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HLA-Cw基因的高分辨分型在造血干细胞移植中意义的初步探讨
目的 研究HLA-Cw基因的高分辨分型在急性白血病非亲缘性造血干细胞移植中的意义.方法 对中国造血干细胞捐献者资料库中提供的76例白血病患者(AIL 21例、CML 32例、AML23例),采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)联合序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSOP)方法进行HLA高分辨分型.结果 ALL患者中HLA-Cw高分辨分型的常见位点:Cw*0102、Cw*0304、Cw*0302、Cw*0702、Cw*0801;表型频率分别为0.57、0.33、0.19、0.14、0.14.ALL患者与志愿者相比其Cw*0102、Cw*0304的表型频率差异有统计学意义,P＜0.05;而Cw*0302、Cw*0702、Cw*0801的表型频率无统计学意义,P＞0.05.7例ALL患者与供者HLA的10个位点全相合,占33.3%,HLA-Cw全相合常见的基因亚位点为Cw*0102(4/7),次之为Cw*0702(2/7).CML患者中HLA-Cw高分辨分型的常见位点:Cw*0702、Cw*0102、Cw*0304、Cw*0801、Cw*0401、Cw*0303;表型频率分别为0.41、0.34、0.22、O.19、O.16、0.13,这些基因位点与志愿者相比其表型频率均无统计学意义,P＞0.05.8例患者与供者的10个位点全相合,占25.0%,HLA-Cw全相合常见的基因亚位点为Cw*0702(5/8),次之为Cw*0304(3/8).在23例AML患者中4例与供者HLA的10个位点全相合患者均为M2型.结论在ALL患者中其Cw*0102和Cw*0304基因表型频率明显增高,有利于ALL患者寻找到相合位点的供体.HLA-Cw基因是造成移植物抗宿主病(GVHD)发生和影响移植效果的重要因素,在非亲缘性和单倍体移植中必须进行HLA-Cw基因的高分辨检测.
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供受者HLA高分辨基因分型不合对非血缘造血干细胞移植患者预后的影响
目的 研究供受者HLA高分辨基因分型错配对非亲缘造血干细胞移植(HSCT)患者预后的影响.方法 对来源于中华骨髓库随访登记的835对供受者资料进行回顾性分析,其中急性髓系白血病(AML)288例,急性淋巴细胞白血病(ALL)227例,慢性髓性白血病(CML)187例,骨髓增生异常综合征(MDS)52例,非霍奇金淋巴瘤(NHL)25例,再生障碍性贫血(AA)42例,地中海贫血14例.HLA.A、B、C、DRBI、DQBl高分辨基因分型采用DNA序列测定、序列特异性寡核苷酸探针和高分辨序列特异性引物分型方法.在835对供受者中HLA不相合473对,其中HLA 1个等位基冈错配159对,1个抗原错配125对,1个等位基因加1个抗原错配95对,2个等位基因错配29对,2个抗原错配20对,多个等位基因加抗原错配45对.随访截止到2011年3月.结果 供受者HLA全相合总体生存(OS)率高于HLA不相合者(分别为79.83%和73.15%),差异无统计学意义(P>0.05),但HLA的1个等位基因加1个抗原错配是影响HSCT患者OS、无病生存和移植相关死亡率的重要危险因素.不同疾病类型患者的0s率从高到低为地中海贫血、AA、CML、MDS、AML、NHL和ALL.HLA位点错配的受者OS率分别为DRBI 94.4%、DQBl 83.3%、B 75.0%、A 74.4%和C 71.4%.1个等位基因错配的受者OS率从高到低为DRBI、C、A、B和DQBI.A、B、C位点错配的受者OS率和Ⅱ~Ⅳ度急性移植物抗宿主病(aGVHD)发生率与全相合受者比较差异均有统计学意义(P值均<0.05).优先考虑供受者HLA错配类型为B*15:01/B*15:05、DRBI*12:01/DRBI*12:02、C*04:01/C*03:04和DQBI*03:02/DQBI*03:03.供受者为B*39:01/B*39:05、C*15:02/C*14:02、C*08:01/C*03:04和C*07:02/C*15:02错配是影响移植患者OS率和aGVHD发生的危险因素.结论 HLA-A、B、C、DRBl和DQBl高分辨基因分型对筛选供受者HLA不允许错配类型,进而选择合适无关供者进行HSCT有重要意义,并可改善移植患者的存活率.
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四川骨髓库汉族人群HLA-B* 15等位基因分布
目的 采用聚合酶链反应-序列分析基础上的HLA分型(polymerase chain reaction-sequence based typ- ing,PCR-SBT)方法,研究中国造血干细胞捐献者资料库(以下简称为中华骨髓库,CMDP)四川分库中四川籍汉族人群HLA-B*15组等位基因的分布特点.方法 从四川骨髓分库中汉族人群中/低分辨分型HLA-B*15 阳性样本中按不同血清学特异性分层抽取107例样本,应用PCR-SBT技术进行测序分型,获得四川籍汉族人群B*15组高分辨分型结果.应用方根法计算HLA-B*15各等位基因频率,同时与其他人群资料进行比较.结果 共检测到16种巳知HLA-B*15等位基因和1例未知等位基因.本研究中检出的16种等位基因有:B*15010101(B62),B*1502(B75),B*1503(B72),B*1505(B62),B*1507(B62),B*151101(B75),B*1512(B76),B*1513(B77),B*1517(B63),B*1518(B71),B*1525(B62),B*1527(B62),B*1529(B15),B*1532(B62),B*1546(B72),B*1558(B62).其中以B*1502(36.2%)常见,其次为B*15010101(21.6%),B*151101(9.5%),B*1518(6.9%),B*1525(6.0%),这5种等位基因占B*15等位基因家族的80%.在B*15等位基因家族中,表达B75抗原的等位基因B*1502和B*151101共占45.7%,但表达B62抗原的B*15等位基因多态性强,共检出7种等位基因.此外,本研究发现1例未知等位基因,该等基因序列与目前所有已知的B*15或B*46等位基因序列均不相同,在外显子3的116位处存在1个点突变C->T.结论 研究表明在四川籍汉族人群中HLA-B*15等位基因水平表现出丰富的多态性和特有的分布特征.
