首页 > 文献资料
-
siRNA干扰14-3-3ζ基因可体外促进人胃癌SGC-7901细胞凋亡
目的 探讨siRNA干扰14-3-3ζ基因对人胃腺癌细胞系SGC-7901增殖凋亡的影响及其作用机制.方法 利用siRNA干扰技术降低14-3-3ζ基因的正常表达的SGC-7901细胞为实验组,siRNA-control的对照组和未加处理的空白组.用实时荧光定量PCR和Western blot检测14-3-3ζ基因mRNA的表达水平和蛋白表达水平;CCK8实验检测各组SGC-7901细胞的增殖;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot检测周期和凋亡相关蛋白P53、cyclinD1、PUMA、Bax和Bcl-2.结果 siRNA干扰组14-3-3ζ基因的mRNA和蛋白表达水平低于空白组和对照组(P ＜0.05);CCK8检测细胞增殖较对照组显著降低(P＜0.05);siRNA干扰组细胞周期G0/G1的比率较对照组高,而G2/M和S期则显著降低(P＜0.05);siRNA干扰组的细胞凋亡率也显著升高(P＜0.05);相关通路蛋白在siRNA干扰组中cyclin D1和Bcl-2表达降低,P53、PUMA、Bax蛋白表达增高(P＜0.05).结论 siRNA干扰14-3-3ζ可以通过P53通路,下调cyclin D1抑制SGC-7901细胞增殖并阻滞周期,上调PUMA、Bax蛋白和下调Bcl-2蛋白促进细胞凋亡.
-
14-3-3 ζ与β连接素在人T1期非小细胞肺癌中的表达及意义
目的 观察14-3-3 ζ 和β连接素(β-catenin)在人T1期非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,探讨两者与非小细胞肺癌发展、侵袭和转移的关系. 方法 采用免疫组织化学、免疫荧光双标、激光扫描共焦显微技术和Western blotting,检测 NSCLC 及正常肺组织中14-3-3ζ 和β-catenin 蛋白的表达. 结果 与正常肺组织相比,14-3-3ζ 在NSCLC 中的表达显著增强,且表达与肺癌的分化程度和淋巴结转移有关,而与病理学分型无关.β-catenin 在NSCLC中的表达与正常肺组织相比减弱,且其表达与肺癌的分化程度呈正相关,与淋巴结转移呈负相关,而与肺癌病理学分型无关. 结论 14-3-3ζ 和β-catenin与T1期NSCLC发展、侵袭和转移密切相关.14-3-3ζ 高表达可能促进了NSCLC的发展与转移,因此14-3-3ζ可以作为非小细胞肺癌又一个有效的治疗靶点.
-
T1期非小细胞肺癌中14-3-3ζ与上皮型钙黏素的表达及临床意义
目的 观察14-3-3ζ和上皮型钙黏素(E-cadherin)在T1 期非小细胞肺癌 (NSCLC) 中的表达,探讨两者与NSCLC发展、侵袭和转移的关系. 方法 采用免疫组织化学和免疫印迹法(Western blotting)检测110例NSCLC及正常肺组织中14-3-3ζ和E-cadherin 蛋白的表达.结果 与正常肺组织相比,14-3-3ζ 在NSCLC 中的表达显著增强,且表达与肺癌的分化程度和淋巴结转移显著相关,并与患者的性别、年龄和病理学分型无关.与正常肺组织相比,E-cadherin 在NSCLC中的表达减弱,且其表达也与肺癌的分化程度和淋巴结转移明显相关,而与性别、年龄和肺癌病理学分型无关. 结论 14-3-3ζ 高表达可能促进了NSCLC的发展与转移,14-3-3ζ和E-cadherin 与T1期NSCLC发展、侵袭和转移密切相关.
