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MicroRNA-223在淋巴细胞白血病原代细胞中表达及作用机制的研究
本研究旨在探讨急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)原代细胞中MicroRNA-223与LMO2基因的表达水平及MicroRNA-223的作用机制.应用人淋巴细胞分离液分选ALL、CLL患者及正常人骨髓中淋巴细胞,在ALL、CLL患者骨髓淋巴细胞中转染MicroRNA-223的类似物靶向升高细胞中MicroRNA-223的表达,在正常人骨髓淋巴细胞中转染MicroRNA-223抑制物靶向敲低细胞中MicroRNA-223的表达.转染后培养72 h,用RT-PCR方法检测转染前后MicroRNA-223和LMO2表达量及其相关性,并用流式细胞术进一步观察细胞凋亡和细胞周期的变化.结果表明,转染MicroRNA-223类似物前,ALL、CLL患者中MicroRNA-223表达水平为(433.11±144.88),LMO2水平为(807.10±238.41),正常人转染MicroRNA-223抑制物前,MicroRNA-223表达水平为(949.59±267.39),LMO2的表达为(455.32±176.83)；MicrRNA-223的表达在正常人中明显高于ALL、CLL患者(P＜0.05),而LMO2的表达在正常人中明显低于ALL、CLL患者(P＜0.05).转染后,ALL、CLL患者中MicroRNA-223表达明显增加(571.86±142.00) (P ＜0.05),而LMO2表达明显减少(651.97±230.12) (P ＜0.05)；在正常人中MicroRNA-223表达明显降低(646.32±172.93) (P ＜0.05),LMO2的表达明显升高(541.27±158.86) (P ＜0.05).转染后细胞周期及细胞凋亡率的变化表现为,在ALL、CLL患者转染前细胞周期G1/G2细胞比例为(94.75±3.15)％,S期为(5.14±3.12)％；转染后G1/G2细胞比例明显增加(97.03±2.08)％ (P ＜0.05),在S期明显减少(2.97±2.08)％(P＜0.05)；转染前细胞凋亡率为(54.47±8.72)％,转染后为(60.48±8.81)％,后者明显增加(P＜0.05).正常人转染前细胞周期G1/G2细胞比例是(96.73±2.26)％,S期是(3.25±2.26)％；转染后G1/G2细胞比例明显减少(94.55±2.77)％(P＜0.05),在S期明显增加(5.45±2.77)％(P＜0.05),细胞凋亡率为(59.02±10.20)％,转染后明显减少(51.96±10.20)％ (P ＜0.05).结论:淋巴细胞白血病原代细胞中MicroRNA-223表达降低,LMO2表达增高,导致淋巴细胞增殖周期及凋亡异常,这可能是淋巴细胞白血病的发病机制之一.
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microRNA-223调控人胚胎干细胞向树突细胞分化
目的:建立人胚胎干细胞(ESC)向树突细胞诱导分化的新策略,探讨microRNA-223(miR-223)在人胚胎干细胞源树突细胞产生过程中的调控作用及其分子机制.方法:采用人胚胎干细胞在胞外基质Ⅳ型胶原蛋白上直接贴壁培养,加入造血生长因子分步向造血干/祖细胞、共同髓系祖细胞和树突细胞诱导的方案,通过形态学、流式细胞术和造血集落形成实验鉴定分化细胞;人胚胎干细胞经慢病毒转染过表达miR-223或抑制其表达后启动向树突细胞分化,比较不同miR-223表达水平下分化细胞中造血集落形成的数目和表面标记物的表达量;应用双荧光素酶报告基因检测验证TGFBR3是miR-223发挥作用的直接靶标.结果:人ES细胞成功诱导为树突细胞,分化细胞中表达CD83比例可达82％,在整个分化过程中miR-223表达呈上调趋势;添加miR-223模拟物组分化细胞表达CD34+ CD45+、CD34+ CD45+以及CD83+的比例均显著高于添加miR-223抑制剂组和阴性对照组(P＜0.05);添加miR-223抑制剂组分化细胞表达各阶段细胞标记物显著低于阴性对照组(P ＜0.05);添加miR-223模拟物组分化细胞出现大约759个CFU/105细胞数,显著高于其它各组(P＜0.05);双荧光素酶报告基因结果显示,miR-223显著抑制TGFBR3-3'UTR结构的荧光素酶活性(下降了37％)(P＜0.05),而且TGFBR3-3'UTR突变型的荧光素酶活性显著高于野生型(P＜0.01);随着向树突细胞分化成熟,添加miR-223模拟物组分化细胞表达TGFBR3水平逐渐下降,而添加miR-223抑制剂组由于内源性miR-223受到抑制而明显上调TGFBR3的表达.结论:miR-223调控人胚胎干细胞向树突细胞分化,可能通过直接作用于靶标TGFBR3而促进胚胎干细胞源树突细胞的产生.
