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Poly（A）加尾实时荧光定量PCR检测血清微RNA-122的表达及其临床初步应用
目的：建立Poly（A）加尾SYBR Green I实时荧光定量PCR法检测血清微RNA?122（miR?122）水平，并初步探讨其临床应用价值。方法选取2013年9月至2014年9月本院就诊的糖尿病患者和健康体检者120例为研究对象，分为糖尿病脂质代谢紊乱组（n=40）、糖尿病非脂质代谢紊乱组（n=40）和对照组（n=40）。提取血清总RNA，miR?122 Poly（A）聚合酶加尾逆转录获得cDNA，进行SYBR Green I实时荧光定量PCR扩增。制作C.elegans?miR?39模拟物浓度梯度稀释的标准曲线定量检测血清miR?122水平，进行3组血清miR?122水平的组间比较。结果该方法可定量检测血清miR?122水平，PCR扩增产物特异性好，熔解曲线呈单峰；检测灵敏度为102拷贝/μl，检测线性范围102~107拷贝/μl。高、中、低浓度样本重复性检测的批内变异系数（CV）分别为2.23%、2.48%和2.75%，其批间CV分别为5.35%、5.88%和5.72%，显示该方法具有较好的重复性和稳定性。该方法检测糖尿病脂质代谢紊乱组、糖尿病非脂质代谢紊乱组和对照组的血清miR?122水平分别为（4.85±3.68）×103拷贝/μl、（3.06±1.86）×103拷贝/μl和（1.03±0.82）×103拷贝/μl，糖尿病脂质代谢紊乱组血清miR?122水平高于糖尿病非脂质代谢紊乱组和对照组（均P<0.01），糖尿病非脂质代谢紊乱组血清miR?122水平高于对照组（P<0.05）。结论成功建立Poly（A）加尾SYBR Green I实时荧光定量PCR方法检测血清miR?122水平，该方法的灵敏度高、特异性和重复性均较好。
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PTB与胰岛素基因表达和分泌的研究发展
多聚嘧啶区结合蛋白(polypyrimidine tract binding protein,PTB)是一种RNA结合蛋白,参与许多mRNA代谢过程,包括转录、选择性剪接、翻译、多聚腺苷酸化、核与胞浆间的定位.
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大肠杆菌poly(A)化mRNA cDNA文库的构建与鉴定
目的构建和鉴定大肠杆菌po1y(A)化mRNA的cDNA文库.方法应用限制性显示PCR技术构建大肠杆菌poly(A)化mRNA的cDNA文库,筛选、收集cDNA片段,并进行测序.根据测序结果进行初步的生物信息学分析和结果验证.结果构建了大肠杆菌poly(A)化mRNA的限制性cDNA文库,并对其中66个基因片段进行了分析.结论所构建的大肠杆菌polv(A)化mRNA的cDNA文库片段重复性低,质量高.
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长链非编码 RNA H19与消化系统肿瘤关系的研究进展
长链非编码RNA（ long non－coding RNA，LncRNA）在肿瘤学中的作用越来越来备受关注［1－2］。 LncRNA是一类转录本长度超过200 bp的不具有蛋白质编码功能的RNA分子总称，其转录过程与mRNA类似，大多由RNA聚合酶Ⅱ转录后经加帽、剪接及多聚腺苷酸化等修饰而成［3］。 LncRNA可通过表观遗传学、转录和转录后调控等多种层面调控基因的表达水平，调节机体的生长发育等生理过程，影响肿瘤的发生、发展、转移和预后等病理过程［4－5］。其中，H19基因是Ln-cRNA中研究较多且与肿瘤关系密切的基因［6］，与食管癌［7］、胃癌［8］、结直肠癌［9］、肝癌［10］、胰腺癌［11］等消化系统肿瘤的病理过程有关。因此，本文主要对LncRNA H19与消化系统肿瘤关系的研究进展作一综述。
