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结直肠癌组织中端粒酶和pRb表达及其临床意义
目的:观察端粒酶和视网膜母细胞瘤基因蛋白(pRb)在结直肠癌中的表达,并探讨它们之间的相关性.方法:应用免疫组化法检测48例结直肠癌组织中端粒酶和pRb的表达,并用统计学方法分析表达结果与结直肠癌临床病理因素间的关系.结果:结直肠癌中端粒酶和pRb的阳性表达率分别为87.5%和56.3%,且与结直肠癌区域淋巴结转移和临床分期关系密切(P＜0.05),端粒酶表达还与组织病理学分级密切相关(P＜0.05).结论:检测结直肠癌组织中端粒酶和pRb的表达有助于结直肠癌患者的预后评估,结直肠癌组织中端粒酶与pRb表达呈显著负相关关系,两者可能从不同方面共同促进结直肠癌的发生.
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蟾蜍灵对胃癌组织MGC-803细胞周期作用机制的研究
目的:探讨蟾蜍灵对胃癌MGC-803细胞周期及周期蛋白的影响.方法:采用台盼蓝拒染法测定细胞增殖活力;瑞士-姬姆萨染色观察细胞形态学的变化;流式细胞仪检测细胞周期;免疫组织化学方法检测细胞周期相关蛋白p16、p21、pRb的表达.结果:1)蟾蜍灵抑制胃癌MGC-803细胞的增殖,24、48、72 h的IC50分别为0.086、0.048和0.036μmol/L.2)蟾蜍灵在0.01～0.1umol/L时作用24～72 h,形态学上可见细胞体积增大,出现双核、多核细胞.3)流式细胞仪显示蟾蜍灵浓度为0.01～0.1μmol/L时可明显诱导细胞周期G2/M期阻滞.4)蟾蜍灵作用于胃癌MGC-803细胞,观察到p16、p21、pRb蛋白的表达明显上调.结论:蟾蜍灵引起胃癌MGC-803细胞的周期阻滞可能与p16、p21、pRb蛋白的上调有关.
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鱼藤素对淋巴瘤Daudi细胞株细胞增殖细胞凋亡的影响及其机制
目的 观察鱼藤素对人Burkitt淋巴瘤Daudi细胞株细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响,并探讨其分子机制.方法 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,Hoechst 33258染色和Annexin-V/PI双标法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期分布,Western blot检测细胞内cyclinD1和pRb的蛋白表达.结果 鱼藤素对Daudi细胞具有明显的增殖抑制作用,而对正常人外周血单个核细胞(PBMC)抑制作用不明显.鱼藤素可以诱导Daudi细胞凋亡,Hoechst 33258染色可见典型凋亡小体.Annexin V/PI双标法显示,鱼藤素诱导细胞发生早期凋亡,并呈剂量依赖性,20、40、80 nmol/L鱼藤素作用24h时,凋亡率分别为15.46%±0.62%、18.48%±2.98%和31.42%±1.43%.鱼藤素作用Daudi细胞后,主要使细胞周期聚积于G0/G1期,G0/G1期细胞比例随鱼藤素剂量增大而逐渐增高,40nmol/L鱼藤素作用24 h达56.56%;相反,S期细胞比例随鱼藤素剂量增大而逐渐降低,对G2/M期细胞作用不明显.鱼藤素使cyclin D1及pRb蛋白表达降低,呈剂量依赖关系.结论 鱼藤素抑制Daudi细胞增殖,使细胞阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡.其抗肿瘤机制可能与下调cyclin D1和pRb蛋白表达有关.
关键词： 鱼藤素 Burkitt淋巴瘤 Cyclin D1 pRb 细胞凋亡 -
p53 p16 pRb的表达与尖锐湿疣癌变的关系
目的 通过观察外阴尖锐湿疣和外生殖器鳞状细胞癌人乳头瘤病毒(HPV)16/18型的感染情况,以及抑癌基因或癌蛋白53(p53)、细胞周期蛋白酶抑制物(p16)基因、视网膜母细胞瘤(pRb)蛋白的表达情况,进一步分析外阴尖锐湿疣和鳞状细胞癌之间的关系.方法 取外阴尖锐湿疣50例,外生殖器鳞状细胞癌20例,全部标本用HPV16/18基因探针行分子原位杂交,免疫组织化学染色,并测定p53、p16、pRb的阳性指数和平均吸光度.结果 (1)HPV16/18阳性组的p16、pRb表达率与鳞癌组差异无统计学意义(P>0.05);(2)HPV16/18阳性组p53、p16、pRb的阳性指数、吸光度,与HPV16/18阴性组和鳞癌组的差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 HPV16/18型感染与癌变有关,检测p53、p16、pRb的表达有助于预测癌变风险.
