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表没食子儿茶素没食子酸酯对人骨肉瘤细胞143B的抑制作用及其机制探讨
目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对人骨肉瘤细胞143B的抑制作用,并初步探讨其可能的分子机制.方法:分别用0～50 μmol/L的EGCG处理骨肉瘤143B细胞,然后采用结晶紫染色法观察细胞增殖能力的变化,Hoechst染色法分析细胞凋亡情况,细胞划痕愈合实验和Transwell小室法分析细胞迁移能力,蛋白质印迹法检测细胞凋亡及迁移相关蛋白的表达水平.同时,采用荧光素酶报告基因系统分析细胞中Wnt/β-catenin信号通路的活化情况,再用蛋白质印迹法检测Wnt/β-catenin信号通路中关键因子β-catenin及其下游靶分子c-Myc和cyclin D1的表达情况.结果:EGCG处理后,骨肉瘤143B细胞的增殖和迁移能力均受到明显抑制(P值均＜0.05),而晚期凋亡细胞数明显增加(P＜0.05);细胞中凋亡蛋白caspase-3及其剪切体的表达水平均明显上调(P值均＜0.05),而Bcl-2、金属基质蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、β-catenin、c-Myc和cyclin D1的蛋白表达水平均明显下调(P值均＜0.05).此外,EGCG处理组的荧光素酶活性较未处理组明显下降(P＜0.05).结论:EGCG能抑制骨肉瘤143B细胞的增殖和迁移,促进细胞凋亡;这一作用可能与其阻断Wnt/β-catenin信号通路有关.
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γ-生育三烯酚抑制人胃腺癌SGC-7901细胞侵袭和迁移及其机制探讨
目的:探讨γ-生育三烯酚(γ-tocotrienol,γ-T3)对人胃腺癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的抑制作用及其可能的分子机制.方法:用不同浓度(0、15、30、45、60和100 μmol/L)的γ-T3作用SGC-7901细胞后,采用CCK-8法、细胞划痕愈合实验和Transwell侵袭实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化,然后采用蛋白质印迹法检测细胞中环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)和核因子1cB (nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号通路蛋白的表达.结果:15～100 μmol/L γ-T3作用SGC-7901细胞24、48和72 h后,细胞增殖能力受到明显抑制,且呈时间和剂量依赖性(P值均＜ 0.01).15～60 μmol/L γ-T3单独作用或与10 ng/mL肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)联合作用SGC-7901细胞24 h后,细胞迁移和侵袭能力均被明显抑制(P值均＜ 0.01).15～60 μmol/L γ-T3作用SGC-7901细胞24 h后,NF-κB、NF-κB p65和COX-2蛋白的表达水平均随着作用浓度的增加呈明显降低趋势(P值均＜ 0.01).结论:γ-T3可抑制人胃腺癌SGC-7901细胞的侵袭和转移,其作用机制可能与阻滞NF-κB信号通路和下调COX-2蛋白表达有关.
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下调转录因子KLF4抑制前列腺癌细胞上皮-间质转化及细胞迁移和侵袭
目的:探讨下调Krüippel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)对前列腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和细胞迁移及侵袭能力的影响.方法:构建稳定敲降KLF4的前列腺癌LNCaP-shKLF4细胞和对照组LNCaP-con细胞.应用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测LNCaP-shKLF4和LNCaP-con细胞中KLF4 mRNA和蛋白的表达,以及稳定敲降KLF4的前列腺癌PC3-shKLF4细胞、对照组PC3-con细胞、LNCaP-con细胞和LNCaP-shKLF4细胞中EMT相关分子mRNA和蛋白的表达.Transwell小室法检测 PC3-con、PC3-shKLF4、LNCaP-con 和 LNCaP-shKLF4细胞的迁移及侵袭能力.结果:成功构建LNCaP-shKLF4和对照组LNCaP-con细胞.LNCaP-shKLF4细胞中KLF4 mRNA及蛋白表达水平均低于对照组LNCaP-con细胞(P＜0.01,P＜0.05).PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad) mRNA的表达水平分别高于对照组的PC3-con和LNCaP-con细胞(P值均＜0.01), 而PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞中N-钙黏蛋白(N-cadherin,N-cad)、锌指E-盒结合同源异体框1 (Zinc finger E-box-binding homeobox 1,Zeb1)、Snail1、波形蛋白(vimentin,Vim)和基质金属蛋白酶1(matrix metallopeptidase 1,MMP1) mRNA的表达水平均分别低于对照组的PC3-con和LNCaP-con细胞(P值均＜ 0.05).PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞中E-cad的表达水平分别高于对照组的PC3-con和LNCaP-con细胞(P值均＜0.05),而PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞中N-cad、Zeb1、Snail1、Vim和MMP1蛋白的表达水平均分别低于对照组的PC3-con和LNCaP-con细胞(P值均＜ 0.05).PC3-shKLF4和LNCaP-shKLF4细胞的迁移和侵袭能力均分别低于对照组PC3-con和LNCaP-con细胞(P＜0.01,P＜0.05).结论:下调前列腺癌细胞中KLF4表达可促进上皮相关基因的表达,抑制间质相关基因的表达,从而在体外抑制前列腺癌细胞的迁移和侵袭.
