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应用多重逆转录聚合酶链反应技术检测石蜡包埋三种软组织肉瘤中融合基因的表达
目前,用于软组织肉瘤(soft tissue sarcoma,STS)染色体易位或其融合基因检测的技术方法很多[1],以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法为常用[2,3].然而对于一些形态学缺乏特征性排列结构的小圆细胞肿瘤,运用RT-PCR技术对不同融合基因逐一检测和排除,也存在检测程序繁琐、耗时、耗材等不足.针对此问题,我们设计了多重引物,应用多重RT-PCR技术检测石蜡包埋STS融合基因的表达,建立一套稳定高效、适合临床常规STS融合基因表达检测的分子诊断方法.
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内参照基因表达检测在宫颈石蜡组织原位杂交中的运用及意义
原位核酸杂交目前已广泛运用于组织和细胞基因表达定位和水平测定.但在实际运用中存在两个主要问题:(1)标本间的定量比较,缺乏比较的基准;(2)对于阴性结果,如何区别杂交失败的阴性结果和由于RNA的降解而出现的阴性结果.3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)和β-肌动蛋白为细胞的看家基因,其表达水平在不同活动中相对稳定,被广泛运用于基因表达水平检测的内参照基因[1-3],但尚未在原位杂交中作为内参照基因运用.我们通过制备GAPDH和β-肌动蛋白探针,对存档的正常和病理宫颈石蜡组织做了原位杂交检测,并与抑癌基因p53、癌基因c-myc的表达改变相比较,探讨其表达检测是否可作为组织和细胞原位杂交的阳性对照或基准.
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膳食与基因组:营养学研究的新前沿
近年来,基因组学的研究获得了很大进展.其中一个重要标志就是于2000年6月宣告完成的人类基因组测序工作.与此同时,一系列应用于大规模基因测序、基因表达检测、以及基因多态性分析等的基因组新技术不断涌现.这些引人瞩目的成就正引发着包括营养学在内的几乎所有生物学科的革命性改革.大量研究,特别是孪生研究(twin study)及家族研究(family study),早已证实遗传因素、环境因素、以及生活方式等共同影响着常见疾病如心血管疾病、糖尿病、肿瘤、骨质疏松、老年性痴呆及肥胖等发生的遗传基因可以直接影响机体对某种疾病的易患性,或者可间接地通过影响机体对其它环境因素的反应来作用于疾病发生过程.膳食是影响人体健康重要的环境因素之一.膳食因素与常见疾病的关系一直是营养学研究的主要内容.然而,人们对膳食因素与基因因素的相互作用及其对机体健康的影响知之甚少.随着人们对人类及其它生物体基因组的了解不断深入,这种状况正在开始改变.近年来,基因组技术在营养学研究中应用的例子在迅速增加,基因多态性(polymorphisms)对膳食因素与疾病关系的影响也受到愈来愈多的营养学家所关注.可以说,把浩瀚的基因组信息应用于营养学中正成为这门学科的一个巨大的挑战和新的增长点.
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高密度脂蛋白2和高密度脂蛋白3对THP-1巨噬细胞脂质蓄积及过氧化体增殖物激活型受体γ和CD36表达的影响
为探讨高密度脂蛋白2和高密度脂蛋白3对THP-1巨噬细胞过氧化体增殖物激活型受体γ和CD36表达及脂质蓄积的影响.取新鲜抗凝血浆,用超速离心术进行密度梯度离心,收集低密度脂蛋白、高密度脂蛋白2和3.将氧化型低密度脂蛋白分别与高密度脂蛋白2和3共孵育THP-1巨噬细胞,用油红O染色及高效液相分析法观测细胞内脂质蓄积程度;用逆转录聚合酶链反应检测CD36和过氧化体增殖物激活型受体γ mRNA的表达;用Western blotting检测CD36和过氧化体增殖物激活型受体γ蛋白的表达.结果发现,与单独用氧化型低密度脂蛋白和THP-1孵育相比,用高密度脂蛋白2、高密度脂蛋白3分别与氧化型低密度脂蛋白共孵育THP-1可使细胞内脂质蓄积明显减少,过氧化体增殖物激活型受体γ mRNA及蛋白表达上调,CD36 mRNA及蛋白表达下调.而高密度脂蛋白3比高密度脂蛋白2作用更明显.结果提示,高密度脂蛋白2和3对氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1细胞脂质蓄积有显著抑制作用,而高密度脂蛋白3的作用更强.其机制与高密度脂蛋白可以增强过氧化体增殖物激活型受体γ mRNA和蛋白表达上调及过氧化体增殖物激活型受体γ磷酸化,进而抑制过氧化体增殖物激活型受体γ的应答基因CD36 mRNA及蛋白表达有关.
