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中药制剂复方丹参滴丸对急性心肌梗死患者体内核因子-κBp65介导的炎症反应的影响
目的 探讨复方丹参滴丸用于治疗急性心肌梗死及其引起的炎症反应的临床疗效,并探索其抗炎机制.方法 将我院收治的124例急性心肌梗死患者随机分为两组,常规治疗组58例,常规治疗联合复方丹参滴丸组(CDDP组)66例,连续治疗30 d后,对比分析对照组(健康体检者)和两组急性心肌梗死患者左室射血分数(LVEF)的变化,以及血清中核因子NF-κBp65、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1、IL-6和IL-10的表达情况.结果 常规治疗组和CDDP组治疗前NF-κBp65、hs-CRP、TNF-α、IL-1、IL-6和IL-10的表达水平均高于对照组(P<0.05),左室射血分数明显低于对照组(P<0.05).治疗后,两组患者的NF-κBp65、hs-CRP、TNF-α、IL-1、IL-6和IL-10的表达水平均较治疗前明显降低(P<0.05)、LVEF明显升高(P<0.05),且CDDP组各指标的变化程度均大于常规治疗组(P<0.05).结论 复方丹参滴丸能够通过调节NF-κBp65转录因子和hs-CRP的表达,抑制炎症因子及氧自由基的释放,起到抑制炎症反应、改善心功能的作用,可用于治疗急性心肌梗死.
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淋巴毒素β受体和核转录因子-κB经典通路P65在膀胱组织中表达的实验研究
目的 探讨淋巴毒素β受体(LTβR)和核转录因子(NF)-κB经典通路因子P65在膀胱癌(BCa)和膀胱炎组织中的表达情况及与BCa临床病理指征的关系.方法 采用实时荧光定量PCR 检测108份新鲜膀胱组织标本(按照病理检查结果分为BCa组75份、膀胱炎组10份和正常膀胱黏膜组23份)中的LTβR和P65的mRNA相对含量；采用免疫组织化学方法检测118份病理石蜡切片(BCa切片组73份、膀胱炎切片组30份和正常膀胱黏膜切片组15份)中的LTβR与磷酸化蛋白P65( p-P65)表达水平,并分析其表达与BCa分级分期和淋巴结转移等因素的关系.采用Krukal-Wallis H检验和x2检验等比较不同膀胱组织间的LTβR与P65的mRNA和蛋白表达水平.结果 (1) LTβR和P65 mRNA相对含量在膀胱癌组中高于正常组[LTβR:29.4 (14.2～46.7)×10-3、1.2 (0.3 ～7.0) ×10-3,Z=-5.508; P65:9.7(2.7 ～21.1)×10-3、1.0(0.8～1.8) ×10-3,Z=-5.030,P均＜0.05],两者在BCa进展[病理分级各组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级):LTβR:18.2(2.1 ～31.3) ×10-3、28.4( 16.6 ～36.2)×10-3、47.9 (34.3 ～70.5)×10-3,x2K-W=20.378; P65:4.9(1.3～12.0)×10-3、7.4(3.0～21.9) ×10-3、17.0(10.0～28.3) ×10-3,x2K-W=15.219,P均＜0.05]和淋巴结转移各组(阴性、阳性)[LTβR:27.2(9.7 ～ 40.1)×10-3、39.4(26.7 ～52.6)×10-3,Z=-2.552;P65:7.4(2.3～15.6)×10-3、13.4(6.7～23.3) ×10-3,Z=-2.026,P均＜0.05]比较差异均有统计学意义.(2) LTβR和p-P65蛋白阳性率在膀胱癌组中高于正常组(LTβR:69.8％、13.3％,x2=16.600; P65:56.2％、6.7％,x2=12.220,P均＜0.05).LTβR和p-P65蛋白阳性率也在BCa进展(病理分级各组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级):LTβR:56.3％、70.0％、90.4％,x2 =7.055; p-P65:40.6％、60.0％、76.2％,x2=6.679,P均＜0.05)和淋巴结转移各组(阴性、阳性)(LTβR:58.3％、92.0％,x2=8.849; p-P65:52.1％、64.0％,x2=5.088,P均＜0.05)比较差异均有统计学意义.(3)相关性分析显示,LTβR与P65的表达在膀胱癌组中呈正相关(mRNA:r =0.654,P＜0.05；蛋白:r=0.399,P＜0.05),LTβR与65蛋白表达在膀胱炎组中呈正相关(r=0.521,P＜0.05).结论 LTβR和P65在膀胱癌组织中高表达,LTβR的表达可能与膀胱癌的发生发展和转移有关,且LTβR可能通过P65的激活参与经典的NF-κB通路.