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延龄草皂苷通过NF-κB/MAPK信号通路调控MMPs表达并抑制骨肉瘤Saos-2细胞的迁移和侵袭
目的:观察延龄草皂苷(diosgeninglucoside,Dgg)对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:应用不同浓度(6.25～100 μmol/L)的Dgg处理骨肉瘤Saos-2细胞96 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖情况.用不同浓度(12.5～50μmol/L)的Dgg作用骨肉瘤Saos-2细胞24 h后,分别采用FCM和Transwell小室法检测细胞凋亡、迁移和侵袭能力的变化.后,采用蛋白质印迹法检测Dgg(12.5和25 μmol/L)作用后,Saos-2细胞中核因子κB (nuclear factor-κB,NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路相关蛋白以及该通路下游效应分子基质金属蛋白酶(matrix metalloproteases,MMPs)的表达水平.结果:Dgg可明显抑制骨肉瘤Saos-2细胞的增殖,诱导细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭(P值均＜ 0.05),并呈浓度和时间依赖性.Dgg下调NF-κB信号通路中p38的磷酸化(P＜0.05),但不影响细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的磷酸化(P值均＞0.05).Dgg抑制MAPK通路中磷酸化核因子κB激酶抑制蛋白(phospho-inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase,p-IKK)、磷酸化核因子κB抑制蛋白α(phospho-inhibitor of nuclear factor kappa-B α,p-IκBα)、IκBα和磷酸化p65 (phospho-p65,p-p65)的表达(P值均＜0.05),并下调下游效应分子MMP-1、MMP-2和MMP-9的表达水平(P值均＜0.05).结论:Dgg可抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡.这一作用可能与肿瘤细胞中NF-κB/MAPK信号通路被阻滞,以及MMPs表达被下调有关.
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微RNA-25通过调控Klf4表达促进肝癌细胞的增殖和迁移
目的:探讨肝癌细胞中微RNA-25(microRNA-25,miR-25)对核转录因子Krüppel样因子4(Krüppel-like factor4,Klf4)基因表达的靶向调控作用,以及对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响.方法:通过生物信息学工具预测miR-25可能调控的靶基因.将miR-25模拟物和抑制子分别转染人肝癌细胞Sk-hep-1和Bel-7402后,采用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法和双荧光素酶报告基因实验验证miR-25对Klf4基因的调控作用;同时,将Klf4过表达质粒共转染至以上细胞株,然后采用CCK-8法和Transwell细胞迁移实验分别检测miR-25和Klf4表达变化对肝癌细胞增殖和迁移的影响.结果:生物信息学分析表明,miR-25可与K1f4基因3'端非翻译区的2个潜在结合位点相结合.miR-25可以调控Klf4基因的表达,其中miR-25模拟物转染后Klf4表达明显下调(P＜0.05),而miR-25抑制子转染后Klf4表达明显上调(P＜0.05).miR-25模拟物转染能促进肝癌Sk-hep-1和Bel-7402细胞的增殖和迁移能力(P值均＜0.05),miR-25抑制子可抑制Sk-hep-1和Bel-7402细胞的增殖和迁移能力(P值均＜0.05);而肝癌细胞转染Klf4过表达质粒后,miR-25模拟物对肝癌细胞增殖和迁移能力的促进作用明显减弱(P值均＜0.05),miR-25抑制子对肝癌细胞增殖和迁移能力的抑制作用则明显增强(P值均＜ 0.05).结论:miR-25可促进肝癌细胞的增殖和迁移,其作用机制可能与靶向调控抑癌基因Klf4的表达有关.
