首页 > 文献资料
-
CD154(CD40L)诱导人Ramos B淋巴细胞株中转录因子NF-κB活化研究
目的对CD40配体CD154(CD40L)在人B淋巴细胞中刺激转录因子NF-κB活化进行研究.方法应用重组CD154刺激EBV/LMP1阴性人Ramos B细胞,观察对NF-κB luciferase(萤光素酶)活化的作用,判断CD154刺激对NF-κB抑制蛋白IκB-α、-β及-ε磷酸化和降解的影响,并对CD154刺激诱导进入细胞核NF-κB亚单位进行分析. 结果 CD154刺激:(1) 导致NF-κB luciferase活性升高,且与CD154剂量正相关; (2) 引起细胞内IκB-α、-β及-ε蛋白总量减少,IκB-α、-β及-ε阳性细胞也明显减少; (3) 主要诱导p50、p65及c-Rel亚单位从细胞浆进入细胞核; (4) 诱导p65磷酸化. 结论在人Ramos B细胞中,CD154通过诱导IκB-α、-β及-ε降解释放p50、p65及c-Rel进入细胞核及p65磷酸化激活NF-κB.
-
IKKα、β、ε及TBK1在CD154诱导转录因子NF-κB活化中的作用
目的 研究IκB上游激酶IKK在CD40配体CD154诱导NF-iB活化中的作用机制以及与构架蛋白TRAF的相关性.方法 应用重组CD154刺激EBV/LMP1阴性Ramos B细胞,研究IKK质粒转染表达对NF-κB luciferase活化的影响,并通过IKK免疫复合物激酶试验测定IKK对GST-IκB-α磷酸化活性以及免疫共沉淀试验判断IKK与TRAF的相互关系.结果 IKKα/β、IKKε和TBK1活性在CD154刺激5～15 min内达到高峰;抗IKKα磁珠可以免疫共沉淀IKKβ,反之亦然.而抗IKKε或TBK1磁珠不能共沉淀其他3种IKK;CD154刺激诱导TRAF2与IKKε和TBK1,TRAF5与TBK1共沉淀增加,而TANK与TBK1共沉淀减少.IKKα或IKKβ并不与TANK或任何TRAF共沉淀.结论 CD154刺激诱导IKKα、β、ε及TBK1活化,并诱导TRAF2与IKKε和TBK1结合,TRAF5与TBK1结合,而TANK与TBK1逐渐解离.IKKα/β激酶复合物位于IKKε和TBK1的下游.
-
系统性红斑狼疮患者CD154的表达与炎症、心肌损伤指标的关系研究
目的 测定系统性红斑狼疮(SLE)合并心肌损伤患者外周血单个核细胞CD154的表达水平,并与C反应蛋白(CRP)、心肌损伤指标之间进行相关分析,探讨CD154与患者炎症状态、心肌损伤的关系.方法 ①32例2010年4～10月在我院门诊或住院治疗的SLE患者,男2例,女30例.②给予心脏彩超测定左房前后径(LAD)、室间隔厚度(IVST)、左心室前后径(LVDd)、左心室重量指数(LVMI)、左心室射血分数(LVEF),心电图检查,免疫比浊法测定C反应蛋白(CRP)、全自动生化分析仪化学发光免疫分析法测定CK-MB、肌钙蛋白(cTnI),分离外周血单个核细胞,采用流式细胞仪分析检测CD154的表达水平.③根据心脏彩超、心电图检查、CK-MBⅡ、肌钙蛋白结果,将有心肌损伤指标阳性的患者分为A组(20例),心肌损伤指标阴性的患者分为B组(12例)；20例健康志愿者为正常对照.④资料采用卡方检验,以Spearman相关法,即多元线性回归分析1个因变量和多个自变量之间的线性关系,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 ①A组外周血单个核细胞CD154的表达水平为(29.1±10.8)％、CRP为(68.4±12.2)mg/L均明显高于B组(11.9±8.2)％、(36.9±11.5)mg/L,P＜0.01；正常对照组外周血单个核细胞CD154的表达(5.9±2.2)％显著低于A、B组,P＜0.01.