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细胞核因子-κBp65、环氧合酶-2和基质金属蛋白酶-9在下咽癌中表达的临床意义
目的 研究细胞核因子-κB p65(NF-κB p65)、环氧合酶-2(COX-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在下咽癌中的表达及内在相关性.方法 应用流式细胞术(FCM)对原发下咽癌新鲜癌组织及相应癌旁组织各48例,进行NF-κB p65、COX-2和MMP-9表达的蛋白定量分析,以荧光指数(FI)表示三种蛋白表达的相对含量.结果 NF-κB p65、COX-2和MMP-9在下咽癌组织中的表达量分别为1.16、1.32和1.26,均明显高于癌旁组织的1.03、1.04和1.04.三种蛋白在有淋巴结转移组中的表达高于无淋巴结转移组(P＜0.05).下咽癌组织中NF-κB p65和COX-2的表达呈正相关(P＜0.05).结论 NF-κB p65、COX-2和MMP-9的高表达与下咽癌的发生、发展及淋巴结转移密切相关,NF-κB p65可能促进COX-2的表达.
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核转录因子-κB拮抗剂对大鼠海马CA1区局灶性脑缺血再灌注损伤的影响
目的 观察局灶性脑缺血再灌注后大鼠右侧海马CA1区的远隔损害变化及核转录因子(NF)-κB拮抗剂的调节作用,探讨远隔损害区内的炎性变化及NF-κB拮抗剂抗炎调节作用的可能机制.方法 将Sprague-Dawley (SD)雄性大鼠按照随机数字表法随机分为假手术组(n=24)、模型组(缺血再灌注组;n=38)、药物组[NF-κB必需调节蛋白结合区(NBD)多肽组;n=38]及对照组(NBD转化多肽组;n=38),按再灌注后的时间点24 h和7d再将上述4组各分为2个亚组.利用改良线栓法制备右侧大脑中动脉闭塞再灌注模型.利用右侧海马注射NF-κB拮抗剂NBD多肽及NBD转化多肽干预后检测白细胞介素1β和白细胞介素1-Ra的含量变化,采用苏木素-伊红(HE)及Fluoro-Jade B(FJB)染色法观察神经元的损伤及表达变化,利用免疫荧光双标及蛋白质印迹法检测神经细胞内NF-κB p65及NF-κB抑制蛋白α的表达量及表达部位.结果 模型组大鼠海马CA1区细胞胞核内NF-κB p65蛋白的表达(24 h,2.340±0.101;7d,2.440±0.081)较药物组(24 h,0.206±0.013;7d,0.090±0.012)及假手术组(24 h,0.120±0.007;7d,0.100±0.014)明显升高(q =64.431、66.704、67.747、56.624,均P＜0.05),同时模型组的IL-1β含量[24 h(1.850±0.192) ng/ml,7 d(1.000±0.178) ng/ml]较药物组[24 h(1.250±0.211) ng/ml,7 d(0.560±0.183) ng/ml]显著升高(g=10.730、9.710,均P＜0.05).模型组(24 h,27.50％±3.59％;7 d,28.10％±4.46％)及对照组(24 h,27.30％±4.53％;7d,26.30％±5.03％)中HE染色显示神经细胞存活百分比相较药物组(24 h,58.90％±3.46％;7 d,68.40％±4.20％)明显降低(q=19.949、19.731、2.139、22.249,均P＜0.05),FJB染色显示模型组(24 h,28.10±2.13;7d,29.50±2.45)神经细胞损伤数目明显高于药物组(24h,12.50±2.41;7 