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NPM1基因沉默的HL-60及其耐药细胞株的建立
本研究旨在构建针对HL-60细胞及其耐药细胞株(HL-60/ADR)的NPM1-RNAi的细胞模型,为研究NPM1基因在白血病耐药过程中的作用奠定实验基础.通过针对NPM1基因的shRNA与线性化的pGCSIL-GFP 载体进行连接转化,对获得的重组子(pGCSIL-GFP-NPM1-shRNA)进行PCR和测序鉴定.采用慢病毒载体系统将pHelper 1.0载体、pHelper 2.0载体与pGCSIL-GFP-NPM1-shRNA共转染293T细胞,包装成NPM1 -RNAi-LV,将慢病毒载体感染HL-60及HL-60/ADR细胞.采用实时定量RT-PCR和Western blot法分别从mRNA和蛋白水平验证建立的细胞株的转染效率.结果表明,成功构建了重组真核表达载体pGCSIL-GFP-NPM1-shRNA,并通过慢病毒载体系统包装成NPM-1-RNAi-LV;将NPM1-RNAi-LV转染至HL-60及HL-60/ADR细胞后,从mRNA水平上看,对细胞的NPM1 mRNA表达有显著抑制,达到90％以上(p＜0.05);从蛋白水平上看,对细胞的NPM蛋白表达具有显著的抑制效果,表明转染后的HL-60及HL-60/ ADR细胞的NPM1基因特异性沉默.NPM1基因沉默后,HL-60/ADR对阿霉素的耐药性有一定程度的下降.结论:成功构建了NPM1-RNAi的HL-60及HL-60/ADR细胞模型,为进一步研究NPM1基因在白血病耐药过程中的作用建立了良好的实验基础.
关键词： HL-60细胞 HL-60/ADR细胞 核磷酸蛋白 RNA干扰 慢病毒载体 -
儿童急性髓系白血病的核磷酸蛋白基因突变研究
目的 检测儿童急性髓系白血病(AML)患者的核磷酸蛋白(NPM1)基因突变,研究NPM1基因突变在患者中的特点和临床意义.方法 采用高分辨率熔解曲线(HRM)分析法得出样本中NPMI基因突变情况,分析NPM1基因突变与儿童AML患者的临床表现和预后的关系.结果 70例初诊儿童AML患者NPM1突变率为45.7%.NPM1突变组外周血血小板计数明显高于NPM1野生组(P=0.013).正常核型组与异常核型组突变率差异无统计学意义(P>0.05).AML-ETO或PMLRARα融合基因阳性组突变率低于融合基因阴性组(P=0.048).与NPM1野生组相比,NPM1突变组相对缓解率、5年无事件生存(EFS)率、5年总体生存(OS)率相对较高,但两组差异无统计学意义(P值分别为0.217、0.374、0.380).结论 该组病例中,NPM1基因突变阳性率较高.NPM1突变组和NPM1野生组在临床各项指标的差异不大,NPM1突变组的预后相对较好,但两组的差异无统计学意义.
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核磷酸蛋白突变与血液肿瘤
核磷酸蛋白(Nucleophosmin,NPM)是位于核仁颗粒区的一种在细胞中广泛表达的多功能蛋白质.NPM基因异常初被发现在急性髓系白血病(AML)、淋巴瘤及骨髓增生异常综合征(MDS)患者中,参与染色体易位而形成融合基因,如NPM-RARα,NPM-ALK,NPM-MLF1[1-3].近研究发现,大约三分之一的原发性AML患者中存在NPM基因突变,少数MDS患者中也发现有野生型NPM(wild-NPM)的表达缺失.
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p53基因与肺癌的预后及其影像学关系
肺癌的发病率居当今世界各类肿瘤发病率之首,主要分为两大类:小细胞肺癌和非小细胞肺癌,后者占全部肺癌的80%,进一步分为腺癌(25%),鳞癌(35%),大细胞未分化癌(15%)和其他不常出现的亚型,外科治疗是大部分非小细胞肺癌的首选方法,但即使是实行了根治性切除手术,其中仍有部分病人不能获得长期生存,而依靠传统的诊断工具鉴别出这些预后差的病人常常很困难.近年来,随着肿瘤分子生物学的发展,使我们能够认识出多种不同的癌基因及抑癌基因,它们参与了癌的发生及发展,为进一步识别不同的预后亚群,选择合理的治疗方案提供了有利的手段.以往的影像学研究,大多从肿瘤大体病理形态与影像特征对照进行研究,以及分析肿瘤在影像形成上的特征.近,国内外均出现从分子水平研究肺癌影像学的报道[1,2,3].本文就抑癌基因p53与肺癌的预后与影像学的关系综述如下. 1 p53基因概述基因是指一段DNA顺序,其编码的蛋白质可产生或影响某种表型,人的p53基因定位于17号染色体的短臂上(17p13.1),全长16～20 kb(bp:硷基对),由11个外显子和10个内含子组成 , 编码相对分子量为5300的核磷酸蛋白,即p53蛋白.p53基因是迄今为止发现的与肿瘤相关性高的基因之一,1979年被首次发现[4],从p53基因被发现,人们对它的认识经历了癌蛋白、癌基因、抑癌基因等过程.所谓抑癌基因又称抗癌基因,是一种可抑制细胞生长并具潜在抑癌作用的基因,但当发生点突变,基因缺失或异常表达时,可促进肿瘤的发生、发展.野生型p53发生基因突变即成为突变型p53,基因通过其表达的蛋白而发生作用.
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酸性核磷酸蛋白32E 和人转录因子4在上皮性卵巢癌中的表达
本研究采用免疫组织化学 SP 法和酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测不同卵巢蜡块组织和患者血清，探讨酸性核磷酸蛋白（ acidic leucine-rich nuclear phosphopmtein，ANP）32E 和人转录因子4（SOX4）在上皮性卵巢癌组织和血清中的表达及临床意义。
