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mPEG-SPA修饰人红细胞RhD血型抗原的研究
目的 观察mPEG-SPA(甲氧基聚乙二醇-琥珀酸亚胺丙酸酸酯)对人红细胞RhD血型抗原修饰的效果,并探讨mPEG-SPA修饰的可行性.方法采,用mPEG-SPA修饰人红细胞血型RhD抗原,并观察其对红细胞形态、结构和功能的影响.结果 2.0mmol/L的mPEG-SPA在pH8.0室温条件下可有效遮蔽红细胞表面RhD抗原,且与红细胞结合牢固,对红细胞的形态、渗透脆性、自身溶血率、红细胞膜胆固醇含量、乙酞胆碱酯酶活性、Na+K+ATP酶活性、2,3-DPG含量、血沉值、变形指数和常规指标均无明显影响.结论 采用2.0 mmol/L mPEG-SPA遮蔽人红细胞RhD抗原获得了初步成功.
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慢性淋巴细胞白血病患者RhD抗原减弱的原因分析1例
目的 分析1例慢性淋巴细胞白血病患者RhD抗原减弱的原因.方法 应用血清学方法鉴定该例标本的ABO、Rh血型及红细胞血型抗体鉴定.PCR-SSP方法扩增RH基因.结果 先证者为A型,RhD抗原盐水介质阴性,经间接2批抗人球蛋白方法(IAT)确认样本为RhD阳性,血清中检测抗-D.PCR-SSP检测RH基因为Dccee.结论 慢性淋巴细胞白血病患者RhD抗原减弱,产生类抗-D,导致RhD抗原检测及配血困难.
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1例RhD阳性变异型的鉴定及血清中检出抗-D的分析
目的 分析鉴定1例RhD阳性变异为RhD阴性血型的血清型及基因分型结果,同时做血清不规则抗体鉴定.方法 应用常规血型血清学方法鉴定红细胞抗原及血清中的抗体,用PCRSSP方法进一步做RhD抗原基因分型.结果 该患者2010年7月～2012年3月多次血型血清学方法查RhD阳性,2012年4月再次入院作血型血清学检查RhD阴性并作阴性确认,血清中抗体鉴定为抗-D；进一步做RhD基因分型结果为D基因.结论 该例应为RhD抗原暂时缺失,并产生抗-D,RhD暂时缺失应为疾病所致.
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随机噬菌体肽库筛选血型D抗原模拟多肽方案的建立及初步验证
目的 探讨随机噬菌体十二肽库筛选血型D抗原模拟多肽的影响因素,以建立佳筛选方案.方法 对比洗脱时间分别为4、8、12、16和30 min的洗脱液滴度;3轮清洗缓冲液中Tween 20浓度分别为0.1％、0.2％、0.5％和分别为0.1％、0.5％、0.5％时每轮淘洗的投入/产出比,以及3轮封闭缓冲液均为0.5％ BSA和分别为0.5％ BSA、1％明胶、5％脱脂奶时每轮淘洗的投入/产出比,以分析筛选效果,得出佳筛选方案.对采用佳筛选方案筛选得到的阳性克隆测定其DNA序列和做抗体竞争抑制试验检测D抗原模拟表位.结果 洗脱8 min时洗脱液滴度为(2.3t±0.25)×106 pfu/mL,洗脱4、12、16和30 min时的洗脱液滴度与之相比明显下降(P＜0.01).当洗脱时间为8 min且3轮封闭缓冲液均为0.5％ BSA时,3轮淘洗清洗缓冲液Tween 20浓度分别为0.1％、0.5％、0.5％时投入/产出比分别为1.69×107、4.95×105、9.58×102,与清洗缓冲液Tween 20浓度分别为0.1％、0.2％、0.5％时投入/产出比分别为2.70×107 、4.57 × 105、1.14×103相比,对筛选效果影响不大.当洗脱时间为8 min且3轮淘洗清洗缓冲液Tween 20浓度分别为0.1％、0.5％、0.5％时,3轮封闭缓冲液分别为0.5％BSA、1％明胶、5％脱脂奶时投入/产出比分别为1.93×107、6.44×103、6.23×101,明显优于3轮淘洗封闭缓冲液均为0.5％ BSA时的投入/产出比(分别为1.94×10 7、1.66 × 105、8.23×102).通过优化方案筛选得到1个抑制率约为50％的十二肽序列“VHWDFRQW-WQPS".结论 洗脱时间、清洗缓冲液成分以及封闭缓冲液类型对筛选效率有一定影响.洗脱时间为8 min,3轮淘洗的清洗缓冲液Tween 20浓度分别为0.1％、0.5％、0.5％和3轮淘洗的封闭缓冲液分别为0.5％ BSA、1％明胶、5％脱脂奶粉时,筛选效果较优,可获得较理想的血型D抗原模拟多肽.