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他莫昔芬通过GPR30介导CAF外分泌CXCL16促进乳腺癌MCF-7细胞迁移及侵袭
目的:探讨他莫昔芬(tamoxifen,TAM)通过雌激素G蛋白偶联受体30(estrogen G-protein-coupled receptor 30,GPR30)介导肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)外分泌CXC型趋化因子配体16(CXC-chemokine ligand 16,CXCL16)对乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭的影响.方法:TAM和TAM联合GPR30特异性抑制剂G15分别处理CAF后,通过基因芯片检测2组细胞差异表达的基因,并从中挑选出CXC 16,应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法进行验证,应用ELISA法检测细胞上清液中CXCL16的浓度.用TAM和TAM联合G15处理后的CAF上清液、不做任何处理的CAF上清液、添加CXCL16或CXCL16中和抗体的培养液分别培养MCF-7细胞,采用MTT法、划痕愈合实验和Transwell小室法检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力.结果:与TAM联合G15处理组相比,TAM处理组CAF中2 358个基因表达上调,2 178个基因表达下调;TAM处理组CAF中CXCL16 mRNA和蛋白的表达水平及上清液中CXCL16的浓度均显著上调(P值均＜0.01),且该效应可被G15阻断(P值均＜0.01).TAM处理组CAF上清液和添加CXCL16培养液培养的MCF-7细胞,其迁移和侵袭能力均增强(P值均＜0.05),而增殖能力则无显著变化(P值均＞0.05).结论:CAF经TAM处理后CXCL16分泌增多,该效应由GPR30介导,而外分泌的CXCL16可促进乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭能力.
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沉默NF-κB p65基因可抑制鼻咽癌CNE-2干细胞的增殖和迁移并促进凋亡
目的:探讨沉默核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)p65对鼻咽癌CNE-2干细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响.方法:将沉默NF-κB p65基因的重组慢病毒感染CNE-2 干细胞,应用蛋白质印迹法检测CNE-2干细胞中NF-κB p65、Bcl-2和Bax蛋白的表达,免疫荧光实验观察NF-κB p65在细胞核和细胞质中的表达变化,CCK-8法检测细胞的增殖能力,FCM法检测细胞的凋亡,Transwell小室法检测细胞的迁移能力.结果:沉默NF-κB p65基因的重组慢病毒感染后,CNE-2干细胞中NF-κBp65和Bcl-2蛋白的表达水平低于空白对照组(CNE-2干细胞未进行任何转染)和阴性对照组(CNE-2干细胞转染阴性对照慢病毒)(p值均＜0.01),Bax蛋白的表达水平高于空白对照组和阴性对照组(P值均＜0.01);而空白对照组和阴性对照组细胞中NF-κB p65、Bcl-2和Bax蛋白表达水平间的差异无统计学意义(P值均＞ 0.05).沉默NF-κB p65基因的重组慢病毒感染后,CNE-2干细胞的增殖能力和迁移能力下降(P＜0.05和P＜0.01),而凋亡率升高(P＜0.01).结论:NF-κB p65可介导鼻咽癌CNE-2干细胞的增殖、凋亡及迁移能力,其作用可能与调节Bcl-2和Bax的表达有关.