d,9.30±2.52,q=3.211、4.521,均P＜0.05),模型组与对照组上述结果差异无统计学意义(P＞0.05);与其他3组比较(假手术组24 h,0.130±0.008;7 d,0.150±0.010;模型组24h,1.340±0.213;7 d,1.750±0.119,对照组24 h,1.250±0.114;7d,1.620±0.097),药物组大鼠海马细胞胞核内IκBα蛋白表达(24 h,1.680±0.148;7d,2.010±0.085,q=6.348、9.139、9.414、1.711、5.277、5.555,均P＜0.05)明显升高.与模型组[24 h(0.570±0.028) ng/ml,7 d(0.430±0.039) ng/ml]及对照组[24 h(0.490±0.042) ng/ml,7 d(0.380±0.018) ng/ml]比较,药物组内IL-1Ra含量[24 h(1.390±0.055) ng/ml,7 d(1.250±0.043) ng/ml,q =4.577、6.205、9.683、6.389,均P＜0.05]明显升高.结论 脑缺血再灌注能引起大鼠海马区的远隔损害并诱发严重的炎性反应,NBD多肽能通过改变NF-κB p65及IκBc蛋白的表达变化有效抑制炎性反应,从而缓解脑缺血再灌注诱发的远隔损害.
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核转录因子-κB/低氧诱导因子-1α通路活化对癫痫持续状态大鼠海马神经元损伤的影响
目的 观察核转录因子-κB p65(NF-κB p65)和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在癫痫持续状态(status epilepticus,SE)大鼠海马神经元损伤中的作用,探讨NF-κB p65对HIF-1α的调控作用.方法 选择110只成年雄性SD大鼠,随机数字表法分成7组:生理盐水对照组15只、假手术组15只、SE模型组20只、NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)组15只、SE+ PDTC干预组(SE +PDTC)15只、SE+ HIF-1α siRNA侧脑室注射干预组(SE+ HIF-1α siRNA)15只、SE+对照siRNA侧脑室注射假性干预组(SE+对照siRNA)15只.采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射法制作SE模型,观察大鼠癫痫发作情况,造模后24 h采用蛋白免疫印迹分析检测海马中NF-κB p65和HIF-1α的表达水平;采用Fluoro-Jade C(FJC)染色法检测海马退行性变神经元.结果 SE后24 h,海马NF-κB p65和HIF-1α核蛋白含量(0.57 ±0.06、0.47 ±0.07)比对照组(0.23 ±0.03、0.20 ±0.03)增高,差异具有统计学意义(P＜0.05);PDTC干预后,海马核蛋白NF-κB p65和HIF-1α含量(0.23 ±0.03、0.14 ±0.03)比SE组降低,CA1区FJC阳性细胞(28.33±5.03)比SE组(76.67±13.32)也减少,差异均具有统计学意义(P＜0.05);SE大鼠侧脑室注射HIF-1αsiRNA后,海马HIF-1α全蛋白含量(0.22±0.03)比SE组(0.39±0.06)降低,CA1区FJC阳性细胞(27.34±7.02)比SE组(76.67±13.32)也减少,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 癫痫持续发作可导致脑内NF-κB/HIF-1α通路活化,抑制NF-κB/HIF-1α通路的活化能减轻SE所致的海马神经元损伤,具有脑保护作用.