②A组CK-MBⅡ为(9.7±3.6n)ng/ml、cTnI为(0.43±0.21)ng/ml、IVST为(11.8±3.2)mm、LVMI为(110.51±18.64)g/m2显著高于B组CK-MBⅡ为(2.3±0.8)ng/ml、cTnI为(022±.09)ng/ml、IVST (9.6±1.1)mm、LVMI (90.78±9.53)g/m2(P＜0.01)；A组LVDd (50.3±6.6)mm、LAD (32.4±5.4)mm、亦高于B组LVDd (46.4±3.1)mm、LAD (28.2±4.6)mm(P＜0.05);A组LVEF (56.2±14.8)％显著低于B组LVEF(64.7±1 0.3)％(P＜0.01).③患者外周血单个核细胞CD154的表达水平与CRP、CK-MBⅡ、cTnI、LVDd、LVIMI、IVST、LAD呈正相关[γ=0.343,γ=0.315,γ=0.437,γ=0.364,γ=0.448(均P＜0.01)；γ=0.266,γ=0.216(均P＜0.05)]；与LVEF呈负相关(γ=-0.346,P＜0.01).结论 SLE合并心肌损伤患者外周血单个核细胞CD154的表达水平,显著高于无心肌损伤患者,并与炎症、心肌损伤明显相关,提示CD154在SLE患者的心血管事件的发生发展中可能起到重要作用,可能会成为SLE患者心血管事件的重要预测指标,进一步研究可能会为SLE心肌损伤带来新的治疗方法.
-
强直性脊柱炎患者外周血T淋巴细胞亚群和T淋巴细胞上CD154表达的变化和意义
目的 探讨强直性脊柱炎(AS)患者外周血T淋巴细胞亚群分布和T淋巴细胞上共刺激分子CD154的表达及依那西普治疗对其的影响.方法 用流式细胞仪检测66例AS患者(其中活动期39例,非活动期27例;按临床特征分为外周关节和中轴均受累者35例和单独中轴受累31例)、30例类风湿关节炎(RA)患者及30名健康志愿者外周血T淋巴细胞亚群分布和CD154在CD3+T淋巴细胞上的表达.此外,观察39例AS活动期患者在随机双盲依那西普和安慰剂对照试验中,用药前后CD154的变化.结果 ①AS和RA患者CD4+T淋巴细胞均较健康志愿者高(P＜0.05),而CD8+T淋巴细胞较健康志愿者低(P＜0.05);AS患者外周血T细胞上CD154的表达较健康志愿者和RA患者都明显升高(P＜0.05);②活动期或外周关节受累AS患者T细胞CD154的表达分别较稳定期或单独中轴受累AS患者明显升高(P＜0.05);且CD154的表达与关节压痛数、关节肿胀数呈正相关(P＜0.05);③在依那西普试验的第6周,依那西普组AS患者(19例)T淋巴细胞CD154表达较安慰剂组(20例)明显下降(P＜0.05),与健康志愿者差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AS患者外周血存在T淋巴细胞亚群紊乱和T淋巴细胞上共刺激分子CD154异常表达,可作为临床评价AS病情活动性和依那西普疗效的生物指标之一.
-
CD154在活动期系统性红斑狼疮B淋巴细胞中的表达
目的探讨CD154在系统性红斑狼疮(SLE)中的异常表达及其在狼疮发病中的作用机制.方法16例活动期SLE及14名正常健康人,分离外周血CD19阳性B细胞,以流式细胞仪荧光抗体标记检测其CD154的表达,并体外观察抗CD154抗体对外周血B细胞的增生及IgG分泌的影响.结果①活动期SLE外周血B淋巴细胞中CD154阳性率(36+17)%及表达强度(364+238)均显著高于正常健康人,后者分别为(10+8)%,124+97%(P均＜0.001);②体外单独培养,活动期SLE外周血B淋巴细胞自身即可异常增生并分泌IgG,[3H]-TdR掺入及体外培养上清液IgG浓度与正常人相比,差异有显著性(P值分别＜0.0001和0.001).抗CD154抗体可显著抑制活动期SLE外周血B淋巴细胞的异常增生及IgG的异常分泌,[3H]TdR掺入及体外培养上清液IgG浓度与对照抗体组相比,差异有显著性(P值分别为0.027和0.034).结论CD154在活动期SLE的B淋巴细胞中有异常表达,其异常调控可能是导致分泌自身抗体B细胞克隆增生的主要原因.