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新等位基因HLA-B*15∶179∶02的确认和基因序列分析
目的 鉴定并确认HLA新等位基因HLA-B* 15∶179∶02,分析其核苷酸序列.方法 使用磁珠法抽提标本DNA,采用聚合酶链反应序列-特异寡核苷酸探针杂交技术(PCR-SSOP)进行HLA高分辨分型常规检测,发现1个与HLA-B* 15∶179相关的异常等位基因,使用DNA测序分型技术(PCR-SBT)及使用组特异性GSSP引物Z74,直接测定其基因序列,分析其相关核苷酸序列差异.结果 新等位基因与所有已知的HLA-B序列均不相同,与同源性高HLA-B* 15∶179∶01基因序列相比在第3外显子486位碱基发生突变(C＞G).结论 发现1个新的HLA-B等位基因,现已被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-B* 15∶179∶02.
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DNA序列分析鉴定HLA新等位基因B*58∶01∶04
目的 确认中国人群中的1个新HLA等位基因.方法 使用PCR-SSO、PCR-SSP和测序为基础的分型技术,分析确认HLA-B位点新等位基因与B*58∶01∶01的差异.结果 先证者HLA-B位点的2个等位基因为纯合子(均为HLA-B*58∶ 01∶04),不同于(已)知的HLA-B等位基因序列,与其同源性高的B*58∶01∶01相比,在第4外显子处有1个碱基发生了改变,为785位G＞A,但编码的氨基酸并未发生变化,仍然为Gln.结论 该等位基因于2009年10月由WHO HLA因子命名委员会正式命名为HLA-B*58∶ 01∶04.
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HLA检测技术及其应用的研究进展
人类白细胞抗原(HLA)基因检测技术已应用于造血干细胞移植供受者选择、药物个性化治疗、群体遗传多态性和某些疾病关联的研究等方面.近年来国内外HLA研究取得一系列进展包括:升级了《常见及确认的HLA等位基因表》,新一代测序平台应用于HLA基因分型;发现在HLA错配和单体型造血干细胞移植前宜做供者HLA特异性抗体检测;HLA基因与某些药物引发的严重不良反应密切相关,HLA-C区域上游35 kb的1个SNP位点(rs9264942-35C/T)与HLA-C表达水平和个体HIV感染后的病毒载量水平有关;与Hsa-miR-148a结合的HLA-C 3'端非编码区域内的碱基变异可调节HLA-C mRNA的表达.HLA表达沉默的巨核细胞和血小板,可逃避HLA抗体介导的细胞毒性反应,有助于解决血小板输注无效问题.
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甲状腺肿瘤患者的MHC基因频率分布及sMICA表达水平初探
目的 初步研究甲状腺肿瘤患者MHC基因频率分布及sMICA表达水平及相互关系.方法 提取2个甲状腺肿瘤病例组(44名经术后病理证实为甲状腺癌的患者及87名甲状腺良性肿瘤患者)、1个健康对照组(133名健康体检者)的全血基因组DNA,采用直接测序法做HLA、MICA、MICB高分辨分型;运用PypopWin32分析各基因位点的基因频率分析;SPSS 17.0分析甲状腺癌患者与MICA/B及HLA等位基因的相关性.运用ELISA法对上述研究对象的血清做sMICA半定量检测.结果 MICB*004∶01在甲状腺癌组、甲状腺良性肿瘤组和健康体检组的频率分别为:1.351％ (1/44)、5.769％(6/87)、10.078％(26/133),是免患甲状腺癌患者的保护等位基因[P=0.014,RR(95％CI) =0.122(0.016-0.91)];DRB1 *15∶01和DRB1 *04∶03为甲状腺良性肿瘤的保护等位基因(P＜0.05,RR＜1);甲状腺癌患者与甲状腺良性肿瘤及健康体检者血清sMICA水平(ng/mL)分别为:0.233 1±0.244 5vs0.1819±0.1947vs 0.2284 ±0.2787(P ＞0.05).结论 HLA基因与甲状腺肿瘤疾病存在关联,其中MICB*004∶ 01与患甲状腺癌风险呈负相关.
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天水地区HLA-B27基因高分辨分型与强直性脊柱炎相关性分析研究
目的:研究天水地区HLA-B27基因高分辨分型与强直性脊柱炎(Ankylosing Spondylits,AS)相关性的分析研究.方法:采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)技术对天水地区AS患者进行HLA-B27基因高分辨分型.结果:采用PCR-SSP法对天水地区疑似AS进行HLA-B27检测,共发现87例阳性.对阳性者用PCR-SSP法进行HLA-B2701-43基因高分辨分型;其中HLA-B2704 30例,占阳性总人数的34.48％;HLA-B2705 55例,占阳性总人数的63.22％;HLA-B2707 2例,占阳性总人数的2.30％,该基因型是国内首次在AS患者中发现.结论:初步发现天水地区AS患者亏HLA-B2704、HLA-B2705有强相关性,偶见HLA-B2707阳性的AS患者,符合亚洲人特点.