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非经典性NF-κB活性在慢性B淋巴细胞白血病中的作用
目的 探讨非经典性NF-κB信号通路在慢性B淋巴细胞白血病(B-CLL)中的作用.方法 采用实时荧光定量RT-PCR法检测56例B-CLL初诊患者骨髓CD5+CD19+细胞(CLL-B细胞)NF-κB家族成员mRNA表达水平;采用TransAMTMELISA法定量分析CLL-B细胞核中NF-κB蛋白质复合物的活性成分;采用流式细胞术分析CLL-B细胞体外单独或与骨髓基质细胞(hBMSC)共培养后细胞死亡率;采用Western blot法检测共培养对骨髓CLL-B细胞中NF-κB家族成员RelA和RelB蛋白水平表达的影响.结果 CLL-B细胞的NF-κB家族成员RelA、p50、RelB和p52 mRNA水平均高于正常B细胞,差异有统计学意义(P值均＜0.01).所有标本中CLL-B细胞都存在RelA活化,而RelB只在部分标本中活性增强.CLL-B细胞核中平均RelA活性比正常B细胞显著增强,而平均RelB活性与正常B细胞相似.体外单独培养24、48和72 h时,RelA +/RelB-组CLL-B细胞死亡率分别为(35.54±4.43)％、(50.92±8.44)％和(49.24±8.16)％;RelA+/RelB+组CLL-B细胞死亡率分别为(20.65±2.37)％、(18.17±1.36)％和(26.55±4.08)％.与hBMSC共培养,RelA+/RelB-组CLL-B细胞死亡率较单独培养时下降,但相对于RelA+/RelB+组CLL-B细胞死亡率仍较高;共培养48 h后,RelA+/RelB-组CLL-B细胞中RelA和RelB显著上调,RelA+/RelB+组中CLL-B细胞质中RelA表达上调,RelB在胞质中显著下调并在胞核中轻度上调.结论 骨髓CLL-B细胞中存在非经典性NF-κB的活化,RelB活化程度在不同的CLL-B细胞中差异显著;RelB和RelA活化共表达赋予骨髓CLL-B细胞存活优势,CLL-B细胞与hBMSC共培养,通过诱导CLL-B细胞中RelA和RelB的表达发挥对其体外存活的保护作用.
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嗜酸乳杆菌调节NO及其氧化介质对动脉粥样硬化 模型大鼠的影响
目的 研究嗜酸乳杆菌对一氧化氮(NO)及其氧化介质表达的影响,探讨嗜酸乳杆菌抗动脉粥样硬化的机制.方法 24只SPF级雄性大鼠随机分为正常饮食组、高脂饮食组和嗜酸乳杆菌组,每组8只.正常饮食组大鼠以普通饲料喂养,高脂饮食组以高脂饲料+腹腔注射维生素D3+免疫损伤法+FeSO4喂养建立动脉粥样硬化模型,嗜酸乳杆菌组大鼠在高脂饮食组的基础上,每天灌胃0.5 mL嗜酸乳杆菌菌液(1×109 CFU/mL),实验第4、8、12周末称量动物体质量.喂养12周后处死动物,检测血清氧化低密度脂蛋白(oxLDL)、NO、精氨酸、精氨酸酶、过氧亚硝基(ONOO-)含量.分离大鼠主动脉血管,HE染色观察主动脉形态学变化,Real-time PCR检测eNOS、iNOS mRNA表达,Western blot检测主动脉NF-κB p65亚基的表达.结果 (1)整个实验过程中,高脂饮食组和嗜酸乳杆菌组大鼠体质量变化差异无统计学意义(P>0.05),但较正常饮食组均有明显增长(P<0.01).(2)HE染色结果显示,高脂饮食大鼠中主动脉形成广泛的动脉粥样硬化病变,嗜酸乳杆菌组大鼠的主动脉形态得到明显改善,仅内皮细胞增生,没有观察到平滑肌细胞的坏死.(3)与正常饮食组相比,高脂饮食组大鼠血清oxLDL、ONOO-、精氨酸酶、主动脉iNOS mRNA和细胞核NF-κB p65表达水平升高(P<0.01),血清NO和精氨酸含量、主动脉eNOS mRNA及胞质NF-κB p65亚基表达水平降低(P<0.01);而嗜酸乳杆菌恰好能逆转上述改变(P<0.01).结论 嗜酸乳杆菌可能通过调节NOS的表达、增加NO生物利用度、保护内皮功能来发挥抗动脉粥样硬化作用.
