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乙型肝炎病毒mRNA转录后剪接加工的研究进展
据统计,全世界乙型肝炎病毒(HBV)的携带者可达两亿人.在我国,它是导致肝炎、肝硬化、肝癌的主要原因.然而,到目前为止,HBV的某些遗传特性及转录后调控的分子生物学机制尚不十分清楚.本文试就HBV mRNA转录后剪接加工的机制、类型、及可能的生物学作用作一综述.
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miR-29a靶基因ITGβ1-3'UTR萤光素酶报告基因质粒的构建及对心肌成纤维细胞增殖的影响
目的:利用microRNA靶位点预测网站预测了miR-29靶基因及结合位点,构建含野生型及其突变型整合素β1(integrinβ1,ITGβ1)-3'端非翻译区(UTR)双荧光素酶报告基因(DLR)表达系统(pMIR-ITGβ1-3'UTR),通过转染细胞、双荧光素酶活性分析初步确定miR-29的靶位点,以此研究miR-29对ITGβ1基因靶向调控的作用.方法:提取人全血RNA,逆转录mRNA成cDNA,以之为模板,逆转录PCR(RT-PCR)扩增ITGβ1-3'UTR片段,经酶切后连接至荧光素酶报告载体pMIR-Report 上,构建出pMIR-ITGβ1-3'UTR的荧光素酶报告基因载体及突变载体并进行鉴定.将pMIR-Report Luciferase载体,所构建的pMIR-ITGβ1-3'UTR及突变载体分别同miR-29 mimics共转染至大鼠心肌成纤维细胞,采用双荧光素酶实验分析miR-29与ITGβ1的作用机制.结果:通过酶切及基因测序的方法证实所构建质粒序列正确,克隆获得的DNA片段大小及序列与Genbank报道的一致;成功构建pMIR-ITGβ1-3'UTR双荧光素酶报告基因,双荧光素酶实验证实miR-29可以结合在ITGβ1-3'UTR相应的碱基位点,并显著下调荧光素酶的表达.结论:该荧光素酶报告基因载体构建成功,转染miR-29 mimics后能显著下调萤火虫荧光素酶的表达.
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自然反义转录物Lmo4as对神经系统重要编码基因Lmo4的调节作用
目的 探索小鼠神经系统重要编码基因Lmo4基因座位上自然反义转录产物Lmo4as对该编码基因的表达调控功能.方法 1)使用cDNA末端快速扩增(RACE)与RT-PCR技术,验证Lmo4as是否具有多聚腺苷酸(polyA)尾,克隆Lmo4as的全长序列;2)使用实时定量PCR和原位杂交技术确定Lmo4as及相应编码基冈的时空表达谱;3)使用荧光素酶报告基因实验在体外验证Lmo4as对Lmo4是否具有调控作用.结果 1)Lmo4as是一个具有多聚腺苷酸(polyA)尾的非编码RNA转录本,获得其RNA全长信息;2)Lmo4as与相应编码基因转录Lmo4的丰度在时间上具有协同性,而在空间表达上具有明显不同的分布;3)Lmo4as对Lmo4在转录后水平具有负性调节作用,另外miR-124也能够抑制Lmo4的表达.结论 编码基因Lmo4基因座位上自然反义转录产物Lmo4as对其转录后水平的负性调节与 microRNA的调节共同发挥作用.