-
核因子-κB活性对BXSB狼疮小鼠脾脏自发性生发中心形成的影响
目的 探讨核因子(NF)-κB活性对BXSB狼疮小鼠脾脏中自发性生发中心形成的影响及其机制.方法 18只BXSB自发性狼疮小鼠随机分成对照组和吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)干预组,PDTC组:隔日腹腔注射PDTC(120 mg/kg体重);对照组:隔日腹腔注射等量溶媒.持续8周结束实验.以电泳迁移率改变实验检测脾脏组织NF-κB活性,双标记流式细胞术检测脾脏B细胞CD154表达及生发中心B细胞凋亡,组织化学方法染色脾脏生发中心,并以图像处理系统半定量分析.结果 PDTC显著抑制BXSB狼疮小鼠脾脏组织NF-κB活性,较对照组下降62.82%;BXSB狼疮小鼠脾脏组织可见自发性生发中心形成,抑制NF-κB活性能下调脾脏B细胞CD154表达、使其自发性生发中心形成受阻、促进生发中心B细胞凋亡.结论 NF-κB过度活化可通过上调脾脏B细胞CD154的异常表达而促进自发性生发中心形成、并减少生发中心B细胞凋亡.由此,自发性生发中心形成过程中生成的自身反应性B细胞得以逃逸凋亡,分化成产自身抗体浆细胞.提示NF-κB可成为防治系统性红斑狼疮的一个作用靶点.
-
CD154在活动期SLE的改变
目的探讨CD154在系统性红斑狼疮(SLE)中的异常表达及其在狼疮发病中的作用机制.方法31例活动期SLE及20例正常健康人,分离外周血CD19阳性B细胞,以流式细胞仪荧光抗体标记检测其CD154的表达,并体外观察抗CD154抗体对外周血B细胞的增生及IgG分泌的影响.结果(1)活动期SLE外周血B淋巴细胞中CD154阳性率(35±14)%及表达强度(312±108)均显著高于正常健康人,后者分别为(9±7)%、(98±41)(P均＜0.001);(2)体外单独培养,活动期SLE外周血B淋巴细胞自身即可异常增生并分泌IgG,[3H]-TdR掺入及体外培养上清液IgG浓度与正常人相比,差异有显著性(P值分别＜0.0001和0.001).抗CD154抗体可显著抑制活动期SLE外周血B淋巴细胞的异常增生及IgG的异常分泌,[3H]-TdR掺入及体外培养上清液IgG浓度与对照抗体组相比,差异有显著性(P值分别为0.01和0.05).结论CD154在活动期SLE的B淋巴细胞中有异常表达,其异常调控可能是导致分泌自身抗体B细胞克隆增生的主要原因.
-
阻断共刺激通路诱导产生的无能细胞的抗原特异性免疫调节作用
目的:了解联合阻断B7-CD28和CD40-CD154通路诱导产生的小鼠免疫无能细胞的免疫调节特性和表型,以及是否具有抗原特异性.方法:Anti-CD154和anti-CD80单克隆抗体加入BALB/C(反应细胞)和C3H(刺激细胞)的混合淋巴细胞培养(MLR)体系中诱导产生无能细胞.将无能细胞或对照细胞分别加入新的BALB/C和C3H的MLR体系中观察抑制效果.在反应细胞和刺激细胞/第三方刺激细胞(C57BL/6J)之间的MLR体系中加入无能细胞观察抗原特异性.无能细胞中加入刺激细胞或rmIL-2,观察无能细胞的逆转情况.通过流式细胞仪检测无能细胞的表型.结果:无能细胞对反应细胞和刺激细胞之间的MLR具有抑制作用,且呈剂量依赖关系.无能细胞对于反应细胞和第三方刺激细胞之间的MLR无抑制作用.C3H刺激细胞和rmIL-2共同刺激才能逆转无能细胞的无能状态.无能细胞中CD25+CD4+T细胞含量上升,而CD45RBlowCD4+和CD28-CD8+T细胞含量无改变.结论:联合阻断B7-CD28和CD40-CD154通路诱导产生的小鼠免疫无能细胞具有抗原特异性的免疫调节功能,可以通过感染性耐受的方式抑制淋巴细胞的增殖.