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复方蜥蜴散不同微粒组合剂对慢性非特异性溃疡性结肠炎模型大鼠组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ、细胞核转录因子Kappa Bp65信号通路的调控对诱导型一氧化氮合酶蛋白表达的影响的实验研究
目的 探讨复方蜥蜴散不同微粒组合剂对慢性非特异性溃疡性结肠炎(CUC)模型大鼠组织中过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ、细胞核转录因子Kappa B(NF-κB)p65信号通路的调控对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的影响,揭示其治疗CUC的部分作用机制.方法 将84只SD大鼠随机分为空白组、模型组、柳氮磺吡啶片组、复方蜥蜴散80目组、复方蜥蜴散100目组、复方蜥蜴散80目+100目等量混合组,每组14只.除空白组灌肠药物用0.9%氯化钠注射液0.85 mL代替,其余5组大鼠均用聚丙烯管插入大鼠肛门上段8 cm结肠内,注入5%2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)与50%乙醇混合液灌肠.造模成功后,空白组和模型组大鼠予0.9%氯化钠注射液10 mL/kg灌胃,柳氮磺吡啶片组予柳氮磺吡啶悬浊液,浓度按0.3 g/kg.复方蜥蜴散80目组、复方蜥蜴散100目组、复方蜥蜴散80目+100目等量混合组大鼠分别予复方蜥蜴散80目、100目、80目+100目等量混合糊剂混悬液.第15 d后麻醉全部大鼠,取结肠组织病变处包埋,应用免疫组化法检测PPARγ、NF-κBp65、iNOS在结肠组织蛋白的原位表达.结果 PPARγ、NF-KBp65、iNOS蛋白在肠黏膜炎症组织表达均为阳性表达,模型组阳性表达OD值与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05);柳氮磺吡啶片组、复方蜥蜴散各治疗组阳性表达OD值与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);复方蜥蜴散各治疗组阳性表达OD值与柳氮磺吡啶片组比较差异有统计学意义(P<0.05);复方蜥蜴散80目组、复方蜥蜴散100目组阳性表达OD值与复方蜥蜴散80目+100目等量混合组比较差异有统计学意义(P<0.05);复方蜥蜴散80目组阳性表达OD值与复方蜥蜴散100目组比较差异无统计学意义(P>0.05).iNOS与NF-κBp65蛋白表达正相关,NF-κBp65与PPARγ蛋白表达负相关.结论 复方蜥蜴散各治疗组、柳氮磺吡啶肠溶片组治疗CUC均有效,其中以复方蜥蜴散80目+100目等量混合组疗效佳.提示了复方蜥蜴散不同微粒组合剂对肠黏膜损伤可能具有保护修复作用,其机制可能是激活了PPARγ配体抑制调控PPARγ、NF-κBp65信号通路中iNOS蛋白的表达,进而影响CUC炎症的发生发展,PPARγ、NF-κBp65、iNOS可能是治疗CUC的靶位.
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核转录因子-κB P65在胃癌组织中的表达及临床意义
核转录因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)是一类具有和某些基因上启动子区固定核苷酸序列结合而启动基因转录的功能性蛋白质,使某些控制细胞转化靶基因转录增强,并引发肿瘤[1-3].
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核因予-κB p65在肝细胞癌中的表达及意义
目的 利用肝癌组织芯片观察核因子-κB(NF-κB)p65在癌组织及癌旁组织中的表达,探讨其对肝癌发生、发展的意义.方法 肝癌组织芯片(HLivH180Su05)包括81例癌组织和81例癌旁组织,手术时间为2006年5月-2007年5月,随访截止时间为2012年2月,其中复发46例,无复发35例;参考美国癌症联合会胆囊癌TNM分期(第7版)分为:Ⅰ期56例,Ⅱ期25例;有癌栓28例,无癌栓53例.利用免疫组化法检测NF-κB P65蛋白的表达及相关性.依据所检测蛋白在细胞内的定位,分别以检测蛋白表达部位的阳性信号强度和阳性表达细胞数2种观察标准进行综合评分.计数资料组间比较采用 χ2检验,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,采用log-rank时序检验比较生存率.结果 NF-κB p65蛋白在癌组织及癌旁组织表达定位于细胞质及部分细胞核,在癌组织及癌旁组织阳性率分别为90.12%、69.14%,差异有统计学意义(χ2=10.998,P=0.001);癌组织中NF-κB p65蛋白表达与临床分期、癌栓、有无复发无明显相关性(P值均>0.05).结论 NF-κB p65在肝癌组织中的表达高于癌旁组织,调控NF-κB功能的关键在于抑制RelA(p65)对肝肿瘤的促进作用.由此推测,阻断NF-κB p65活性能够发挥抑制肿瘤细胞分化、生长的作用,为临床治疗提供了新的思路.
