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一种高通量筛选结直肠癌转移相关cDNA文库的方法
我们已利用抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),构建了结直肠癌转移相关cDNA消减文库,为进一步开展结直肠癌转移相关研究提供了大量的信息[1].如何高效、便捷、高通量地差异筛选该文库,成为目前急需解决的问题.以往多用Northern blot和反向Northern印迹进行差异片段的检测,但筛查量有限.cDNA微阵列用于文库筛查具有明显的优越性,但成本较高、对小插入片段的检出率还有待提高.本研究利用并改进了差异筛选方法,实现了对SSH消减文库的高通量筛选.该方法不仅有利于发现低丰度的差异基因片段,还能大大提高筛选正确率,加快基因鉴定的过程.
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什么是蛋白质组学的基本技术流程?
答: 蛋白质组学的基本技术流程主要为以下四方面.1. 蛋白质标本的制备及分离:寻找较好的方法尽可能完全地抽提细胞或组织中的全部蛋白质是比较蛋白质组学研究的重要前提.由于不同细胞或组织中疏水性蛋白质,低丰度蛋白质,高丰度蛋白质,极性蛋白质等共存,很难用单一抽提液和方法将不同细胞或组织中全部蛋白质完全制备出.如希望获得尽可能完全的全部蛋白质,仍有赖于现有方法的不断改进和新方法的产生.
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cDNA RDA及其在内分泌代谢疾病领域中的应用
不同种类细胞基因表达的差异决定其各种生命活动.正常生长发育及各种疾病病理过程的本质都与基因表达的改变有关.从基因表达水平即mRNA水平研究疾病的发病机理是非常重要的.下面介绍一种以聚合酶链反应(PCR)为基础的消减杂交技术--cDNA代表性差异分析(cDNA RDA).该技术是将PCR与消减杂交结合起来,用于不同细胞、组织之间基因表达差异的筛查,尤其是筛查那些特异、低丰度表达的基因效果更好.这种技术假阳性率极低,不需要特殊仪器,相对经济,有利于普通实验室开展基因筛查工作.
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表面增强激光解析电离化飞行时间质谱技术在儿科疾病中的应用进展
人类基因组计划全基因组测序的完成标志着后基因组时代的到来,蛋白质组学成为当前研究热点.在质谱(mass spectrometry,MS)基础上发展起来的表面增强激光解析电离化飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption/ioni-zation time of flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)[1.2]是一种全新的蛋白质组学研究技术平台.它弥补了二维电泳对低丰度、低溶解度、极端等电点值、极大(相对分子质量>200×10~3)和极小(相对分子质量<10×10~3)等蛋白质分离的不足,提高了蛋白质分离和鉴定的速度.
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基因表达系列分析技术及其应用
基因表达系列分析(Serial Analysis of GeneExpression,SAGE)是近几年来发展起来的一种全基因组基因表达分析和寻找差异基因的新技术,能同时对大量的转录物进行定性和定量分析,可以同时反映正常或异常等不同功能状态下细胞整个基因组基因的全貌,特别对低丰度表达基因有较高的检测结果,因而具有重要的应用价值.它不但能快速详细地同时分析成千上万个基因转录子的丰富信息,还能发现新基因.SAGE是目前较为成熟的用于全基因组基因分析的方法,经过数年的探索,SAGE受到广泛关注,显示出广阔前景.本文简介SAGE技术的基本原理、操作方法、应用前景、优缺点.