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用于RhD抗原流式细胞检测的固定透化方法评价
目的 寻找具有回收率高且适于RhD抗原荧光检测的红细胞固定透化方法.方法 分别采用4％甲醛、4％多聚甲醛、2％戊二醛对红细胞进行固定,同时采用4％甲醛-Triton X-100、4％多聚甲醛-Triton X-100、2％戊二醛-Triton X-100对红细胞进行透化固定,未处理红细胞作为对照.冰上固定20 min,洗涤后计算红细胞回收率.在各组红细胞中加入1∶128的RhD IgG单克隆抗体,同时设组内空白对照,37℃孵育30 min.PBS洗涤3次后加入1∶200的FITC荧光抗体,37℃孵育30 min,PBS洗涤3次后流式细胞仪检测.结果 2％戊二醛及2％戊二醛-Triton X-100 2组的回收率分别为72.83％与72.80％,高于对照组(58.32％),甲醛及多聚甲醛2组的回收率在4.00％左右,远低于对照组.流式检测结果显示,不同固定剂的荧光本底均高于未处理红细胞.与对照组相比甲醛与多聚甲醛会减弱RhD抗原荧光强度,而戊二醛不影响RhD荧光强度,戊二醛-Triton X-100可增强RhD抗原检测的灵敏度.结论 2％戊二醛-Triton X-100固定透化法不仅可得到较高的红细胞回收率,且RhD荧光检测的灵敏度也得到提升,是荧光检测RhD抗原较理想的固定透化方法.
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建立D抗原免疫刺激T细胞活化模型的研究
目的 了解RhD抗原免疫刺激途径,建立D抗原免疫刺激活化的模型.方法 选取RhD血型不同的供者,采用红细胞与单个核细胞直接混合培养,以及DC细胞负载RhD抗原后与单个核细胞混合培养2种实验方案,流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞的活化量.结果 RhD(-)个体的DC细胞负载D抗原后,可以有效活化RhD-个体的CD4+和CD8+T细胞,而直接混合培养方式则不能.结论 本研究采用DC细胞负载RhD抗原的方法,成功诱导了RhD(-)个体的T细胞活化和增殖,验证了RhD抗原的胸腺依赖性抗原特性,建立了D抗原免疫刺激T细胞活化的模型,可以用于输血免疫的研究.
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筛选及鉴定IgG型单克隆抗-D噬菌体克隆的实验研究
目的 利用随机噬菌体12肽库筛选出血型D抗原的模拟多肽并验证.方法 采用IgG型单克隆抗-D筛选噬菌体随机12肽库,测定每轮筛选后洗脱物与抗-RhD的结合情况.对经特异性筛选得到的阳性噬菌体克隆进行DNA序列测定,将推导出的12肽氨基酸序列进行同源性比较,通过凝集抑制试验验证阳性噬菌体与IgG型单克隆抗-D的反应.结果 随着筛选轮次增加,噬菌体洗脱物与抗-RhD的结合力逐渐增强.经过4轮淘洗后,得到8个亲和力较强且具有较高重合率的保守区域的12肽序列.凝集抑制实验表明具有相同氨基酸序列的阳性噬菌体对IgG型单克隆抗-D与RhD阳性红细胞的凝集反应具有抑制作用.结论 随机噬菌体12肽库筛选得到的血型D抗原模拟多肽,为RhD结构与功能研究及研制针对RhD新生儿溶血病的新型诊断抗原、制备特异疫苗以及探索新的治疗方法提供实验基础.
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RhDⅥ Ⅲ表型分子生物学研究及其临床意义
目的 了解RhD抗原阳性(变异)产生IgG抗-D个体的RHD基因结构. 方法 采用血清学方法 检测个体RhD抗原,鉴定RhD变异个体体内抗体的性质.采用PCR-SSP方法 检测其RH血型基因,观察RhD抗原变异体基因构成情况.结果 变异个体Rh血型为RhDⅥⅢ型(D抗原不完全型),单倍体型CDe/cde.结论 准确的RhD血型鉴定对制定安全有效的临床输血策略和对育龄妇女采取恰当措施预防新生儿溶血病意义重大.