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关键词：
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pRB 、E2F1 在肺神经内分泌肿瘤中的表达及其临床意义
目的 探索pRB和E2F1 mRNA在细胞周期中的作用及人肺神经内分泌肿瘤的发生机制；以及与肿瘤侵袭性和预后的相关性。方法 分别采用免疫组化和分子原位杂交技术对78例人肺神经内分泌肿瘤的石蜡切片标本中的pRB和E2F1mRNA表达进行检测，通过统计学方法研究其表达与肿瘤分期、淋巴结转移及预后的相互关系。结果 pRB在典型类癌和非典型类癌中的阳性表达率为87.5%(14/16)，而在大细胞神经内分泌癌和小细胞肺癌中则不表达(P<0.001)；E2F1 mRNA在人肺神经内分泌肿瘤中的阳性表达率为87.2%（68/78），二者的表达强度及相互关系与肿瘤的恶性程度、淋巴结转移及预后相关（P<0.05）。结论 pRB丢失是人肺神经内分泌肿瘤发生恶性变的关键。E2F1过度表达是人肺神经内分泌肿瘤发生的一个重要因素。
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肺癌中p16及pRB与cyclinD1和PCNA基因蛋白的表达及预后意义的评估
目的:研究抑癌基因蛋白p16、pRB、细胞周期素D1(cyclinD1)及PCNA在肺癌中的表达及与预后的关系.方法:应用免疫组织化学方法检测p16、pRB、cyclinD1及PCNA的表达,结果由COX回归模型与Kaplan-Meier单因素分析处理.结果:1)65例肺癌标本均示PCNA阳性,但表达程度不同,非小细胞肺癌(NSCLC)＞小细胞肺癌(SCLC),P＜0.05.PCNA高表达与p16-、pRB+、PT状况、远处转移呈正相关.增殖指数(PI)Ⅰ～Ⅱ级的生存时间≥24个月为81.82%,Ⅲ～Ⅳ级为18.18%,P＜0.01.2)p16阳性率为50.77%,p16的表达与腺癌分化程度有关,高分化＞中分化＞低分化,P＜0.01,与鳞癌分化无关.p16+与p16-患者生存期≥24个月的比率分别为72.73%和27.27%,P＜0.05.pRB阳性表达率为58.46%,鳞癌、腺癌较高,SCLC较低,与生存期无关.cyclinD1阳性表达率为60.00%,其中磷癌72.41%,腺癌58.33%,SCLC 25.00%,P=0.05.3)p16-/pRB+细胞增殖活性较强,生存期较短;cyclinD1+/p16-/pRB+生存期较短,增殖活性较强.结论:PCNA及p16分别是肺癌进展及预后判断的独立指标;PCNA、p16、pRB、cyclinD1联合检测对肺癌的预后评估更有价值和更客观;小细胞肺癌pRB表达的缺失具有鉴别诊断意义.
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乳腺癌组织中Survivin和RB蛋白的表达及其临床意义
目的:探讨凋亡抑制蛋白基因(Survivin) 和视网膜母细胞瘤基因(RB)在乳腺癌组织中的表达及其与淋巴结转移、肿瘤分期等临床指标的关系.方法:用免疫组织化学SP法检测60例乳腺癌组织中Survivin和pRB(视网膜母细胞瘤基因蛋白)的表达,分析其与淋巴结转移、肿瘤分期等临床指标之间的关系.结果:Sunivin蛋白在乳腺癌中阳性表达率为43.3%(26/60),与淋巴结转移呈低度正相关(r=0.284,P=0.028),与分化程度呈负相关(r=-0.312,P=0.015);pRB阳性表达率为65%(39/60),与淋巴结转移呈低度负相关(r=-0.301,P=0.019),与分化程度呈正相关(r=0.282,P=0.029).Survivin和pRB表达与肿瘤病理类型、分期、发病年龄无明显相关性(P＞0.05).结论:pRB、Survivin表达异常可能在乳腺癌的发生、发展中具有重要作用,二者在乳腺癌的发生、发展中可能具有相互作用.pRB、Survivin表达异常对乳腺良性病变的恶性转化可能有一定的预见性,联合检测有助于判断乳腺癌的预后.