关键词： 人胚胎干细胞 树突细胞 MicroRNA-223 诱导分化 TGFBR3 -
乳腺癌患者抑郁状态评分及其相关microRNA表达的临床分析
目的 分析乳腺癌患者抑郁状态,考察其与相关基因表达的相关性及对临床的实际意义.方法 选择2015年1月-2016年12月112例确诊的乳腺癌女性患者作为研究对象.患者年龄32 ～68岁,平均年龄(48.0±5.5)岁.采用汉密顿抑郁量表(HDMD)评估患者的抑郁状态,并据此将患者分为抑郁组和非抑郁组.应用实时荧光定量PCR技术检测2组患者在microRNA-320a、microRNA-17-5p、microRNA-223-3p、microRNA-451a、microRNA-223、microRNA-452等microRNA表达的差异性,分析其与患者抑郁状态的相关性.结果 抑郁状态患者的HAMD得分均值[(13.7±1.6)分]明显高于非抑郁状态者[(3.6±1.1)分](t =39.516,P＜0.05).抑郁组在microRNA-320a、microRNA-451a、microRNA-223表达水平与非抑郁组比较差异均有统计学意义(统计量Z值分别为6.252、5.183、7.904,均P＜0.05).Pearson相关性分析发现,乳腺癌患者抑郁状态与年龄分布(r=0.420,P=0.040)、临床分期(r=0.610,P=0.013)、microRNA-320a(r=0.500,P=0.023)、microRNA-451a(r=0.430,P=0.034)、microRNA-223(r=0.660,P=0.010)等因素的改变有关.结论 临床可通过监测HAMD得分、microRNA-320a、micmRNA-451a、microRNA-223等因素变化,评判乳腺癌患者的抑郁状态,为后期治疗提供指导.
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microRNA-223在乳腺癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨microRNA-223(miR-223)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义,为乳腺癌的临床诊疗提供线索.方法采 用实时荧光定量PCR法,检测45例乳腺癌组织、癌旁组织中miR-223的表达,分析miR-223表达与乳腺癌临床病理特征、MMP-9表达的关系.结果 乳腺癌组织中miR-223的表达量明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P＜0.05).miR-223表达与乳腺癌的TNM分期及淋巴结转移有关(P＜0.001),与年龄、是否绝经、肿瘤大小、雌激素、孕激素、增殖细胞核抗原、CerbB-2表达无关(P＞0.05).乳腺癌组织中miR-223表达与MMP-9表达呈正相关关系(P＜0.05).在乳腺癌MCF-7细胞中,miR-223类似物能够显著促进MMP-9的表达.结论 miR-223在乳腺癌组织中高表达,且其表达水平与临床TNM分期及淋巴结转移有关,miR-223可能通过调节MMP-9的表达促进乳腺癌淋巴转移.