-
肺鳞癌患者血浆外泌体中蛋白标志物的诊断价值
目的 研究肺鳞癌患者治疗前血浆中外泌体所携带的肿瘤相关蛋白的表达特征,并分析其作为临床诊断标志物的价值.方法 使用超速离心法收集2例肺鳞癌患者治疗前血浆和2例正常对照血浆中的外泌体,采用蛋白质组学方法分析外泌体的蛋白表达谱,挑选候选分子,采用酶联免疫吸附法在15例肺鳞癌患者和15例正常对照者血浆外泌体中进行验证.结果 经过电镜和纳米颗粒追踪技术收集到高质量的外泌体,计数结果显示,2例肺鳞癌患者标本分布于45～135 nm的颗粒数目分别为7.89×1011个/ml和9.71×1011个/ml,明显高于2例正常对照者(分别为2.76×1011个/ml和1.41×1011个/ml).蛋白质组学分析显示,肺鳞癌患者外泌体中携带的蛋白信息与正常人有差异,部分蛋白与肺鳞癌发生发展中的重要功能相关.挑选外泌体中14-3-3ζ作为进一步验证的标志物,得到受试者工作特征曲线下面积为0.68,灵敏度为60.0％,特异度为80.0％,提示其可作为肺鳞癌的诊断标志物.结论 肺鳞癌患者血浆中的外泌体计数及其携带与肿瘤发生、发展密切相关的蛋白14-3-3ζ,可用于肺鳞癌的辅助诊断.
-
信号蛋白质14-3-3ζ的高效融合表达和鉴定
目的利用分子克隆技术在原核细胞中研究14-3-3ζ蛋白的表达. 方法 14-3-3ζ cDNA 经测序后,亚克隆至pBK-CMV表达载体,转化大肠杆菌BL21菌株,筛选阳性克隆,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达. 结果经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blot)分析,表达的融合蛋白相对分子质量为32 000左右,能与14-3-3ζ蛋白特异性多克隆抗体发生免疫结合反应. 结论人14-3-3ζ蛋白在原核细胞中有大量表达,且具有良好的免疫反应性.
-
14-3-3ζ抑制肺癌细胞转移的实验研究
目的:探讨14-3-3ζ与肺癌转移的关系.方法:以人肺巨细胞癌高低转移细胞株为模型,Western印迹验证14-3-3ζ在高低转移株中的差异表达;随后采用细胞转染技术将14-3-3ζ基因导入人肺巨细胞癌高低转移株,通过研究转染后细胞增殖能力、黏附能力以及迁移能力的变化,探讨14-3-3ζ与肿瘤转移的相关性.结果: Western印迹检测发现14-3-3ζ在低转移株PLA-801C中的表达水平显著高于高转移株PLA-801D,在此基础上,构建成功正反义表达载体并转染细胞,转染正义载体后细胞的增殖减慢,黏附能力提高,体外迁移能力下降;而转染反义载体后细胞的增殖加快,体外迁移能力提高.结论: 14-3-3ζ可能抑制肺癌细胞的转移.
-
免疫组化检测14-3-3ζ在临床肺癌中的表达
目的:探讨14-3-3ζ与肺癌转移的关系.方法:以免疫组织化学染色检测14-3-3ζ在临床肺癌标本原发灶与转移灶的表达情况,探讨14-3-3ζ与肿瘤转移的相关性.结果:在所有的肿瘤标本中均检测到14-3-3ζ的表达,其中15例标本原发灶14-3-3ζ的表达水平高于转移灶.结论:14-3-3ζ与肺癌转移具有一定的相关性.
-
利用RNA干扰技术研究14-3-3ζ对肺癌细胞转移的抑制作用
目的:探讨14-3-3ζ对肺癌细胞转移的抑制作用.方法:以人肺巨细胞癌低转移细胞株为模型,利用RNAi技术研究14-3-3ζ被干涉后肿瘤细胞恶性表型的变化,探讨14-3-3ζ与肿瘤转移的相关性.结果:本研究发现14-3-3ζ被干涉后细胞的集落形成能力明显提高,黏附能力明显降低,细胞迁移、侵袭能力明显提高.结论:14-3-3ζ可能抑制肺癌细胞的转移.
-
14-3-3ζ与细胞凋亡
细胞凋亡的调控是一个复杂的过程,14-3-3ζ作为凋亡抑制蛋白,近年来对其研究不断深入.本文介绍了14-3-3ζ的结构特点以及抑制细胞凋亡的机制,同时简要介绍了该蛋白的配体类型及其拮抗剂的应用.