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细胞周期G1期调节因子Cyclin E及pRb在CA研究中的进展
目的:论述了细胞周期素E(Cyclin E),视网膜母细胞瘤蛋白(pRb)的发现历史,分子结构,及近几年上述因子在尖锐湿疣(CA)中的研究进展.方法:查阅国内外大量有关文献.结果与结论:细胞周期素E(Cyclin E),视网膜母细胞瘤蛋白(pRb)为探索尖锐湿疣发病机制及有效治疗提供新思路.
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PCNA、p53、pRb基因产物的表达与间叶组织肿瘤良恶性关系研究
采用免疫组化法检测127例间叶组织肿瘤中PCNA、p53、pRb基因产物的表达与间叶组织肿瘤恶性程度的相关性.结果:85例恶性间叶组织肿瘤中,PCNA、p53、pRb基因产物的阳性表达率分别为84.7%(72/85),54.1%(46/85),58.8%(50/85);42例良性间叶组织肿瘤中,PC-NA、p53、pRb基因产物的阳性表达率分别为40%(17/42),16.7%(7/42),21.4%(9/42).两者差异显著(P＜0.001).结果:检测PCNA、p53、pRb基因产物表达有助于判断间叶组织肿瘤的良恶性和推测预后.
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双黄升白颗粒双向调控细胞周期CyclinD-CDK4/6信号途径的进一步研究
目的:探讨双黄升白颗粒对化疗所致骨髓抑制荷瘤小鼠细胞周期CyclinD-CDK4/6信号途径的双向调控作用及其机制.方法:该研究采用Lewis肺癌荷瘤小鼠,30只小鼠随机分为空白组、模型组和治疗组.除空白组外,腹腔注射环磷酰胺制作骨髓抑制模型.治疗组用40g/( kg?d)双黄升白颗粒治疗6天后,流式细胞仪检测细胞周期情况,并计算增殖指数(proliferation index,PI),以实时荧光定量PCR法(reverse transcription quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测CyclinD-CDK4/6(cyclin D-cyclin dependent kinase 4/6,CyclinD-CDK4/6)上游激活信号CDC25A、上游抑制信号p16INK4a、p15INK4b,以及CyclinD-CDK4/6所激活的下游信号Rb、pRb、E2F的表达,并以western-blot法进行验证.结果:模型组骨髓组织的G0/G1期细胞比例均低于空白组(P＜0.05),PI和CDC25A、Rb、pRb、E2F的表达均高于空白组(P＜0.05).肿瘤组织G0/G1期细胞比例均低于空白组(P＜0.05),PI和CDC25A的表达均高于空白组(P＜0.05).治疗组骨髓G0/G1期细胞比例低于模型组及空白组(P＜0.05),PI及CDC25A、Rb、pRb、E2F的表达均高于模型组及空白组(P＜0.05).肿瘤组织G0/G1期细胞比例高于空白组及模型组(P＜0.05),PI及CDC25A的表达均低于模型组及空白组(P＜0.05).各组骨髓及肿瘤组织中p16INK4a、p15INK4b的表达经比较无统计学差异.各组肿瘤组织中Rb、pRb、E2F的表达经比较无统计学差异.结论:双黄升白颗粒对骨髓抑制Lewis肺癌荷瘤鼠的骨髓及肿瘤细胞周期具有双向调控作用,其机制可能与调控细胞周期CyclinD -CDK4/6上游激活信号CDC25A及其所激活的下游信号Rb、pRb、E2F的表达有关.
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细胞衰老和肿瘤
细胞衰老和肿瘤之间存在十分密切的关系.细胞衰老是抑制肿瘤的机制,同时又能促进肿瘤的形成.正确认识他们的联系机制对于延缓衰老和治疗肿瘤具有重要的意义.