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果糖-1,6-二磷酸酶1过表达抑制他莫昔芬耐药的乳腺癌细胞迁移并促进细胞凋亡
目的:探讨过表达果糖-1,6-二磷酸酶1(fructose-1,6-bisphosphatase 1,FBP1)基因对他莫昔芬耐药性人乳腺癌MCF-7R细胞迁移和凋亡的影响.方法:首先采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测人乳腺癌亲本敏感细胞MCF-7和他莫昔芬耐药细胞MCF-7R中FBP1 mRNA和蛋白的表达水平.然后,采用脂质体转染法将FBP1过表达重组质粒转染至耐药细胞MCF-7R中,再应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测FBP1 mRNA和蛋白的表达水平,以验证FBP1基因过表达效果.接着,倒置光学显微镜下观察FBP1过表达后MCF-7R细胞的形态学变化;FCM法和细胞划痕愈合实验分别检测细胞凋亡及迁移能力的变化;蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax以及上皮-间质转化标志物E-cadherin和vimentin 的表达变化.结果:对他莫昔芬耐药的人乳腺癌细胞MCF-7R中FBP1 mRNA和蛋白的表达水平均比其亲本细胞MCF-7明显降低(P值均＜0.01).FBP1过表达重组质粒转染后,MCF-7R细胞中FBP1 mRNA及蛋白的表达水平均明显上调(P值均＜ 0.01),MCF-7R细胞形态由间质细胞样向上皮细胞样转变,细胞凋亡率明显升高(P＜0.01),迁移能力则明显降低(P＜0.01).FBP1过表达的MCF-7R细胞中Bcl-2和vimentin蛋白的表达水平明显下降(P值均＜ 0.01),Bax和E-cadherin蛋白的表达水平则明显升高(P值均＜ 0.01).结论:FBP1基因过表达可明显抑制人乳腺癌他莫昔芬耐药细胞MCF-7R的迁移和上皮-间质转化,并通过下调Bcl-2表达和上调Bax表达来促进肿瘤耐药细胞的凋亡.
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TGF-β信号通路调控Twist高表达型乳腺肿瘤细胞微球体的形成及迁移
目的:探讨转化生长因子β(transforming growth factor-beta,TGF-β)信号通路对Twist高表达型乳腺癌细胞微球体形成及微球体细胞迁移的影响.方法:应用蛋白质印迹法和微球体形成实验分别检测正常乳腺上皮MCF10A细胞及乳腺癌MCF7和BT549细胞中Twist的表达水平及微球体形成能力.蛋白质印迹法检测MCF10A、MCF7和BT549微球体细胞中TGF-β、SMAD3和磷酸化SMAD3 (phospho-SMAD3,p-SMAD3)的表达水平.在微球体形成实验的基础上,加入TGF-β信号通路特异性抑制剂LY2109761,应用微球体形成实验和蛋白质印迹法分别检测乳腺癌BT549微球体细胞的形成能力和p-SMAD3蛋白、肿瘤干细胞相关标志物性别决定区Y框蛋白2 (sex determining region Y-box 2,SOX2)和八聚体绑定转录因子4 (octamer-binding transcription factor 4,OCT4)的表达水平,Transwell法检测乳腺癌BT549来源的微球体细胞的迁移能力.结果:乳腺癌BT549细胞中Twist的表达水平明显高于MCF10A细胞和MCF7细胞(P值均＜0.05),BT549细胞微球体形成能力显著高于MCF10A和MCF7细胞(P值均＜0.05).BT549微球体细胞中TGF-β、p-SMAD3和SMAD3蛋白的表达水平均显著高于MCF10A和MCF7微球体细胞(P值均＜ 0.05).LY2109761可显著抑制乳腺癌BT549细胞的微球体形成能力(P＜0.05),下调乳腺癌BT549微球体细胞中p-SMAD3及干细胞相关蛋白SOX2和OCT4的表达(P值均＜0.05),抑制乳腺癌BT549微球体细胞的迁移(P＜0.05).结论:TGF-β信号通路特异性抑制剂LY2109761可抑制Twist高表达乳腺癌细胞微球体的形成及微球体细胞的迁移.
