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抗原活化慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞的对比研究
目的 探讨不同抗原在体外活化慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞(DC)及诱导特异性T细胞应答的能力.方法 用无血清培养基从慢性乙型肝炎患者外周血中分离培养DC,在DC成熟前,分别加入HBsAg多肽、HBcAg多肽刺激,用流式细胞仪检测DC表型,用液闪计数仪观察DC对T细胞的增殖作用,用ELISA法检测混合淋巴细胞反应(MLR)中IL-12的分泌水平.结果 经HBcAg多肽刺激DC的CD86表达率为(92.20±5.18)%,明显高于HBsAg多肽刺激组(76.19±3.90)%和未加抗原组(62.37±4.24)%,P＜0.01;经HBcAg多肽刺激组DC诱导同种异体静止T细胞增殖的能力每分钟液闪计数值cpm为34 326±3088,明显高于HBsAg多肽刺激组20 306±2897和单个核细胞组3454±409,P＜0.01;经HBcAg多肽刺激组DC MLR中IL-12(348±42.8)ng/L,分别高于HBsAg多肽刺激组(226±30.6)ng/L和未加抗原组(116±15.6)ng/L,P＜0.01.结论 使用HBcAg多肽刺激DC可比HBsAg多肽更有效地提呈病毒抗原,提高诱导特异性T细胞应答的能力.
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HLA-DRB1特异性Ⅱ型胶原多肽序列中氨基酸替换对T细胞免疫的影响
目的探讨Ⅱ型胶原(CⅡ)的抗原性多肽CⅡ263～272及其变构肽在T细胞激活中的作用,以筛选可与HLA-DRB1特异性结合,而无或有低T细胞激活作用的CⅡ变构肽,为利用CⅡ变构肽抑制类风湿关节炎(RA)患者的HLA-DRB1限制性T细胞激活提供实验依据.方法采用固相合成法,用丙氨酸和甘氨酸替换CⅡ263～272序列中与T细胞受体结合的氨基酸,并用异硫氰酸荧光素(FITC)标记这些CⅡ变构肽,观察CⅡ变构肽与抗原呈递细胞表面HLA-DR1分子的结合能力;测定与CⅡ263～272或变构肽共孵育HLA-DR1特异性T细胞株上清液中的白细胞介素(IL)-2浓度,研究CⅡ变构肽在T细胞激活中的作用.结果CⅡ变构肽(269A)可与抗原呈递细胞(L57.23)表面的HLA-DR1分子特异性结合;在HLA-DR1特异性T细胞激活系统中,CⅡ263～272在3.1～5.0μg/ml的浓度下,可明显刺激T细胞激活,而CⅡ变构肽267A,268A,sub269～270,sub267～270未出现或仅有轻度T细胞激活作用(P＜0.01或P＜0.05).结论CⅡ263～272含有与HLA-DR1和与T细胞结合的抗原表位,可以刺激CⅡ特异性T细胞增生,替换与T细胞结合的氨基酸后,变构肽仍可与HLA-DR1结合,但对T细胞激活作用减弱或无T细胞激活作用.
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T淋巴细胞亚群的早期活化对乙型肝炎疫苗接种后免疫应答的影响
目的 探讨乙型肝炎疫苗接种后免疫应答与T淋巴细胞亚群活化的关系.方法 采集18例乙型肝炎疫苗接种应答者、22例乙型肝炎疫苗接种无应答者、10例未接受乙型肝炎疫苗接种的健康对照者全血.用流式细胞术对其外周血单个核细胞的表面标志物CD69、CD4、CD8、CD3等进行检测.计算不同T淋巴细胞亚群百分比.并经t检验比较不同T淋巴细胞亚群CD69表达的差异.结果 在应答者中,外周血激活型T辅助淋巴细胞(CD69~+ CD4~+ T淋巴细胞)数明显升高,而CD69~+ CD8~+ T淋巴细胞数则明显减少.应答者、无应答者、对照者外周血CD69~+ CD4~+ T淋巴细胞分别占CD4~+ T淋巴细胞的(1.81±1.33)%、(0.64±0.48)%和(0.56±0.39)%,应答者分别与无应答者和对照者比较.差异均有统计学意义(t=3.444、3.940,均P<0.01).应答者、无应答者、对照者外周血CD69~+ CD8~+ T淋巴细胞分别占CD8~+ T淋巴细胞的(0.43±0.25)%、(3.05±1.69)%和(3.11±2.41)%,应答者分别与无应答者和对照者比较,差异均有统计学意义(t=7.997、5.944,均P<0.01).应答者、无应答者、对照者CD3~+ CD4~+ T淋巴细胞占CD3~+ T淋巴细胞的百分比和CD3~+ CD8~+ T淋巴细胞占CD3~+ T淋巴细胞的百分比比较差异均无统计学意义.结论 乙型肝炎疫苗接种后无应答与Th细胞早期活化不足有关.