-
CD154分子表达转录调控的研究进展
CD154分子是肿瘤坏死因子(TNF)家族中的一个成员,它与其受体CD40结合后介导产生一系列免疫效应,在体液免疫及细胞免疫应答中发挥着重要作用.CD154分子表达水平与其介导炎症应答强度密切相关.同TNF家族成员一样,CD154分子的表达调控主要集中在转录水平,受诸多转录因子的直接调控.这些转录因子通过调控CD154表达水平,在CD154介导相关疾病中发挥重要作用.CD154分子异常表达及其诱导的炎症反应是包括自身免疫系统疾病、心血管疾病、糖尿病和肿瘤等多种疾病在内的重要发病机制之一.在转录层面对CD154分子表达进行调控将是临床治疗上述疾病的一个关键干预手段.
-
阻断型CD154抗体和CD80抗体生物学作用的研究
为比较阻断型抗人CD154单克隆抗体(1B1)和抗人CD80单克隆抗体(3H8)的单独及联合应用在调节CD4+T细胞对同种抗原的初次和再次免疫应答中的作用.采用免疫磁珠阴性选择法分离获得人外周血CD4+T细胞、将纯化的CD4+T细胞与刺激细胞体外共培养,通过检测培养上清IL-2、IFN-γ水平以及CD4+T细胞的增殖来评价1B1和3H8的生物学作用.结果显示,1B1和3H8单独或联合应用能不同程度地抑制混合淋巴细胞反应中CD4+T细胞对同种抗原刺激的增殖,下调CD4+T细胞分泌IL-2和IFN-γ,并且在再次反应中能有效诱导CD4+T细胞对同种抗原的免疫低反应性.因此,1B1和3H8的单独及联合应用在移植排斥的免疫干预及同种抗原免疫耐受的诱导中具有潜在的应用前景.
-
CD154 cDNA克隆、单克隆抗体制备及特异性鉴定
本研究目的是获得特异性抗人CD154单克隆抗体.利用特异引物,通过RT-PCR从人外周血淋巴细胞中扩增出编码CD154分子的cDNA全长,将其克隆在谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白表达载体pGEX4T-3中,转染大肠杆菌Jm109经诱导获得GST-CD154表达.融合蛋白经分离纯化后,免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术,通过ELISA双筛,得到2株抗CD154单抗(1D3和5H4).其亚型分别是IgG2a和IgG1.又将CD154 cDNA全长构建真核表达载体pcDNA3-CD154,并转染COS细胞,以G418筛选后,经RT-PCR结果证实pcDNA3-CD154已成功转染COS细胞.所获单抗对转染CD154的COS细胞和刺激活化的人淋巴细胞有特异性结合反应,为进一步研究单抗功能奠定了实验基础.
-
细菌感染时新生儿CD4+T细胞表面标记物的表达
目的研究新生儿CD4+T细胞在细菌感染时的作用及作为临床应用感染性证据的可能性.方法应用流式细胞仪和单克隆抗体,分别测定19例正常足月新生儿和17例细菌感染足月新生儿治疗前后其CD4+T细胞表面的白介素-2受体α链(CD25)、β链(CD122)、γ链(CD132)和CD154的表达情况.结果 CD25、CD122、CD132和CD154在正常新生儿CD4+T细胞上的表达较低,分别为(3.84±3.61)%、(0.74±0.53)%、(12.70±8.54)%和(1.08±1.04)%,其在细菌感染组新生儿CD4+T细胞上的表达分别为(9.89±9.66)%、(5.79±11.14)%、(21.78±11.34)%和(6.69±7.87)%,较正常新生儿组明显升高(P＜0.05),且治疗前后均无显著变化(P＞0.05).结论正常新生儿CD4+T细胞的CD25、CD122、CD132和CD154表达较低,在细菌感染时表达上调,可作为新生儿细菌感染诊断的参考指标.