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共济失调毛细血管扩张突变基因沉默可抑制人乳腺癌细胞的迁移和侵袭
目的:探讨共济失调毛细血管扩张突变(ataxia-telangiectasia mutated,ATM)基因沉默对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法:将携带ATM-shRNA及其阴性对照序列(作为阴性对照组)的重组慢病毒载体分别感染人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,获得ATM基因稳定沉默及其对照细胞株;同时,设置未经病毒感染的空白对照组细胞.经嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜下观察各组细胞的感染效率,并采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测ATM mRNA及蛋白的表达水平.采用MTT法、FCM法、细胞划痕愈合实验和Transwell小室实验分别检测ATM基因沉默对MDA-MB-231细胞增殖、周期分布、迁移和侵袭能力的影响.结果:成功构建了稳定沉默ATM基因的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株.与空白对照组和阴性对照组相比,ATM基因沉默组细胞的增殖能力和细胞周期分布均无明显变化(P值均＞ 0.05),但细胞迁移和侵袭能力均明显减弱(P值均＜ 0.05).结论:在人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞中,ATM表达下调可明显抑制细胞的迁移和侵袭.
关键词： 乳腺肿瘤 共济失调毛细血管扩张突变蛋白质类 细胞增殖 细胞迁移分析 肿瘤浸润 -
瘦素通过上调IL-18表达促进人乳腺癌MCF-7细胞迁移及侵袭
目的:探讨瘦素(leptin)对乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响及其可能的分子作用机制.方法:用leptin (200 ng/mL)处理乳腺癌MCF-7细胞后,采用划痕愈合实验和Transwell侵袭实验分别检测MCF-7细胞的迁移及侵袭能力,采用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法和ELISA法检测白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)的表达水平.用leptin (200 ng/mL)和IL-18结合蛋白(IL-18 binding protein,IL-18bp)(10 ng/mL)同时处理乳腺癌MCF-7细胞后,再采用划痕愈合实验和Transwell侵袭实验分别检测MCF-7细胞迁移及侵袭能力的变化.结果:Leptin可促进乳腺癌MCF-7细胞的迁移及侵袭(P值均＜0.05),上调MCF-7细胞中IL-18 mRNA及蛋白的表达水平(P值均＜0.05),促进IL-18分泌(P＜0.05).IL-18bp与细胞分泌的IL-18结合后,leptin促进乳腺癌MCF-7细胞迁移及侵袭的能力被明显抑制(P值均＜0.05).结论:Leptin可促进乳腺癌MCF-7细胞的迁移及侵袭,其机制可能与促进IL-18表达上调相关.
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新型表皮生长因子受体异构体EGFRvA对胶质瘤U87MG细胞迁移的影响及其机制探讨
目的:研究新型表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)异构体EGFRvA对人恶性胶质瘤U87MG细胞迁移的影响,并深入探讨其可能的机制.方法:首先将pWPT-GFP[重组有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因,作为空白对照]、pWPT-EGFRwt(重组有野生型EGFR基因,作为阴性对照)和pWPT-EGFRvA慢病毒表达载体分别与慢病毒包装质粒psPAX2和pMD2.G一起共转染293T细胞,获得慢病毒颗粒,然后感染胶质瘤U87MG细胞,建立U87MG GFP、U87MG EGFRwt和U87MG EGFRvA细胞系.采用蛋白质印迹法和FCM法验证EGFRwt和EGFRvA分别在感染后的U87MG EGFRwt和U87MG EGFRvA细胞中成功过表达.采用Transwell小室实验检测各组细胞迁移能力的变化.实时荧光定量PCR法验证前期基因芯片技术筛选出的各组细胞之间表达水平有明显变化的52个基因的mRNA水平,并用蛋白质印迹法检测其中4个有显著差异的肿瘤转移相关基因的蛋白表达水平.结果:稳定感染U87MG细胞后,U87MG EGFRwt和U87MG EGFRvA细胞中分别过表达EGFRwt和EGFRvA.相对于EGFRwt过表达组,过表达的EGFRvA更能促进U87MG细胞发生迁移(P＜0.001).U87MG EGFRvA细胞中癌基因FBLN2和ROBO1的mRNA水平高于U87MG EGFRwt细胞,而抑癌基因CDH13和SOX2的mRNA水平则明显下调(P值均＜ 0.05).在蛋白质水平上,U87MG EGFRvA细胞中与肿瘤转移相关的CDH13和SOX2表达水平也明显下调(P值均＜0.05).结论:EGFRvA过表达可以促进人胶质瘤U87MG细胞的迁移,它可能是通过影响肿瘤细胞中FBLN2、ROBO1、CDH13和SOX2基因的表达来发挥作用.