关键词： MicroRNA-223 乳腺癌 临床病理特征 -
microRNA-223对糖基化终产物诱导人脂肪间充质干细胞凋亡和氧化应激影响的体外研究
目的 观察microRNA-223 (miR-223)对糖基化终产物(AGE)诱导人脂肪间充质干细胞(hADSC)凋亡和氧化应激的影响.方法 采用酶消化法分离培养hADSC,并应用流式细胞术对表面抗原CD14、CD34、CD45、CD90、CD105和人类白细胞抗原DR(HLA-DR)进行检测.将hADSC分为牛血清白蛋白(BSA)对照组、AGE修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)作用组、miR-223模拟物转染组、miR-223模拟物转染+AGE-BSA组、miR-223抑制物转染组和miR-223抑制物转染+AGE-BSA组.应用CCK-8法和TUNEL染色检测各组细胞存活率和凋亡率,Western blot检测Cleaved Caspase3蛋白表达水平,应用双氯荧光素(DCFH-DA)试剂盒检测各组细胞活性氧(ROS)含量.结果 流式细胞术检测结果表明,原代培养的hADSC高表达CD14、CD90和CD105,不表达CD34、CD45和HLA-DR.CCK-8法、TUNEL染色、Western blot和DCFH-DA法检测结果表明,与BSA对照组相比,AGE-BSA作用组hADSC凋亡率、miR-223表达水平、Cleaved Caspase3蛋白表达水平、ROS生成显著升高,而细胞存活率下降(P＜0.05);与AGE-BSA作用组相比,miR-223模拟物转染能够进一步上调AGE-BSA引起的hADSC凋亡率、CleavedCaspase3蛋白表达水平和ROS生成增加,下调AGE-BSA引起的hADSC存活率减少(P＜0.05);与AGE-BSA作用组相比,miR-223抑制物转染能够抑制hADSC凋亡率、Cleaved Caspase3蛋白表达水平和ROS生成增加,拮抗AGE-BSA引起的hADSC存活率减少(P＜0.05).结论 miR-223高表达能够促进AGE-BSA引起的hADSC细胞凋亡和ROS生成,其可能作为调控hADSC促进糖尿病创伤愈合的新靶点.
关键词： 糖基化终产物 人脂肪间充质干细胞 MicroRNA-223 凋亡 氧化应激 -
MicroRNA-223表达与肝癌根治性切除术预后的相关性
目的 识别可以作为肝癌根治性切除术患者预后标志物的microRNA(miRNA)分子.方法 利用miRNA微阵列方法对2例原发性肝癌及对应的肺转移性肝癌进行miRNA表达分析.将原发性和转移性肝癌中表达量有2倍差异的miRNAs作为候选miRNAs分子.在miRNA验证过程中,运用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分析37例肝癌及相应癌旁非肿瘤组织中候选miRNAs分子的表达,并将其与患者的临床病理特征及生存情况进行相关性分析.结果 终选取8种miRNAs(miR-27b、122、142-5p、196a、223、590-5p、630及944)作为候选miRNA.只有miR-223表达水平与肿瘤分期、 有丝分裂指数相关.将肝癌患者分为miR-223高表达组(25例)和miR-223低表达组(12例)后发现,miR-223高表达与较高T分期、淋巴结转移、较高丝分裂指数及较高Ki-67阳性指数相关.此外,miR-223高表达还与总体生存率和无病存活率下降相关(P<0.05),中位随访时间37.9个月[疾病复发危险比为16.267(95%CI:1.732,153.789)P=0.015].结论 肝癌组织中miR-223异常表达与肝癌患者治疗结束后发生复发转移,以及无病生存时间和总生存率有关,通过检测肿瘤组织中miR-223 qRT-PCR反应有可能预测患者预后.
关键词： 肝癌 microRNA MicroRNA-223 -
抑制miR-223表达促进巨噬细胞的M2型激活
目的 观察microRNA-223(miR-223)在巨噬细胞M2型激活中的表达及作用.方法 运用慢病毒载体感染的方式在巨噬细胞中过表达或敲低miR-223的表达;应用qPCR检测不同激活状态及转染状态巨噬细胞中miR-223的表达;应用Elisa及流式细胞术检测M2型巨噬细胞的激活状态;应用Transwell迁移实验和划痕实验检测乳腺肿瘤细胞的迁移情况.结果 miR-223在单核/巨噬细胞中的表达明显高于肿瘤细胞,在单核细胞向巨噬细胞分化过程中miR-223表达下调,且IL-4或与肿瘤细胞共培养激活的巨噬细胞下调显著.敲低miR-223的表达而不是增加其表达能够促进M2型巨噬细胞标记物CCL18、IL-10和CD206的表达,并促进共培养肿瘤细胞的迁移.结论 miR-223可作为靶向肿瘤微环境调控肿瘤转移的靶点.