-
活动期类风湿性关节炎患者外周血CD4+T 细胞的表型分析
目的分析活动期类风湿性关节炎(RA)患者外周血CD4+T淋巴细胞的表型变化,探讨其免疫病理机制.方法采用ELISA和双标记免疫荧光法检测47例活动期RA患者和50例健康成人外周血CD4+T细胞表面CD154、CD69的表达以及血清、血浆可溶性CD154(sCD154)的含量.结果活动期RA患者的外周血CD4+T细胞CD154(16.7%±8.1%)和CD69(13.9%±7.1%)的表达水平均显著高于健康人,其血清sCD154(18.43±6.27,ng/ml)和血浆sCD154(8.34±3.42,ng/ml)含量亦分别高于健康人血清sCD154(9.56±4.71,ng/ml)和血浆sCD154(2.98±1.13,ng/ml).结论CD4+T细胞表达的CD154、CD69以及血浆sCD154含量与RA的病程密切相关,可以成为RA的辅助诊断、疗效估价和预后判断的有价值的实验室参数.
-
mHSP70分子中免疫刺激肽段与CD40对接复合物的结构模拟
微生物体内的70 ku热休克蛋白407-426片段可以有效刺激体内CD40+抗原递呈细胞如DC,单核细胞等的成熟,可有效刺激体内产生IL12和TNFα,被认为是CD40L的替代配体,因此对免疫系统有着重要的意义.同时,该片段还可以有效结合外源蛋白分子,因此又是天然的递呈抗原的载体佐剂.该文章以开发新型载体佐剂为目的,使用Discovery studio软件分析经过单片段与两次串联的该肽段结构并预测了它们与CD40分子进行对接后的复合物.经过分析其关键结合位点,阐明了该肽段与CD40分子间参与相互作用的残基,并发现经过2次串联的肽段确实可以比单片段更有效的与CD40进行相互作用.因此,实验结果可为新型肿瘤疫苗的设计提供理论依据.
-
单核细胞CD40、血小板CD154及血清MCP-1在原发性高血压中的意义
目的 观察单核细胞CD40、血小板CD154及血清MCP-1表达对原发性高血压患者病情和心脑血管并发症评估的意义.方法 测定95例原发性高血压病患者和50例健康者单核细胞CD40、血小板CD154表达水平及血清单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)浓度.结果 EH组CD40和CD154表达水平、MCP-I浓度均显著高于对照组(P＜0.001);MCP-1浓度与CD40和CD154表达水平均呈高度正相关(R2=0.4738、0.7375;均P＜0.001).高血压Ⅱ级组CD40和CD154表达水平、MCP-1浓度均显著高于Ⅰ级组,Ⅲ级组显著高于Ⅱ级组(P＜0.01).EH并发心血管病组和并发脑血管病组CD40和CD154表达率、MCP-1浓度均显著高于单纯高血压组(P＜0.001);三者在两并发症组之间无显著差异(P＞0.05).结论 单核细胞CD40、血小板CD154及血清MCP-1水平可作为原发性高血压进展和心脑血管并发症评估的重要指标.
关键词： 原发性高血压 CD40 CD154 单核细胞趋化蛋白-1 心脑血管并发症 -
CD154反义RNA诱导Jurkat细胞的凋亡
目的探讨CD154反义RNA诱导Jurkat细胞凋亡的作用. 方法应用RT-PCR扩增人CD154膜外段基因,以及T-A克隆技术和亚克隆技术构建CD154反义RNA的真核表达载体,并将其转染入Jurkat细胞中.应用电镜及流式细胞仪(FCM)检测观察Jurkat细胞的凋亡指标. 结果电镜观察CD154反义RNA转染的Jurkat细胞内可见凋亡小体,并且FCM检测显示一明显的凋亡峰. 结论 CD154反义RNA可诱导Jurkat细胞凋亡.