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MicroRNA-222促癌机制研究进展
一、microRNA及miR-222概述
microRNA是一类内源性非编码小RNA,长约21~23 nt。一个miRNA可以调节多个靶基因mRNA,可在翻译水平或者转录后水平调控基因表达[1]。有数据显示,受microRNA转录后调控的基因高达人类总基因的60%[2],而大量研究亦证实,microR-NA对细胞增殖、分化、细胞周期变化及其凋亡具有重要调节作用,进而影响肿瘤发生发展[3]。 -
滋养细胞生物学功能异常相关疾病的微小RNA调控
滋养层细胞是胚胎与母体直接接触的部分,滋养细胞侵入母体蜕膜后,不被母体排斥而快速增殖是妊娠成功的关键因素之一,同时滋养细胞有节制地侵入子宫内膜基质也是正常妊娠所必需。滋养层细胞生物学功能的异常可能导致自然流产、妊娠高血压疾病及胎儿生长受限等病理妊娠。
微小RNA( microRNA,miRNA)是近年新发现的广泛存在于真核生物中的一类内源性的非编码单链RNA分子,长度约为19~25个核苷酸。可通过降解靶mRNA或者抑制靶mRNA的翻译,对目的基因进行转录后调控,参与调控细胞分化、增殖、凋亡以及肿瘤发生等重要的生理病理过程,其表达异常有可能导致疾病的发生。近来已开始探索miRNA分子在滋养细胞中的表达和调节作用。本文对这一新兴领域中对于滋养细胞生物学功能异常相关疾病的miRNA调控的研究现状及进展作一综述。 -
肝特异性微小RNA-122在原发性肝癌中的应用研究进展
微小RNA(MicroRNAs,简称为miRNAs)是一类长度约19~25个核苷酸的非编码单链小分子RNA,通过与mRNA的3’端非编码区(3'untranslated region,3'UTR)结合而介导转录后调控,在细胞的增殖、分化、凋亡、个体的发育以及疾病的发生发展中发挥着重要的作用,具有高度保守性和内源性.研究表明,miRNAs在正常组织和肿瘤组织中的表达具有明显不同,且多数miRNA基因位于与肿瘤形成相关性脆弱基因位点,推测miRNA在肿瘤发生发展过程中可能起重要作用,检测组织和(或)体液中的miRNA分子表达的变化可作为肿瘤诊断和预后评价的判断指标,为肿瘤诊断和靶向治疗提供了新的思路[1].
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3'非翻译区在转录后调控中的作用
从生物体的能量消耗小化原则来讲,生理意义上的基因表达调控多发生在转录水平,尤其是转录伊始不难理解--这样可以避免进行无用的转录过程和mRNA的剪切工作,从而避免了大量的资源浪费.相应地,目前被人们所熟悉的基因表达调控位点几乎都集中在基因的5'端,即转录调控的主要作用位置.然而基因不只有5'端序列,其3'端序列以长度推测亦应富含信息量.目前普遍被接受的一种观点是,基因的3'端,尤其是3'非翻译区涉及了基因转录后水平的调控过程,主要参与mRNA的稳定性、基因表达的定位以及翻译效率等生理进程的调控,具体可能在干细胞增殖分化、性别决定、神经元发生、血红细胞生成等过程中发挥作用.
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miRNA在心肌梗死中的保护作用机制的研究进展
目的:miRNA是一类内源性非编码的单链RNA分子,长度约22个核苷酸,这些非编码小分子RNA与靶基因mRNA分子的3’端非编码区域(3’UTR)互补配对后,通过降低该mRNA分子的稳定性和抑制其翻译两种方式对靶基因进行转录后调控。目前,已发现千余种人类miRNA,它们在炎症、发育、凋亡、肿瘤等多种生理病理过程中发挥着重要作用。近年来,miRNA在心血管疾病的发生和发展中的作用不断得到证实,与心肌梗死更是关系密切。为了更好阐明miRNA与心肌梗死的关系,本文在相关文献的基础上,对miRNA在心肌梗死中的保护作用机制进行综述。
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高血压相关miRNAs及其单核苷酸多态性研究进展
在精准医学的时代背景下,有关慢性病的精准诊断和个体化精准治疗得到了飞速发展,其中以miRNAs为代表的表观遗传学和转录组学研究更是成为慢性病病因学研究的基石。miRNAs参与转录后调控的机制以及与miRNAs相关的单核苷酸多态性(SNPs)位点是近20年研究的热点。高血压作为常见的慢性病是亟待解决的重大公共卫生问题,其表观遗传组学水平的研究自从第一个miRNAs被发现以来就未曾停歇,也取得了一定突破。本文主要整理了近些年报道的与高血压相关的miRNAs及其SNPs,从研究对象、表达水平变化和可能的致病通路等角度进行总结,旨在为实现高血压的精准诊断和精准治疗提供理论依据。
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miRNA-193a在肾细胞癌中的表达情况
miRNA是一类长度很短的非编码、转录后调控单链小分子的RNA,长度约22个核苷酸,它控制着真核细胞的诸多功能,影响其基因表达、细胞周期和个体发育等行为[1].这类小核酸分子可能发挥着类似癌基因或抑癌基因的作用,参与了人类肿瘤的发生和发展[2].