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RhD阳性血影细胞的制备及应用
目的:探讨用不同渗透浓度磷酸盐液(PB)制备的RhD阳性血影细胞的抗原性及其在抗-D抗体分离中的作用.方法:用不同渗透浓度PB作为裂解液,将遗传表现型为CCDee的RhD阳性O型红细胞制备成血影细胞,观察其抗原性;以血影细胞为固相抗原,用亲和层析法从抗D含量为0.814 mg/L的健康人血浆中分离抗-D抗体,检测相关指标.结果:pH7.4、30 mmol/LPB制备的血影细胞形态完整,保持较强的抗原性;成功获得抗-D抗体,回收率达到84.65%,IgG单体加二聚体含量为99.3%,不含抗A、抗B血型抗体以及IgA、IgM和血红蛋白.结论:用pH7.4、30 mmol/L PB制备的血影细胞可作为固相抗原,并能从低效价血浆中分离纯化抗-D抗体.
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RhD初筛阴性患者Du型、Del型及CE表型的血清学检测分析
目的 探讨Rh血型D抗原初检阴性患者血标本中Du型、Del型及CE表现的检测结果和临床意义.方法 选取常规血清学方法初筛RhD阴性的患者血标本再进行C、c、E、e抗原表型检测,采用间接抗人球蛋白试验检测Du抗原,对Du抗原阴性的患者血标本进行吸收放散试验检测Del抗原.结果 对初筛RhD抗原阴性的患者血标本经抗人球蛋白试验,确认为Du型5例(6.6％),其RhCE表型为Ccee 2例、ccee 2例、CcEe 1例.对Du抗原阴性患者血标本进行吸收放散试验,确认为Del型15例(19.7％),其RhCE表型为Ccee 7例、ccEe 4例、CCee 3例、CcEe 1例.76例RhD阴性患者血标本中,RhCE表型为:Ccee 28例、ccEe 8例、CCee 5例、CcEe 3例、ccee 32例.结论 对初筛RhD阴性的患者血标本,再进行间接抗人球蛋白试验及吸收放散试验,确认是否为Du型、Del型及CE表型检测,对确保检测结果的准确性和输血安全有重要意义.
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L2型急淋化疗后RhD抗原丢失1例
1 病例报告女,32岁,汉族. 因反复低热、咽痛、乏力3+ mo,抗感染治疗无效,经骨穿确诊为急淋L2型白血病(原+幼84%),于2000-04-12转入我院,复查骨穿(原+幼91.2%). 患者先后住院6次,行DCVP及DVLP化疗,化疗后骨髓抑制严重,全身状况差,曾多次输注浓缩红细胞及血小板悬液. 2000-04/06/07三次住院期间,检查血型为AB型,RhD(+),第四,五次入院后再次复查血型为AB,RhD(-)及Du型. 给予患者输入AB和O型RhD(-)血. 此后,第六次入院后再次复查血型为AB,RhD(+),其他Rh因子Ccee无变化. 血型血清学检查,2000-09,RhD(-)确认试验结果:盐水法单抗D1(-),单抗D2(-),抗D人血清(-);抗人球法,
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人类红细胞RhD抗原的T-B细胞联合表位的生物信息学预测
目的 研究红细胞血型系统RhD抗原的蛋白质结构,预测该抗原的T-B细胞联合表位,准确定位T-B联合表位在抗原表面的分布情况.方法 采用各种预测软件和在线预测工具,根据RhD抗原的理化性质预测其蛋白质二级结构以及T、B细胞表位,获得T-B联合表位所在的氨基酸残基的位置.结果 红细胞RhD抗原有T-B联合表位2个,氨基酸残基所在的位置:36-54,66-82.结论 经过生物信息学方法计算获得的2个表位可以作为确定人类红细胞RhD抗原潜在T-B联合优势表位的参考.
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RH抗D弱阳性输血病例1例
1病例简介患者，女，39岁，孕3产3。2015年8月24日入院生产，于2015年8月30日产下一子，产后血红蛋白为79g/L，伴阴道出血，24日入院时，检验科采用微柱凝胶卡式检验血型报为A,RH(-)，30日患者输血复查血型玻片法为Rh抗D弱阳性，微柱凝胶卡式法为阴性，为患者输血安全故建议患者输注RH（-）红细胞2u，输注后患者未出现不良反应，报道如下。
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RH抗D弱阳性输血病例1例
1病例简介患者，女，39岁，孕3产3。2015年8月24日入院生产，于2015年8月30日产下一子，产后血红蛋白为79g/L，伴阴道出血，24日入院时，检验科采用微柱凝胶卡式检验血型报为A,RH(-)，30日患者输血复查血型玻片法为Rh抗D弱阳性，微柱凝胶卡式法为阴性，为患者输血安全故建议患者输注RH（-）红细胞2u，输注后患者未出现不良反应，报道如下。