-
尖锐湿疣患者外周血T细胞体外活化后CD154表达的研究
目的:比较不同病程尖锐湿疣(CA)患者和正常人外周血T细胞CD4/CD8比值及体外活化后CD154表达水平.方法:活化前分别对正常人及不同病程CA患者外周血标记CD3、CD4和CD8,全血体外活化6h后标记CD3和CD154,分离外周血有核细胞后用流式细胞仪检测并比较不同病程CA患者和正常对照者外周血T细胞CD4/CD8比值及CD154表达水平.结果:长病程CA患者外周血T细胞CD4/CD8比值明显低于正常人及短病程组(P＜0.05),体外活化6h后,长病程组CD154表达水平明显低于其他两组(P＜0.05).结论:长病程CA患者外周血CD4+T细胞数量下降导致CD154表达水平下降及Thl/Th2平衡失调.
-
CD40-CD154共刺激信号及其在角膜移植排斥中的研究进展
角膜移植手术失败的主要原因是T细胞介导的免疫排斥反应,T细胞的充分活化需要共刺激信号的协同作用.研究表明CD40-CD154信号在角膜移植排斥中具有重要意义,阻断该信号可延长移植物的存活.本文就其分子特性、免疫学功能进行了综述,重点探讨了阻断该信号抑制角膜移植排斥反应的效应和机制.
-
阻断CD154-CD40信号途径对血小板诱导内皮细胞表达基质金属蛋白酶-1的影响
目的:探讨活化血小板及T淋巴细胞经CD154分子诱导内皮细胞表达基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的功能差异;并分析阻断CD154-CD40信号途径对血小板诱导内皮细胞表达MMP-1的影响.方法:体外分离健康人血小板及淋巴细胞,凝血酶(1 U/ml )诱导血小板活化,植物血凝素(10 mg/L)和佛波脂(20 μg/L)刺激T淋巴细胞增殖并发生活化.以流式细胞术检测血小板及T淋巴细胞CD154表达水平,然后使其分别与培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)共育.以未经刺激的HUVECs作为阴性对照,TNF-α(200 U/ml)刺激的HUVECs作为阳性对照,并使用特异性CD154及CD40阻断单抗;逆转录-聚合酶链式反应测定HUVECs表达MMP-1 mRAN水平,底物凝胶电泳酶谱法检测培养基中MMP-1活性.结果:以表达同等水平CD154的血小板及T淋巴细胞分别作用于HUVECs后,均能显著提高MMP-1 mRNA表达,同时培养基中MMP-1活性也明显增强(P<0.01).但在诱导血小板或T淋巴细胞活化前加入CD154单抗,上述效应又都受到明显抑制.同样,在活化血小板诱导HUVECs之前,如果向培养基中加入CD40单抗,也能显著降低MMP-1 mRNA表达及其活性(P<0.01).结论:活化血小板及T淋巴细胞表面的CD154分子,在诱导内皮细胞表达MMP-1方面具有完全相同的生物学功能;阻断CD154-CD40信号途径可有效抑制血小板对内皮细胞表达MMP-1的诱导作用.
-
活化血小板对血管内皮细胞表达基质金属蛋白酶-1的影响
目的:探讨活化血小板对血管内皮细胞表达基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的影响及其分子学机制.方法:体外分离健康人血小板,经不同浓度ADP、凝血酶诱导后,通过流式细胞术测定血小板CD62P、CD154表达水平;同时共育血小板与培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs),应用RT-PCR法检测HUVECs MMP-1 mRNA表达,底物凝胶电泳酶谱法分析培养基中MMP-1活性.结果:ADP或凝血酶均呈浓度依赖方式增加血小板CD62P、CD154表达.以ADP(4 μmol/L)或凝血酶(1 U/m1)诱导的血小板与HUVECs共育后,均能显著增加HUVECs MMP-1 mR-NA表达(P＜0.05),同时培养基中MMP-1活性与未刺激组相比也明显增强(P＜0.01),使用特异性CD154单抗后可阻断上述作用.静息血小板、单纯等量ADP或凝血酶,对MMP-1 mRNA表达及MMP-1活性均无影响(P＞0.05).结论:活化血小板可通过其表达的CD154分子诱导内皮细胞产生MMP-1,此效应对不稳定斑块的破裂可能具有促进作用.