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姜黄素对小鼠黑素瘤的抑制作用及对核因子κB激活和生存素表达的影响
目的 探讨姜黄素抑制小鼠黑素瘤作用的可能机制.方法 将黑素瘤细胞株B16F10接种于小鼠右大腿外侧皮下,建立荷黑素瘤小鼠模型,于接种后第7天分别予以50和100 mg/kg姜黄素干预,以0.5 mL无血清RPMI 1640培养基腹腔注射为对照组,观察不同处理组瘤体的变化,采用免疫印迹方法检测肿瘤组织核因子κB(NF-κB)p65表达程度,应用半定量逆转录聚合酶链反应方法检测生存素mRNA的水平.结果 姜黄素治疗组小鼠瘤重均较肿瘤对照组降低,尤以50 mg/kg姜黄素组为著,抑瘤率可达55.56%(P＜0.01);治疗组肿瘤组织NF-κBp65表达水平均较肿瘤对照组降低,50 mg/kg姜黄素组降低63.19%,100 mg/kg姜黄素组降低55.74%,治疗组与肿瘤对照组差异有统计学意义(P＜0.01);治疗组生存素mRNA均较肿瘤对照组降低,50 mg/kg组降低51.02%,100mg/kg组降低34.69%,治疗组与肿瘤对照组差异有统计学意义(P＜0.01);肿瘤组织NF-κB活性与生存素mRNA表达水平呈正相关(r=0.81,P＜0.01).结论 姜黄素可能通过抑制NF-κB活化从而下调其下游生存素基因表达来抑制恶性黑素瘤的生长.
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维生素D受体和核转录因子-κB p65在人结肠癌组织中的表达
目的 研究维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)和核转录因子(nuclear factor,NF)-κB p65在人结肠癌组织中的表达水平.方法 收集手术切除的结肠癌和对照标本各27例为研究对象,采用免疫组织化学技术检测对照和癌组织VDR和NF-κB p65表达状况.结果 27例结肠癌患者中有5例VDR表达阳性(18.5％),有7例NF-κB p65表达阳性(25.9％);对照组有23例VDR表达阳性(85.2％),有25例NF-κB p65表达阳性(92.6％).人结肠癌组织VDR和NF-κB p65阳性表达均低于对照组,差异有统计学意义(均有P＜0.001).结论 人结肠癌组织中VDR和NF-κB p65表达呈低水平.
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去势雄兔干眼症模型泪腺组织NFκB p65亚基及NOS2表达
目的 检测NF-κB p65亚基(NFκB p65)和诱导型一氧化氮合成酶(NOS2)在去势雄兔干眼症模型泪腺组织的表达,探讨其与干眼症发病的关系.方法 制作6只去势雄兔干眼症模型,采用免疫组织化学SP方法对模型兔及6只对照兔泪腺组织中NFκB p65及NOS2蛋白的表达进行检测.结果 与正常对照组相比,干眼症模型兔泪腺组织NFκB p65、NOS2的表达明显增多(t'=9.38、9.16,P<0.01).结论 去势雄兔干眼症模型泪腺组织中的免疫炎症反应可能是导致干眼症的主要发病机制,NFκB p65和NOS2在这一过程中可能起主要作用.