-
14-3-3ζ和p-Akt在食管鳞癌中的表达及意义
目的：探讨14-3-3ζ和p-Akt蛋白异常表达与食管癌之间的关系。方法应用免疫组织化学技术检测50例食管鳞癌组织及癌旁组织中14-3-3ζ和p-Akt蛋白的表达。结果14-3-3ζ和p-Akt蛋白在食管鳞癌中阳性表达率均大于癌旁正常食管组织；且与组织分化程度和淋巴结转移密切相关，而与患者的年龄和肿瘤浸润深度无相关性。经Spearman相关性分析，食管鳞癌中14-3-3ζ与p-Akt阳性表达呈显著相关。结论14-3-3ζ和p-Akt参与了食管癌的发生和发展过程。
-
SET核运输障碍机制研究
目的:探讨14-3-3ζ与CKⅡ介导SET滞留胞浆的分子机制,进一步阐明阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)发病机制.结果:AAV8/14-3-3ζ病毒感染C57小鼠脑片观察到SET、14-3-3ζ及CKⅡα三者间可相互共定位.在HEK293/tau细胞株中,免疫共沉淀结果显示SET、14-3-3ζ及CKⅡα三者间相互结合.CKⅡ抑制剂TBB处理致SET Ser-9磷酸化程度显著降低;给予si14-3-3ζ处理后发现,敲减14-3-3ζ可导致SET Ser-9磷酸化程度降低.说明CKⅡα通过14-3-3ζ的募集促进对SET的磷酸化修饰.TBB处理可很好的恢复由于14-3-3ζ引起的PP2A活性降低.过表达CKⅡα的AAV8病毒感染C57小鼠,同时分别用处理AAV8-si 14-3-3ζ,AAV8-Ssi处理,条件恐惧、水迷宫实验实验发现si 14-3-3ζ处理可恢复小鼠学习和记忆能力.激光共聚集荧光显微镜下可观察到过表达CKⅡα可促进SET滞留于胞浆,而si 14-3-3ζ可恢复SET的核输入.体外原代培养大鼠胚胎海马神经元发现过表达CKⅡα可导致神经元树突长度缩短,分支减少,树突棘密度减少等变化;免疫印迹实验检测发现突触前蛋白减少,NR2A和NR2B比值变大,SET Ser-9显著磷酸化,si 14-3-3ζ处理可以有效恢复上述变化.结论:14-3-3ζ可同时结合CKⅡα与SET,并促进CKⅡα对SET Ser-9的磷酸化,进一步导致SET滞留胞浆,引起PP2A活性抑制、神经元树突损伤、学习和记忆的损伤.si 14-3-3ζ显著减少CKⅡα与SET的结合,引起CKⅡα磷酸化SET Ser-9程度降低,从而恢复PP2A活性、神经元树突损伤、学习和记忆的损伤.
-
阿尔茨海默病中Tau蛋白与相关分子作用的探究
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是一种致死性神经退行性脑病，细胞外间隙β淀粉样蛋白（Aβ）沉积形成的老年斑以及细胞内过度磷酸化Tau蛋白聚集形成的神经原纤维缠结（NFTs）是其主要特征性病变。Tau蛋白的异常与阿尔茨海默病的神经变性和记忆认知减退密切相关。而Tau蛋白与相关分子的相互作用进一步促进了阿尔茨海默病的发生发展。本文综述了Tau蛋白与Aβ、14-3-3ζ、p62在阿尔茨海默病中的相互联系和作用。
-
CIK细胞对LLC小鼠肺癌细胞株诱导凋亡的影响
目的 探讨干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-2及CD3抗体诱导细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对LLC小鼠肺癌细胞株存活率和凋亡相关因子14-3-3ζ及p-Bad蛋白表达的影响.方法 常规CIK细胞的体外培养方法培养CIK细胞为效应细胞,LLC小鼠肺癌细胞株为靶细胞,通过复合培养体系(Transwell培养板)将CIK细胞与LLC小鼠肺癌细胞株建立共培养体系.根据培养时间不同分3组(10、15、20 d)运用四甲基唑蓝(MTT)比色法检测LLC小鼠肺癌细胞的存活率.Western印迹检测CIK细胞14-3-3ζ、p-Bad蛋白表达变化.结果 光镜下观察发现,成功地诱导出CIK细胞.培养20 d时LLC肺癌细胞的存活率明显低于10 d组和15 d组(P<0.01).Western印迹检测LLC小鼠肺癌细胞中14-3-3ζ、p-Bad的表达均有下调.结论 随着培养时间的延长CIK细胞对LLC小鼠肺癌细胞的存活率逐渐降低并能促进LLC小鼠肺癌细胞的凋亡.
