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利用双层固体平板法进行疏螺旋体单菌落分离的研究
疏螺旋体属包括多个人类的致病菌,如引起莱姆病的伯氏疏螺旋体( Bor-relia burgdorferi)。疏螺旋体的基因组结构特殊,包括染色体和约20个大小不等的质粒。一些质粒在传代培养过程容易丢失,然而却是维持病原菌感染性所必需的。疏螺旋体的单菌落分离及纯培养不能按照常规的微生物学方法进行,因为该菌株只能在复杂的 BSK ( Barbour-Stoenner-Kelly)培养基中缓慢生长。疏螺旋体是一种不好氧的细菌,常规的涂布平板法和平板划线法不利于菌株的生长。本研究利用双层琼脂平板的方法进行疏螺旋体的单菌落分离及纯化,操作简单快速,便于获得遗传背景单一的单克隆菌株。
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梅毒螺旋体Tp0453重组蛋白的表达及在梅毒血清学诊断中的初步应用
目的克隆、表达梅毒螺旋体(Tp)外膜蛋白Tp0453,建立间接ELISA法,探讨其在梅毒血清学诊断中的应用.方法构建重组质粒pQE32/Tp0453,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和免疫印迹鉴定表达结果;Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人血清中特异性IgG抗体.结果成功构建了重组质粒pQE32/Tp0453;SDS-PAGE检测诱导产物显示有一分子量约为32000的特异蛋白带,免疫印迹检测其只与Tp IgG抗体具有阳性反应;重组蛋白用作ELISA包被抗原检测Tp阴阳性参比血清,特异度和灵敏度均为100%;检测患者血清中特异性IgG抗体结果与TPPA法符合率为98.2%.结论表达的Tp0453重组蛋白具有较好的免疫反应活性,可望用于梅毒的血清学诊断.
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梅毒患者外周血单一核细胞诱导的树突细胞的生物学特性
目的 探讨梅毒患者外周血单一核细胞(PBMc)诱导的树突细胞(DC)的生物学特性.方法 分离诱导产生单一核细胞来源的树突细胞(MoDC),比较梅毒患者与正常对照组MoDC表型的差异;用重组梅毒螺旋体脂蛋白TpN17体外刺激正常人MoDC后观察其表型的变化、免疫印迹法检测细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化的情况.结果 与正常对照组相比,梅毒患者MoDC细胞表面CD80(5 1.90%)表达明显上升(P<0.05).CD83(16.53%)、CD86(66.13%)及HLA-DR(91.29%)的表达率与对照组差异无统计学意义(P>0.05).TpN17可以刺激MoDC表面CD80、CD83表达升高,细胞表达磷酸化ERK1/2(p-44/42);未经TpN17刺激的DC,无磷酸化ERK蛋白表达.结论 梅毒患者MoDC表型的异常可能与梅毒螺旋体抗原刺激有关,TpN17可以刺激DC成熟,其信号转导途径与ERK有关.
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人莱姆病的实验室诊断方法的现状
伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi,Bb)是新发现的人兽共患病--莱姆病的病原体,主要通过硬蜱吸血传播给人.人对该螺旋体普遍敏感,感染后约半数以上发病.此病先由Steere于1975年在美国康涅狄格洲的莱姆镇发现而命名.人莱姆病临床表现多样,极易造成误诊.对莱姆病的诊断除参考流行病学资料、接触史、临床症状外,实验室诊断主要分为病原体分离及血清学检查两部分.本文就莱姆病的实验室诊断作一综述.
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梅毒螺旋体抗体检测的临床应用探讨
梅毒螺旋体属于苍白密螺旋体的苍白亚种,是引起人类梅毒的病原体.梅毒是临床上常见的一种性传播疾病,少数也可因输血、手术创面等直接传播,也可经胎盘感染胎儿.感染后可造成人体器官和神经系统的损坏,产生多种症状与体征,后果十分严重,早期梅毒诊断方法的发展和完善,有利于指导临床及时治疗,对于控制梅毒的蔓延有重要意义.目前多采用甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、双抗原夹心法酶联免疫吸附试验(TP-ELISA),我科用以上两种方法对我院1515例患者进行检测并对临床应用进行探讨分析.
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化学发光法测定梅毒抗体的性能验证
目的 对美国雅培公司化学发光法测定梅毒螺旋体抗体的临界(Cut-off)值、精密度、灵敏度和特异性等进行验证和评价.方法 分别使用美国临床和实验室标准化协会(CLSI)发布的EP5-A2、EP-17A对其精密度和灵敏度进行评价,使用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)确认试验对其特异性进行评价.结果 化学发光法的Cut-off值以0.36佳,精密度、灵敏度和特异性与厂家数据一致.结论 美国雅培公司化学发光法测定梅毒螺旋体抗体的性能符合要求.