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微小RNA在B细胞淋巴瘤中的研究进展
微小RNA(miRNA)是一类非编码单链小分子RNA,在转录后水平通过促进靶mRNA降解或抑制翻译过程而发挥负调控基因表达的作用.近年研究表明,miRNA与疾病发生密切相关,在包括B细胞淋巴瘤在内的多种恶性肿瘤的发病机制、早期诊断及新治疗策略的研究中意义重大.文章就miRNA的生物合成、作用机制及其与人类肿瘤发生、发展的关系等方面进行综述,并着重介绍miRNA在B细胞淋巴瘤中的研究进展.
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miR-206/miR-613对OATP1B1基因和蛋白表达的影响及其机制研究
探究miR-206/miR-613对OATP1B1基因和蛋白表达的影响及其调控机制.通过生物信息学软件预测可靶向作用于OATP1B1 mRNA 3'-UTR的miRNAs;采用RT-qPCR和Western blot等分子生物学方法检测miR-206/miR-613、OATP1B1 mRNA及蛋白表达水平;采用双荧光报告基因法,研究miR-206/miR-613作用于OATP 1B1表达的确切机制.结果发现,miR-206/miR-613种子序列与OATP 1B1 mRNA 3'-UTR互补配对,具有较高的特异性,且它们之间形成的二级结构较为稳定.与对照组相比,过表达miR-206/miR-613,HepG2细胞中OATP1B1的蛋白表达水平分别下调24.7%、38.8%,反之,抑制其表达OATP1B1的蛋白表达水平分别上调25%、38.2%,而OATP 1B1 mRNA表达均未发现明显改变;与对照组相比,过表达或抑制表达miR-206/miR-613,pMIR/OATP1B1-WT报告基因荧光素酶活性分别下降35%、30%或增加33.1%、32.5%,而在OATP 1B1 mRNA3'-UTR miR-206/miR-613结合位点突变的报告基因系统中,过表达或抑制表达miR-206/miR-613对荧光素酶活性均无影响.因此,miR-206/miR-613通过直接靶向作用于OATP1B1 mRNA 3'-UTR,从而转录后调控OATP1B1蛋白表达.
关键词: miR-206 miR-613 有机阴离子转运多肽1B1 转录后调控 -
MicroRNA对药物转运体调控的研究现状
MicroRNA作为一类重要的功能性非编码RNA,主要通过与靶基因mRNA3'端非编码区的互补结合来调节其表达.MicroRNA既可以直接靶向药物转运体的mRNA,继而调控其表达,亦可通过调节某些经典通路的信号蛋白,间接调控转运体的表达.因此,本文系统地综述了近年来microRNA对几种重要药物转运体调控的研究进展.
关键词: 微小RNA 药物转运体 腺苷三磷酸结合盒转运蛋白 溶质载体 转录后调控 -
MiRNA-129与肿瘤
microRNA是一类广泛存在于真核生物中的长度约为21~25碱基的内源性小型非编码RNA,能够识别特定的目标mRNA,超过50%的miRNAs基因定位在肿瘤相关的脆性位点或基因组区域,提示miRNA的表达可能与肿瘤密切相关.若对这些基因进行转录后调控,miRNA则发挥促癌或抑癌的作用.
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基因表达与mRNA结构的关系
基因的转录调控和转录后水平的调控在基因表达过程中起着重要作用.mRNA的结构与基因表达调控的关系非常密切.目前对于mRNA结构对表达的影响因素,主要集中于起始密码子和S-D序列的结构和间隔长度、基因和基因间的间隔区序列和长度,5'末端与3'末端非翻译区、多聚(A)尾、内含子序列对翻译起始效率、发夹结构对mRNA的稳定性的影响和mRNA翻译起始区等对基因表达影响.