关键词： CIK细胞 LLC小鼠肺癌细胞株 14-3-3ζ p-Bad -
14-3-3ζ与恶性肿瘤关系的研究进展
14-3-3蛋白家族是一个高度保守的酸性多肽家族,参与细胞内信号传导、蛋白转运、细胞增殖、侵袭迁移和凋亡.研究证明,14-3-3ζ在许多恶性肿瘤中均有较高水平的表达.本文介绍了14-3-3ζ的结构、生物学功能与恶性肿瘤(乳腺癌、肺癌、肝癌、胶质细胞瘤、头颈肿瘤等)发生发展的相关研究进展,为14-3-3ζ与恶性肿瘤的治疗提供有价值的信息和思路.
-
高尔基体基质蛋白130、14-3-3ζ和整合素β3在卵巢上皮恶性肿瘤组织中的表达及其临床意义
目的:探讨高尔基体基质蛋白130 (Golgi matrix protein 130,GM130)、14-3-3ζ和整合素β3在卵巢上皮恶性肿瘤组织中的表达及其临床意义.方法:应用免疫组织化学法检测49例卵巢上皮恶性肿瘤、30例卵巢上皮良性肿瘤和23例正常卵巢上皮组织中GM130、14-3-3ζ和整合素β3的表达,RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测卵巢上皮恶性肿瘤、卵巢上皮良性肿瘤和正常卵巢上皮组织中GM130、14-3-3ζ和整合素β3 mRNA及蛋白的表达.结果:GM130、14-3-3ζ和整合素β3在卵巢上皮恶性肿瘤组织中的阳性表达率明显高于卵巢上皮良性肿瘤和正常卵巢上皮组织,差异有统计学意义(P＜0.05).卵巢上皮恶性肿瘤组织中GM130与14-3-3ζ的表达、14-3-3ζ与整合素β3的表达和GM130与整合素β3的表达均呈正相关(r=0.517,P＜0.05;r=0.415,P＜0.05;r=0.384,P＜0.05).GM130、14-3-3ζ和整合素β3的表达与卵巢上皮恶性肿瘤患者的临床分期和组织分化程度有关(P＜0.05),与年龄、肿瘤大小和病理类型无关(P＞0.05).卵巢上皮恶性肿瘤组织中GM130、14-3-3ζ和整合素β3 mRNA及蛋白的表达水平明显高于卵巢上皮良性肿瘤和正常卵巢上皮组织(P＜0.05).结论:GM130、14-3-3ζ和整合素B3在卵巢上皮恶性肿瘤中的高表达可能在其恶性进程中发挥重要作用,GM130有望成为判断卵巢癌患者预后的指标及治疗靶点.
关键词： 卵巢肿瘤 基因表达 整合素β3 高尔基体基质蛋白130 14-3-3ζ -
肺癌组织中14-3-3ζ的表达与上皮细胞间质转化的相关性研究
目的 探讨14-3-3ζ在肺癌组织的表达及其与上皮细胞间质转化的关系.方法 采用免疫组织化学技术检测60份肺癌组织和35份正常肺组织14-3-3ζ、c-raf、上皮性钙黏附素(E-cad)、波形蛋白(vimentin)的表达,分析14-3-3ζ与肺癌临床病理特征之间以及四种蛋白之间的相关性.结果 与正常肺组织比较,肺癌组织中14-3-3ζ、c-raf、vimentin的表达明显升高,E-cad明显降低(P均＜0.01)；14-3-3ζ、E-cad、vimentin在肺癌组织的异常表达与淋巴结转移、分化程度相关(P＜0.01)；14-3-3ζ、c-raf在肺癌组织中的表达与上皮细胞间质转化成正相关(P均＜0.01)；肺癌组织中14-3-3ζ的表达与c-raf成正相关(P＜0.01).结论 14-3-3ζ可能参与了上皮细胞间质转化的过程,是其重要标志物,在肺癌淋巴结转移中起重要作用.
-
人类14-3-3ζ和GCH1蛋白相互作用的初步研究
目的 寻找人类14-3-3ζ蛋白的相互作用蛋白,为进一步揭示14-3-3ζ的作用机理提供线索.方法 以14-3-3ζ为"诱饵",利用酵母双杂交系统筛选人脑cDNA文库得到"猎物"蛋白,通过GST pulldown技术和哺乳动物细胞内免疫共沉淀技术验证14-3-3ζ和"猎物"蛋白的特异性结合.结果 首次利用酵母双杂交cDNA文库筛选技术发现了14-3-3ζ能够与GTP环化水解酶Ⅰ(GTP cyclohydrolase 1,GCH1)相互作用,并通过了体内和体外的蛋白质结合实验证实了这两个蛋白质之间的特异性相互作用.结论 发现并验证了14-3-3ζ与GCH1之间的蛋白质相互作用,为进一步深入研究这两种蛋白质的功能及所引起的相关疾病的发病机理提供了新的线索.