关键词： 神经胶质瘤 受体 表皮生长因子 细胞迁移分析 表皮生长因子受体异构体 -
EGFL6基因沉默对人黑素瘤细胞增殖及侵袭的影响
目的:通过特异性小干扰RNA (small interference RNA,siRNA)抑制人黑素瘤A375细胞中表皮生长因子样结构域蛋白6(epidermal growth factor-like-domain 6,EGFL6)基因表达,探讨EGFL6基因沉默对人黑素瘤细胞增殖及侵袭的影响.方法:设计合成靶向EGFL6基因的siRNA(命名为EGFL6-siRNA),通过脂质体转染法将该siRNA转染入黑素瘤A375细胞,然后采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法分别检测黑素瘤A375细胞中EGFL6 mRNA及蛋白的表达水平,细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法和Transwell实验分别检测A375细胞增殖和侵袭能力的变化.结果:在成功转染EGFL6-siRNA 48 h后,A375细胞中EGFL6 mRNA及蛋白表达水平均明显下降(P值均＜ 0.01).EGFL6-siRNA转染组A375细胞在转染后24～72 h各时间点的细胞增殖能力均受到明显抑制(P值均＜ 0.01),且细胞侵袭能力显著降低(P＜0.01).结论:特异性siRNA能够有效地沉默人黑素瘤A375细胞中EGFL6基因的表达,并抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭.
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阻断丝裂原活化蛋白激酶信号通路对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响
目的:研究丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase,MAPK/ERK)通路抑制剂PD98059对卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞增殖及侵袭能力的影响,初步探讨阻断MAPK/ERK信号转导通路以治疗卵巢癌的可能性.方法:体外培养人上皮性卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞,然后用不同浓度的PD98059处理细胞不同时间.采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测2种细胞的增殖活性.蛋白质印迹法检测PD98059对2种细胞中磷酸化ERK (phospho-ERK,p-ERK)蛋白表达的影响.Transwell小室法检测PD98059作用后SKOV3和OVCAR3细胞侵袭能力的变化.结果:PD98059在一定浓度范围内能够明显抑制卵巢癌细胞SKOV3和OVCAR3的增殖,其作用具有时间及浓度依赖性(P值均＜0.05).PD98059能够抑制ERK1/2的磷酸化,即下调p-ERK1/2蛋白的表达(P＜0.05),从而使得ERK1/2信号转导途径失活.同时,PD98059在一定浓度范围内能抑制2种卵巢癌细胞的侵袭能力(P值均＜ 0.05).结论:PD98059可能通过阻断ERK1/2信号通路,抑制人上皮性卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞的增殖和侵袭能力.
关键词： 卵巢肿瘤 MAP激酶信号系统 细胞外信号调节MAP激酶类 细胞增殖 细胞迁移分析 -
热休克蛋白70抑制剂PES对人胃癌BGC细胞NF-κB通路的影响
目的:探讨热休克蛋70 (heat shock protein 70,Hsp70)抑制剂PES(2-phenylethynesulfonamide)对人胃癌BGC细胞活性、细胞迁移以及核因子-1cB (nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路的影响.方法:采用Hsp70抑制剂PES处理人胃癌BGC细胞后,应用CCK-8 (cellcounting kit-8)法检测BGC细胞的活性,细胞划痕实验检测BGC细胞的迁移能力,蛋白质印迹法检测NF-κB信号通路成员及其下游血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,免疫荧光法观察BGC细胞质中p65的表达.结果:与未经PES处理的BGC细胞(对照组)比较,5、10和20.μmol/L的PES处理BGC细胞72 h后,BGC细胞活性和细胞迁移率被明显抑制(P值均＜ 0.05).20 μmol/L的PES处理后,BGC细胞NF-κB信号通路中磷酸化p65 (phospho-p65,p-p65)、p65、NF-κB抑制蛋白激酶α(inhibitoryprotein of NF-κB kinase α,IKKα)、p-IKKα、p-IKKβ、IKKβ、p-Akt和Akt以及下游VEGF蛋白的表达水平均明显低于对照组(P值均＜0.05),且细胞质中p65蛋白的荧光明显减弱.结论:Hsp70抑制剂PES可抑制胃癌BGC细胞的活性和迁移,下调BGC细胞NF-κB信号通路活性以及下游VEGF蛋白的表达水平,降低BGC细胞质中p65的表达.