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CⅡTA反义RNA抑制皮肤成纤维细胞表面MHCⅡ类抗原表达
目的探讨用纳米载体介导主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex,MHC)Ⅱ类抗原转录激活因子(MHCⅡtransactivator,CⅡTA)的反义RNA,抑制皮肤成纤维细胞表面MHCⅡ类抗原表达的可行性.方法将CⅡTA反义RNA(pDarⅡ质粒)稳定转染人类原代皮肤成纤维细胞(pDarⅡ-D),流式细胞仪检测pDarⅡ-D表面经典的MHCⅡ(HLA-DR、-DP、-DQ)类抗原表达,RT-PCR检测CⅡTA及经典的MHCⅡ类分子的mRNA水平.体外混合淋巴细胞反应检测pDarⅡ-D组刺激外周血T细胞反应的能力.结果与正义链组比较,在重组人干扰素(IFN)-γ诱导下,pDarⅡ-D组HLA-DR及-DP抗原诱导性表达分别降低了95.63%、87.89%;同时CⅡTA及经典的MHCⅡ类分子的mRNA含量明显减少(P＜0.01);pDarⅡ-D组刺激T细胞分泌IL-2 mRNA水平降低(P＜0.05).结论CⅡTA反义片段抑制了自身mRNA含量,从而阻止了其调控的MHCⅡ类分子的相应表达.
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结核感染中IL-23R mRNA表达水平对Th17/IL-17免疫应答的影响
目的 分析白介素23受体(interleukin 23 receptor,IL-23R)对结核感染中辅助型T细胞17(T helper cell 17,Th17)免疫应答的影响,探讨IL-23R在肺结核(tuberculosis,TB)发病机制中的作用.方法 选取2015年5～ 10月于北京胸科医院住院的21名活动性肺结核病人(active tuberculosis,ATB),2015年5～7月于北京昌平区结防所结核病体检的21名结核潜伏感染者(latent tuberculosis infection,LTBI)和21名健康对照(healthy donor,HD)为研究对象;分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),并做培养;检测PBMCs中IL-23RmRNA表达水平和PBMCs上清中IL-23和IL-17A水平;比较各组IL-23R mRNA表达水平,分析IL-23R表达水平对IL-17A水平的影响.结果 IL-23R mRNA表达水平:ATB组低于LTBI组(Z=-2.528,P=0.011),ATB组高于HD组(Z=-3.849,P＜0.001);IL-17A水平:ATB组低于LTBI组(t=2.238,P=0.031),ATB组高于HD组(t=4.733,P＜0.001);IL-23水平在三组中的差异无统计学意义(F =0.432,P=0.651);在ATB患者中,IL-23R mRNA表达水平与IL-17A水平呈正相关(rs=0.438,P=0.047).结论 结核分支杆菌感染中,IL-23R的表达水平对Th17细胞介导的免疫应答起到调节作用,可能影响到TB的易感性和感染转归.
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HLA-DM基因遗传多态性对系统性红斑狼疮易感性的影响
目的探索HLA-DM等位基因频率与基因型分布对系统性红斑狼疮(SLE)易感性的影响.方法用多聚酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)确定DM的基因型,用病例对照研究的方法探索DM与SLE的关联性.结果检测到的7种DMA与DMB等位基因和42种单体型在SLE组与正常对照组分布一致.DMB*0102/0103基因型在对照组的分布频率明显高于SLE组(P<0.05),但校正后差异无显著性,其余13种基因型在两组差异均无显著意义.结论 HLA-DM基因的遗传多态性对SLE的发病没有直接影响.
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HLA-DPB1等位基因与重症肌无力相关性研究
①目的探讨人类白细胞抗原(HLA-DPB1)在重症肌无力(MG)发病中的作用.②方法采用聚合酶链反应限制性长度多态性(PCR-RFLP)技术,对34例MG病人及51例健康人HLA-DP对应的HLA-DPB1基因进行分型,并对其DPB1的各等位基因的频率进行比较分析.③结果 HLA-DPB1*0501与MG有一定关系(x2=9.81,P＜0.05).④结论 HLA-DPB1座位在MG发病过程中具有重要作用.
关键词： 重症肌无力 HLA-D抗原 基因 聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 -
HLA等位基因DRB1*0301和DQB1*0602与自身免疫性甲状腺疾病的关系
①目的探讨山东沿海地区自身免疫性甲状腺疾病(AITDs)的发病与HLA-DRB1*0301、DQB1*0602等位基因的相关性.②方法应用多聚酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术,对已确诊的Graves病(GD)90例、桥本甲状腺炎(HT)43例和正常对照90例,扩增其HLA等位基因DRB1*0301、DQB1*0602的目的DNA片段,分析两对等位基因在不同人群中表达频率的差异.③结果山东沿海地区GD和HT病人DRB1*0301等位基因频率均显著高于对照组(χ2=4.624、5.003,P<0.05);而DQB1*0602等位基因频率均显著低于对照组(χ2=11.204、6.970,P<0.01).④结论 HLA-DRB1*0301可能是山东沿海地区GD和HT的易感基因,而DQB1*0602可能是山东沿海地区GD和HT的保护基因.