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β-淀粉样肽(25-35)对PC12细胞Cyclin D1、CDK4、pRb、E2F1基因表达的影响
目的 观察β-淀粉样肽(25-35)[β-amyloid peptide (25-35),Aβ25-35]对体外血清饥饿培养PC12细胞的Cyclin D1、CDK4、pRb、E2F1基因表达的影响.方法 用终浓度为25 μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞,流式细胞仪检测分析细胞周期的改变,通过RT-PCR检测Cyclin D1、CDK4、E2F1基因mRNA表达变化,Western印迹检测Cyclin D1、CDK4、pRb蛋白表达的变化.结果 流式细胞仪分析表明血清饥饿培养24 h可使约90%PC12细胞停滞于G0/G1期,25 μmol/L Aβ25-35诱导组8、16、24 h与对照组比较,S期百分率明显增加(P＜0.01),16 h后细胞凋亡率明显增加(P＜0.01),可见明显的亚二倍体峰(Ap峰);Aβ25-35浓度诱导血清饥饿培养的PC12细胞0～20 h,Cyclin D1、CDK4、pRb 、E2F1 mRNA和蛋白表达增高.结论 Aβ25-35诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期,并阻滞于S期,同时出现凋亡,可能与增加Cyclin D1、CDK4、pRb 、E2F1 mRNA和蛋白的表达有关.
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细胞周期调控研究进展
细胞周期是细胞生命活动的基本过程,由细胞周期素(Cyclin)依次激活相应的细胞周期蛋白依赖激酶(CDK)所推动.Cyclin的周期性积累与分解对细胞周期进展起着正调控作用,而细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(CKI)通过在细胞周期适当的时间点上抑制CDK的活性,从而对细胞周期进展起负调控作用.Cyclin、CDK、CKI多因素相互协同作用,通过pRb途径和p53途径共同影响细胞周期进程.对细胞周期调控的研究有助于阐明肿瘤的发生以及终末细胞的分化,将为治疗肿瘤和诱导终末分化细胞的增殖提供有益的思路.
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atRA对C57BL/6N小鼠腭突间充质细胞周期分布的影响及其作用机制
目的:在全反式维A酸(all-trans retinoic acid,atRA)诱导建立腭裂小鼠模型的基础上,检测胎鼠体内胚胎腭突间充质细胞的周期分布,并检测相关周期蛋白的变化情况,为进一步阐明维A酸(retinoic acid,RA)诱导腭裂机制提供新的线索.方法:以atRA建立C57BL/6N胎鼠腭裂模型,采用流式细胞术及免疫组化检测小鼠胚胎腭突间充质细胞的周期分布,通过实时定量RT-PCR和Western印记法检测p21和pRb在胎鼠胚胎腭突间充质中的mRNA和蛋白表达水平.采用SPSS11.0软件包对数据进行单因素方差分析和t检验.结果:流式细胞术及免疫组化检测发现,在小鼠妊娠日(gestation day,GD)第10天时给予atRA,可以诱导胎鼠胚胎腭突间充质细胞在一定妊娠阶段出现G1期细胞周期阻滞,同时也使胎鼠胚胎腭突间充质内p21和pRb的表达水平出现改变.而妊娠第12天(GD12)时给予atRA则无此现象.结论:p21与pRb参与了GD10时给予atRA诱导组胎鼠胚胎腭突间充质细胞G1期阻滞的发生.
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口腔鳞癌中p16/CDK4/cyclinD1/pRb通路的表达及其意义
目的分析口腔黏膜鳞状细胞癌(OSCC)中pRb、CDK4、cyclinD1、p16INK4a等细胞周期调控因子的表达状况和相互间的联系及其临床意义.方法采用免疫组化SP法,研究47例OSCC及10例正常口腔黏膜中pRb、CDK4、cyclinD1和p16INK4a的表达情况,并结合随访资料进行相关性分析.结果47例OSCC中,pRb、CDK4、cyclinD1和p16INK4a阳性表达率分别为55%、60%、74%和38%,与正常口腔黏膜中的表达有显著差异(P＜0.05).cyclinD1的表达和淋巴结转移有密切关系(P＜0.05),p16和pRb呈负相关(r=-0.312).结论p16/Rb通路蛋白的异常表达和OSCC的发生有密切的关系;cyclinD1可作为OSCC预后的辅助性指标之一.