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细菌RNA结合蛋白Hfq研究进展
Hfq蛋白是细菌中重要的转录后调控子,参与调节细菌的生长、代谢、压力环境适应能力等多种生命活动,影响细菌的多种生理代谢过程.在致病菌中,Hfq蛋白与细菌的毒力密切相关.Hfq主要通过结合RNA来影响其稳定性,或者是通过辅助非编码小RNA(sRNA)与mRNA结合来调节靶基因的表达.文章对Hfq在致病菌中的作用及寻找Hfq靶标RNA的研究方法进行了综述,以期为Hfq的功能研究奠定基础.
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microRNAs调控自噬研究进展
microRNAs是真核生物中内源性表达的非编码RNA,长约18~25个核苷酸。成熟的microRNAs通过碱基互补配对与靶基因3'UTR区域结合降解目标mRNA或抑制其翻译来调控基因的表达水平,是一种对基因表达的转录后调控方式。研究表明,microRNAs在细胞的增殖、分化及死亡等生理病理过程中均具有调控作用,本文将对其在Ⅱ型程序性细胞死亡即自噬过程中的作用进行综述。
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microRNA在HIV感染中的研究进展及应用前景
微小RNA(microRNA,miRNA)是一种重要的转录后基因表达调节因子,在所有基因转录本中半数以上受到这一方式的精细调节[1].大多数成熟的miRNA长度为19~22个核苷酸,来源于基因组的非蛋白质编码区域,通过蛋白复合体与mRNA转录本的3'端非翻译区互补结合,一个miRNA可以与数百种靶序列结合.因此,miRNA诱导的转录后基因调控十分复杂.目前在Sanger数据库中已发现2000余种人类miRNA.在过去的10年中,一些研究显示,内源性宿主miRNA的表达变化在人免疫缺陷病毒(HIV)感染中也发挥重要作用[2].这些miRNA对于维持HIV-1在静止CD+4 T细胞中潜伏具有关键作用,但也能影响重要免疫调节分子(如细胞因子)的表达,这些分子对于HIV-1感染者免疫功能障碍的发生可能具有重要作用.现将HIV-1感染中miRNA的研究进展以及临床应用前景综述如下.
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抵抗素刺激软骨细胞趋化因子CCL3及CCL4基因表达及机制
背景:既往研究表明抵抗素可刺激软骨细胞产生大量趋化因子,在炎症性关节病变中具重要作用,但具体作用机制未明。
目的:进一步探讨抵抗素刺激软骨细胞趋化因子CCL3及CCL4基因表达上调的机制。
方法:培养人源性软骨细胞,T/C-28a2细胞及ATDC5细胞,采用qPCR检测抵抗素刺激趋化因子基因的作用,C/EBPβ表达,核因子κB亚型及软骨特异性miRNAs。给予核因子κB抑制剂(IKK-NBD)和C/EBPβ抑制剂(SB303580),对C/EBPβ及核因子κB的共同调节作用进行检测。在给予抵抗素刺激或无抵抗素刺激时分别进行亚细胞结构定位检测。
结果与结论:①抵抗素可非依赖性上调趋化因子基因表达。②软骨细胞对抵抗素刺激应答具有非严格细胞特异性,通过C/EBPβ抑制剂、核因子κB及一些软骨细胞特异性miRNAs,可对趋化因子基因表达进行联合调控。③一过性核因子κB活性增高可增强C/EBPβ活性,且两个转录因子对趋化因子基因CCL3及CCL4的作用均为非依赖性。 -
转录后调控在神经轴突损伤后修复中的作用
和发育阶段相比,受损的轴突再生面临更为艰难的挑战. 细胞内各种信号通路需要精巧的协同,在时空上调控蛋白的表达和运输,从而不断适应外部环境的变化. 相较于转录水平的调控,转录后调控对新蛋白的合成和组装,以及对运输进行时时地的控制具有不可替代的优势,是轴突成功再生必不可少的条件. 本文从转录后调控的两个基本元素( miRNAs和RBPs) 出发,阐述其作用机制,探讨它们如何在神经轴突再生的过程中发挥重要作用,以期为临床神经再生的基础研究和新药开发提供新的思路和方向.