关键词： MicroRNA-223 巨噬细胞 乳腺肿瘤 -
microRNA-223过表达与抑制表达慢病毒载体的构建及鉴定
目的 构建microRNA-223过表达慢病毒载体及抑制表达慢病毒载体,并验证其过表达或抑制表达microRNA-223的效率.方法 设计针对microRNA-223前体的过表达基因片段及针对microRNA-223成熟体的反义片段,应用聚合酶链反应(PCR)调取目的基因及通过退火反应获得双链DNA寡聚核苷酸片段.并通过基因重组技术将目的基因片段及反义片段分别克隆到GV229及GV232慢病毒载体中,进行PCR鉴定及DNA测序比对分析,构建相应的microRNA-223过表达慢病毒载体及抑制表达慢病毒载体.利用荧光定量PCR法检测microRNA-223表达水平.结果 对阳性克隆进行PCR鉴定及DNA测序证明,microRNA-223过表达慢病毒载体及抑制表达慢病毒载体构建成功.microRNA-223过表达慢病毒载体能显著提高细胞中microRNA-223表达水平,microRNA-223抑制表达慢病毒载体能明显抑制细胞中microRNA-223表达水平.结论 成功构建microRNA-223过表达慢病毒载体及抑制表达慢病毒载体,为进一步研究microRNA-223对口腔癌发生发展的影响及其机制提供了稳定的细胞转染载体.
关键词： MicroRNA-223 慢病毒 过表达载体 抑制表达载体 -
microRNA-223在幽门螺杆菌相关胃癌中表达研究
目的 探索microRNA-223在胃癌中过表达与幽门螺杆菌(Hp)感染的相关性及其在胃癌中的致癌机制.方法 本研究采用实时定量PCR方法测定CagA mRNA的表达水平,利用Western blotting鉴定了CagA的蛋白表达.然后对部分标本进行Hp的分离培养.分别用CagA特异引物对(PF-C和PR-C)以及内参基因β-actin特异引物对(PR-A和PF-A)对其的mRNA表达水平进行定量测定,采用Takara的SYBR green实时定量PCR试剂盒对各组织标本中CagA mRNA进行定量测定.以β-aetin基因为内参对照,使用ΔΔCt法对标本中CagA mRNA水平进行相对定量,即Δ(ΔCt)=ΔCtl-ΔCt2.结果表达为Y=2-Δ(ΔCt).采用SPSS 18.0软件对结果数据进行了统计学分析.结果 38例Hp菌感染阳性标本中CagA在mRNA和蛋白水平的表达量明显高于27例Hp菌感染阴性标本.Hp菌感染阳性的胃癌组织标本中microRNA-223表达量为(5.63±0.76),显著高于Hp菌感染阴性的胃癌组织标本(1.28±0.23),P＜0.01.Hp菌感染阳性的胃癌组织标本中microRNA-223表达水平与肿瘤大小、肿瘤转移和TNM分期等胃癌患者临床病理指标密切相关P＜0.05,而与患者年龄、细胞分化和PT分期无关(P＞0.05);microRNA-223高表达患者的平均生存时间为(28.0±3.70)个月,明显低于microRNA-223低表达患者的(37.0±4.35)个月,P＜0.01.结论 microRNA-223在胃癌中的过表达与Hp感染密切相关,microRNA-223表达水平与胃癌的临床病理指标及预后的相关性,提示microRNA-223在胃癌的发生、迸发展中发挥重要调节作用.
关键词： 胃肿瘤 幽门螺杆菌 MicroRNA-223 预后