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RNA干扰Semaphorin 4D表达对乳腺癌细胞增殖、周期及迁移的影响
目的:研究Semaphorin 4D (Sema 4D)表达沉默对乳腺癌细胞增殖、周期及迁移的影响,初步探讨该蛋白在乳腺癌发生和发展中的作用.方法:实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测Sema 4D在不同转移潜能的乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7中的表达水平.采用短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)慢病毒感染法,建立Sema 4D稳定低表达的MDA-MB-231细胞系,然后采用CCK-8法、FCM法、划痕愈合实验及Transwell迁移实验检测细胞增殖、周期分布及迁移能力的变化.结果:Sema 4D在MDA-MB-231细胞中表达水平明显高于MCF-7细胞(P＜0.05); shRNA慢病毒感染可明显下调MDA-MB-231细胞中Sema4D的表达;与空白对照组比较,Sema 4D干扰组的MDA-MB-231细胞增殖明显被抑制(P＜0.05),G0/G1期细胞所占比例明显增高(P＜0.05),而细胞迁移能力明显降低(P＜0.05).结论:Sema 4D在高转移潜能的乳腺癌MDA-MB-231细胞中高表达,shRNA干扰Sema 4D表达可抑制该细胞的增殖和迁移,并阻滞细胞周期于G1期.
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PIK3CD基因沉默可抑制胃癌HGC-27细胞的体外增殖和迁移
目的:探讨磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基δ(phosphoinositide-3 kinase,catalytic subunit delta,PIK3CD)基因沉默对胃癌HGC-27细胞体外增殖和迁移的影响及其可能的作用机制.方法:首先采用实时荧光定量PCR法检测人胃癌HGC-27细胞中PIK3CD基因的表达水平;然后将MSCV-PIK3CD-shRNA重组质粒转染到HGC-27细胞中,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法鉴定PIK3CD基因沉默效果;采用CCK-8试剂盒和Transwell小室法分别检测PIK3CD基因沉默对胃癌HGC-27细胞增殖和迁移的影响;蛋白质印迹法检测PIK3CD基因沉默后其下游相关的Akt信号通路分子的表达情况.结果:PIK3CD在胃癌HGC-27细胞中高表达.MSCV-PIK3CD-shRNA转染入PIK3CD基因高表达的胃癌HGC-27细胞后,PIK3CD表达被明显下调(P＜0.05),细胞增殖和细胞迁移能力明显降低(P＜0.05).PIK3CD基因沉默对Akt表达无明显影响,但可明显抑制P-Akt的表达水平(P＜0.05).结论:PIK3CD可能通过激活Akt信号转导通路,促进胃癌HGC-27细胞的体外增殖和迁移.
关键词： 胃肿瘤 基因沉默 磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基δ 细胞增殖 细胞迁移分析 -
趋化因子受体CX3CR1表达沉默对人肝细胞癌Huh7细胞的作用及机制研究
目的:探讨趋化因子CX3C受体1(chemokine CX3C receptor 1,CX3CR1)对人肝细胞癌Huh7细胞的作用及其机制.方法:将靶向沉默CX3CR1表达的重组腺病毒Ad-siCX3CR1感染至人肝细胞癌Huh7细胞,然后应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测Huh7细胞中CX3CR1的表达水平,采用MTT、FCM、划痕愈合实验和Transwell小室法分别分析CX3CR1表达沉默对Huh7细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,再通过蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)-Akt信号通路相关蛋白Akt及其磷酸化水平的变化.同时,用不同浓度的PI3K抑制剂LY294002作用感染了Ad-siCX3CR1的Huh7细胞后,分别采用蛋白质印迹法和Transwell侵袭实验检测LY294002对CX3CR1介导的Akt表达和细胞侵袭能力的影响.结果:感染Ad-siCX3CR1后,肝细胞癌Huh7细胞中CX3CR1表达被明显抑制(P＜0.001),细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显增强(均P＜0.001),凋亡能力则明显降低(P＜0.01).沉默CX3CR1表达后,Huh7细胞中Akt的磷酸化水平升高(P＜0.001),且PI3K抑制剂LY294002能有效逆转CX3CR1介导的Akt磷酸化和细胞侵袭(均P＜0.001).结论:沉默趋化因子受体CX3CR1表达可以促进人肝细胞癌Huh7细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞凋亡,其机制可能与活化PI3K-Akt信号通路有关.