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p16基因甲基化及P16、Cyclin D1、pRb与皮肤鳞状细胞癌相关性研究
目的探讨P16、Cyclin D1和pRb蛋白在皮肤鳞状细胞癌(简称皮肤鳞癌)中的表达及他们的相互关系和意义;研究p16基因甲基化是否与原发性皮肤鳞癌的发生有关.方法采用PCR为基础的限制性内切酶甲基化法及免疫组化S-P法检测40例原发性皮肤鳞癌组织中p16基因甲基化状态及P16、Cyclin D1和pRb蛋白的表达,并以10例正常皮肤组织作对照.结果皮肤鳞癌组织P16蛋白、Cyclin D1阳性表达率分别为37.5%和57.5%;P16蛋白表达与Cyclin D1的表达呈显著负相关(r=-0.3162,P=0.008).皮肤鳞癌中P16蛋白和pRb表达呈显著负相关(r=-0.4007,P<0.05).p16基因的甲基化阳性率为42.5%.2级皮肤鳞癌组织中P16蛋白及p16基因甲基化阳性表达率比1级鳞癌组织显著增高(P＜0.05),而Cyclin D1和pRb阳性率表达则显著降低(P＜0.05).在有淋巴结转移组中P16蛋白及p16基因甲基化阳性率与无淋巴结转移组相比显著降低(P＜0.05),而Cyclin D1和pRb阳性率则显著增加(P＜0.05).结论在原发性皮肤鳞状细胞癌中存在P16蛋白低表达、Cyclin D1高表达的异常表达现象,两者的表达相互抑制,呈显著负相关;P16蛋白和pRb蛋白的表达呈负相关;p16基因甲基化与皮肤鳞癌病理分级、淋巴结转移之间有显著关系.提示p16基因甲基化在皮肤鳞癌的发生发展过程中起重要作用.
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肝癌中P16与PRb的表达及意义
目的了解P16、PRb在肝癌中的表达及其在肝癌发生、发展中的作用.方法用免疫组化S-P法,对4 6例肝癌及癌旁组织和10例正常肝组织进行对比研究.结果(1)46例肝癌组织中P16及PRb的阳性率分别为45.6%和56.5%,均明显低于相应癌周组织89%、91.3%和正常组织100%的水平(P＜0.01);(2)P16与PRb呈负相关;(3)P16与肿癌的病理分级、门静脉癌栓及肿瘤包膜密切相关;PRb仅与前者有关.结论(1)P16、PRb在肝癌中有较高的缺失率,可能与肝癌的发生、发展关系密切;(2)P16与PRb呈负相关,验证了P16与PRb在细胞周期调节中的负反馈学说;(3)P16、PRb与肝癌的大小、病理分级、门静脉癌栓及具有完整包膜等因素有密切关系,可考虑将其作为评价肝癌预后的指标.
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p16和pRb在皮肤鳞癌中的表达及其意义
目的:探讨p16、pRb蛋白在皮肤鳞癌中的表达及他们的相互关系和意义.方法:应用免疫组织化学SP法检测40例原发性皮肤鳞癌组织中p16、pRb的表达.结果:p16、pRb阳性表达率分别为37.5%和52.5%.两者在皮肤鳞癌中的表达呈显著负相关(P=0.011).结论:在原发性皮肤鳞癌中存在p16和pRb的异常表达现象,两者的表达相互抑制,呈显著负相关.
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ATRA对甲状腺鳞癌细胞株SW579细胞CDK4、CyclinD1、Rb表达的影响
目的 观察全反式维甲酸(ATRA)对甲状腺鳞癌细胞株SW579细胞CDK4、CyclinD1、Rb表达的影响,以探讨其抑癌机制.方法 分别以终浓度为10-7、10-6、5×10-6、10-5 mol/L的ATRA作用SW579细胞株,对照组加入5μl无水乙醇,各组细胞均在培养24h后加药.继续培养48 h,RT-PCR、Western blot检测SW579细胞CDK4、CyclinD1、Rb mRNA及其蛋白的表达.结果 ATRA作用后,RT-PCR检测结果表明,经不同浓度ATRA处理的细胞CDK4、Rb mRNA表达水平没有明显变化；CyclinD1的表达明显下调；Western blot检测结果表明经不同浓度ATRA处理的细胞CDK4蛋白表达水平没有明显变化,pRb蛋白的磷酸化水平明显下降,CyclinD1蛋白表达水平明显下降.结论 ATRA在一定浓度范围内可能通过下调甲状腺鳞癌细胞株SW579细胞CyclinD1的表达及Rb蛋白的磷酸化水平抑制细胞增殖.