-
14-3-3ζ协同非典型蛋白激酶C-ι经上皮-间充质转化促进胆管癌侵袭转移
目的 探讨14-3-3ζ协同非典型蛋白激酶C-ι(aPKC-ι)促进胆管癌侵袭转移的机制.方法 应用免疫组织化学、Western blot和实时定量聚合酶链反应检测14-3-3ζ和aPKC-ι在64例胆管癌组织中的表达,Kaplan-Meier和COX多因素回归分析胆管癌预后影响因素.转化生长因子-β1(TGF-β1)构建胆管癌细胞上皮-间充质转化(EMT)模型,干扰14-3-3ζ或aPKC-ι的表达,检测EMT标志物的变化.抑制14-3-3ζ表达后,Transwell侵袭试验、划痕试验、克隆平板试验检测胆管癌细胞侵袭转移能力.结果 14-3-3ζ和aPKC-ι在癌组织中均呈高表达(56.25％,36/64;51.56％,33/64),呈正相关(r=0.406,P=0.001).两者低表达组的总体生存率显著高于过表达组(14-3-3ζ:x2=10.140,P=0.001;aPKC-ι:x2=12.575,P=0.000).14-3-3ζ和aPKC-ι均是胆管癌预后的独立影响因素.干扰两者的表达抑制细胞EMT相关标志物改变,胆管癌细胞侵袭、增殖和转移能力均受到抑制.结论 14-3-3ζ与aPKC-ι结合,协同促进胆管癌EMT及侵袭转移.
关键词： 14-3-3ζ 非典型蛋白激酶C-iota 胆管癌 上皮-间充质转化 侵袭转移 -
14-3-3家族在HBV复制的肝癌细胞中的表达研究
目的:研究14-3-3家族在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的肝癌细胞中的表达.方法:运用qRT-PCR和Western blot分析14-3-3家族在HBV复制细胞系中的表达水平;qRT-PCR、Western blot检测HBV复制在HepG2细胞中对14-3-3ζ表达的影响;Western blot检测HBV复制在小鼠肝组织中对14-3-3ζ表达的影响.结果:在HepG2.2.15中,14-3-3 η、γ、ζmRNA和蛋白的表达水平较HepG2对照组明显增加(mRNA:t=16.5、27.86、17.23,P=0.000、0.000、0.000;蛋白:t=35.7、16.97、22.51,P=0.000、0.000、0.000);在HepAD38(Tet-)中只有14-3-3ζmRNA和蛋白的表达水平较HepAD38 (Tet+)对照组明显增加(mRNA:t=14.27,P=0.000;蛋白:t=12.11,P=0.000);HBV复制能使HepG2中14-3-3ζmRNA和蛋白的表达显著升高(mRNA:F=98.8,P=0.000;蛋白:F=118.3,P=0.000);HBV复制能使小鼠肝组织中14-3-3ζ蛋白的表达显著升高(F=109.4,P=0.000).结论:HBV可以促进肝癌细胞内14-3-3 η、γ、ζ的表达,这一发现为控制HBV感染的治疗策略提供新的靶点.
-
14-3-3ζ、S100A8在膀胱癌中的表达及与膀胱癌侵袭和迁移的关系
目的:观察膀胱癌组织中14-3-3ζ、S100A8的表达变化,分析其与膀胱癌侵袭和迁移关系,并探讨其临床意义.方法:免疫组织化学法检测90例膀胱癌组织及癌旁组织中14-3-3ζ、S100A8的表达.图像分析技术分析两个指标在膀胱癌中的阳性表达率,并分析其与临床分期、病理分级的关系.结果:膀胱癌组织中14-3-3ζ、S100A8的阳性表达率为65.56%、54.44%,癌旁正常组织中分别为10%、0%,与癌旁正常组织相比,癌组织中的阳性表达率差异均有统计学意义(P<0.05).14-3-3ζ、S100A8的表达均与膀胱癌的分化程度、临床分期、淋巴结迁移、复发性等有关(P<0.05).结论:14-3-3ζ、S100A8在膀胱癌组织中异常表达与膀胱癌的侵袭和迁移有高度相关性.14-3-3ζ、S100A8检测可以有效应用于膀胱癌的检测、预后判断.