关键词： 癌 肝细胞 基因沉默 受体 趋化因子CX3CL1 细胞增殖 细胞凋亡 细胞迁移分析 癌基因蛋白质v-akt -
人牙周膜干细胞条件培养液对舌癌Tca-8113细胞增殖及迁移能力的影响
目的:探讨人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)条件培养液(conditioned medium,CM)对舌癌Tca-8113细胞增殖及迁移能力的影响.方法:从健康成人牙周膜组织中分离并培养hPDLSCs.第3代hPDLSCs融合达80％时更换为无血清培养液,继续培养24 h后收集上清液,即获得hPDLSCs-CM.舌癌Tca-8113细胞分别在常规培养液(对照组)和含50％ hPDLSCs-CM的培养液(CM处理组)中培养,然后采用MTT法检测细胞增殖活性,FCM法分析细胞周期变化,Transwell迁移实验检测细胞迁移能力的变化.结果:分离培养的hPDLSCs表达干细胞标志蛋白Stro-1和CD146,且具有明显的克隆形成及多向分化能力.将hPDLSCs-CM与舌癌Tca-8113细胞共培养至第3、5和7天时,CM处理组的细胞增殖活性均高于未处理对照组(P＜0.01).培养至第4天时,CM处理组的细胞增殖指数(proliferative index,PI)较对照组明显升高(P＜0.01).培养24 h后,CM处理组穿膜细胞数明显高于对照组(P＜0.01).结论:hPDLSCs-CM可以促进舌癌Tca-8113细胞增殖,并增强该细胞的迁移能力.
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体外模拟乳腺脂肪微环境中过表达BMP9对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其机制探讨
目的:采用体外共培养技术模拟乳腺脂肪微环境,研究人骨形态发生蛋白9 (bone morphogenetic protein 9,BMP9)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和迁移的影响,并初步探讨其可能的机制.方法:将重组腺病毒Ad-BMP9(以Ad-GFP作为对照)导入MDA-MB-231细胞中,构建MDA-MB-231/Ad-BMP9重组细胞,再与前体脂肪细胞3T3-L1在Transwell共培养体系中间接共培养3d.荧光显微镜下观察共培养体系中重组腺病毒Ad-BMP9在MDA-MB-231细胞中的感染效率,并通过RT-PCR和蛋白质印迹法验证BMP9在共培养体系的MDA-MB-231细胞中成功过表达.然后,分别采用MTT法、FCM法、划痕愈合实验和Transwell迁移实验检测MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力的变化;蛋白质印迹法检测共培养的2种细胞中增殖和转移相关因子瘦素(leptin)的表达水平变化;细胞免疫荧光法和蛋白质印迹法分别检测MDA-MB-231细胞中leptin受体OB-R及leptin信号通路关键分子的表达水平变化.结果:荧光显微镜下观察到重组腺病毒Ad-BMP9在共培养体系的MDA-MB-231细胞中感染效率为70％左右,且BMP9在共培养体系的MDA-MB-231细胞中成功过表达(P＜0.05).在模拟乳腺脂肪微环境的共培养体系中过表达BMP9后,乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和迁移受到明显抑制(P＜0.05),并且细胞周期阻滞于G2/M期(P＜0.001).过表达BMP9后,前体脂肪细胞3T3-L1中leptin表达显著下调(P＜0.05),而MDA-MB-231细胞中磷酸化的STAT3 (phosphorylated STAT3,p-STAT3)和磷酸化的ERK1/2 (phosphorylated ERK1/2,p-ERK1/2)水平均明显下调(均P＜0.05).结论:模拟乳腺脂肪微环境的共培养体系中,BMP9过表达可以调节乳腺癌细胞与前体脂肪细胞的相互作用,抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和迁移,且该抑制作用可能与leptin经典信号通路有关.
