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肺炎支原体重组蛋白抗原与膜蛋白抗原诊断试剂在临床应用中的比较
目的 以肺炎支原体(Mp)重组蛋白做包被抗原检测临床呼吸道感染患儿血清标本,验证重组蛋白抗原的诊断价值.方法利用Mp重组蛋白抗原包被酶标板,ELISA法检测临床疑似Mp感染患儿的血清标本,同时用Mp膜抗原被动凝集试验平行检测,并对比分析两种方法的检测结果.结果 重组蛋白抗原ELISA检测Mp抗体的阳性率为49.00%(98/200),膜抗原被动凝集试验Mp抗体的阳性率为63.50%(127/200).两种检测方法的总符合率为70.50%.阳性符合率为58.45%.结论 Mp重组蛋白抗原ELISA检测肺炎支原体感染有诊断价值,其特异性优于膜抗原被动凝集试验.
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3种结核分枝杆菌特异性重组蛋白诊断价值的初步研究
目的 评价重组38kD、Ag85B和16kD蛋白3种重组蛋白的诊断价值.方法 采用蛋白免疫印迹方法观察本实验室克隆表达的结核分枝杆菌38kD、Ag85B和16kD蛋白抗原用于结核病血清学诊断的灵敏度,及3种抗原联合应用诊断的灵敏度.结果 共对62例结核病人血清和19例健康人血清进行了IgG抗体检测,结果显示重组38kD检测灵敏度为51.6%,假阳性率为5.2%;重组Ag85B灵敏度为35.5%,重组16kD的灵敏度22.6%,无1例健康人血清与重组Ag85B及16kD蛋白反应.3种蛋白联合诊断的灵敏度为77.4%,假阳性率为5.2%.结论 多种蛋白抗原联合应用将是结核病血清学诊断试剂的发展方向.
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TTV蛋白抗原在大肠杆菌中的表达
目的:用原核系统表达TTV的重组蛋白抗原,建立诊断TTV 感染的特异性方法. 方法:采用PCR方法扩增TTV ORF2基因,将之插入到测序质粒载体中进行测序,验证序列正确后再嵌入到原核表达载体pQE30,并转化大肠杆菌M15菌株,进行诱导表达.用SDS-PAGE分析表达产物.表达产物经Ni-NTA柱层析纯化后,得到纯度为90%的ORF蛋白抗原.用TTV感染者的阳性血清对该蛋白进行了Western-Blot Blotting分析.结果:经IPTG诱导后,筛选出2株高表达株. 结论:该蛋白具有良好的抗原活性.
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河南TT病毒全基因序列测定及TTV感染检测方法的研究
目的: 为了分析河南省TTV的基因结构、特征及基因变异,建立适合我国人群的诊断方法.方法: 采用巢式聚合酶链式反应(PCR)技术从河南省血液中心献血员TTV阳性血清中扩增TTV全基因;用PCR方法扩增ORF2片段,进行原核表达,并转化大肠杆菌,进行诱导表达.用SDS-PAGE分析表达产物.结果: 在国内较早地克隆测定了一株TTV河南分离株的基因序列;建立了检测TTV感染的PCR检测方法;在国内较早地表达出TTV重组蛋白抗原,抗原具有良好的活性.结论: 用表达的抗原初步建立了检测血清抗-TTV IgG抗体的间接ELISA方法,可有效地应用于TTV感染的检测.
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布氏杆菌PBP39蛋白抗原表达及免疫效果的研究
目的获得纯化的布氏杆菌PBP39重组蛋白抗原,观察PBP39重组蛋白的免疫原性.方法扩增不同种布氏杆菌PBP39基因,测序、连接表达载体PET32a,诱导表达,柱纯化PBP39重组蛋白抗原,免疫BALB/c小鼠,ELISA检测抗体及抗体亚型.结果我国牛、羊、猪布氏杆菌PBP39基因与国外已报道的PBP39编码基因不完全相同.在蛋白N端58位碱基后多一G,造成移码突变.故在85、86、87位编码终止子TCA.而在134、135、136位的ATG又编码了新的起始密码.布氏杆菌PBP39蛋白在大肠杆菌高效表达,表达量达40%,纯化重组蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,产生了较高水平的特异性抗体免疫应答,抗体亚型主要是IgG1.结论我国牛、羊、猪布氏杆菌PBP39编码抗原蛋白同国外已报道的不完全相同,纯化的PBP39重组蛋白抗原可诱导高水平的抗体反应,为筛选布氏杆菌病新型疫苗保护性抗原分子奠定了基础.
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梅毒螺旋体TPN17重组抗原的表达及其在献血筛查中的应用
梅毒是严重危害人类健康的疾病之一。近年来，梅毒的发病率呈上升趋势，在一些高危人群中更为严重。检测感染者血清梅毒螺旋体抗体是诊断梅毒螺旋体感染的主要方法。常用的方法有性病实验室研究试验(VDRL)、荧光螺旋体吸收试验(FTA-ABS)和梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)，近年来国外开始采用酶联免疫吸附实验方法(ELISA)检测血清梅毒螺旋体抗体［1］。建立检测梅毒螺旋体抗体的关键是制备特异的梅毒螺旋体抗原。梅毒螺旋体不能体外培养，获得其自然抗原通常是从完整梅毒螺旋体中分离其抗原成分，制备相当困难［2］。因此，用基因工程方法表达梅毒螺旋体蛋白抗原是制备特异抗原的有效途径。TPN17蛋白(Treponema pallidum 17 kilodalton protein， TPN17抗原)是梅毒螺旋体重要的结构蛋白之一，在梅毒螺旋体感染免疫中具有重要作用。笔者用基因工程表达梅毒螺旋体的TPN17抗原，并建立了检测梅毒螺旋体抗体的ELISA方法。现将结果报告如下。
