-27细胞增殖的抑制作用和诱导细胞凋亡的作用.方法:植物乳杆菌23201分别经复原乳清培养基和复原乳清菊糖培养基培养,制备相应的代谢产物l (LPMl)和代谢产物2(LPM2)；用MTr法检测细胞增殖抑制作用；通过吖啶橙染色法检测凋亡细胞的形态学变化；采用琼脂糖凝胶电泳法检测细胞DNA片段.结果:不同浓度LPM1和LPM2分别作用CAL-27细胞24h,大抑制率分别达到(44.2±3.3)％和(41±4.1)％；荧光显微镜下观察,凋亡细胞的细胞核不规则,凝聚呈新月形或马蹄形；琼脂糖凝胶电泳显示出典型的“梯”状DNA条带.结论:植物乳杆菌代谢产物可以抑制CAL-27细胞的增殖,呈剂量依赖性关系,并诱导CAL-27细胞凋亡.
