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miR-9在宫颈癌组织中的表达及其靶基因的预测和生物信息学分析
目的：探讨宫颈癌组织中miR-9表达，并对靶基因进行预测及生物信息学分析，为深入研究miR-9的调控机制及生物学功能提供理论依据。方法应用miRNAs芯片检测宫颈癌组织及正常宫颈组织中miRNAs表达，利用生物学软件对其中上调较明显的miR-9进行靶基因预测，同时利用基因芯片技术筛选转染miR-9后宫颈癌Hela细胞中差异表达的基因，将两者预测靶基因的交集作为miR-9的靶基因进行GO富集分析和生物通路富集分析。结果与正常宫颈组织比较，宫颈癌组织中有15个miRNAs表达为上调，10个miRNAs表达为下调，其中上调较明显的是miR-21和miR-9，下调较明显的是miR-376a和miR-218。芯片所示的miR-9调控的下调基因与软件预测的靶基因交集中共有148个基因，miR-9的预测靶基因富集在细胞内的生物学调控、合成和代谢等生物学过程以及转录调控和蛋白结合等分子功能上，其信号通路富集于调节肌动蛋白细胞骨架、脂质代谢和细胞黏附通路。结论 miR-9在宫颈癌组织中高表达，miR-9预测的靶基因富集于多个生物学功能和生物学过程及与肿瘤相关的信号通路。
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食管癌组织和癌旁组织miR-9表达差异研究
目的:探讨食管癌癌组织和癌旁组织中miR-9的表达差异,并对潜在的miR-9靶基因进行预测.方法:采用SYBR GreenⅠ染色的实时荧光定量PCR (qRT-PCR)对50例食管癌及配对癌旁正常组织标本中miR-9基因的表达水平进行定量分析,并运用生物信息学技术对miR-9的靶基因进行预测.结果:miR-9在食管癌组织中的表达显著低于癌旁正常组织(P＜0.05),且与患者淋巴结转移有关(P＜0.05),与性别、年龄、组织学分型、TNM分期无关(P＞0.05).对miR-9预测得到GOLPH3、RAB34、ALCAM靶基因.结论:miR-9在食管癌组织中低表达,而且与淋巴结转移有关,可能在食管癌的发病中起重要作用.
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蛇床子素上调miR-9促进神经干细胞分化的研究
目的:探讨蛇床子素对β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)诱导的神经干细胞分化的作用及其可能作用的机制.方法:体外分离并培养新生小鼠脑源NSCs,体外以20μmol/L的Aβ1-42诱导神经干细胞,建立阿尔茨海默病的神经干细胞模型,通过CCK-8法检测神经干细胞存活率;免疫荧光细胞化学法研究蛇床子素对Aβ1-42诱导的神经干细胞分化能力的影响;RT-PCR检测miR-9 mRNA的表达情况.结果:免疫荧光细胞化学法显示神经球显Nestin、Sox2阳性,即所培养的细胞为NSCs;CCK8法结果显示50μmol/L、100μmol/L蛇床子素作用可明显促进NSC存活;Aβ1-42孵育的NSCs用蛇床子素(50、100μmol/L)作用后,神经干细胞向神经元分化的数量明显增加,以蛇床子素1 00μmol/L作用神经干细胞向神经元分化的数量增加显著.而转染了miR-9抑制剂后,与Aβ1-4220μmol/L组相比,Aβ1-42220μmol/L+ miR-9抑制剂组的NF-M阳性细胞率明显降低,而Aβ1-42 20μmol/L+ miR-9抑制剂+蛇床子素100 μmol/L组NF-M阳性细胞率与Aβ1-42 20μmol/L+ miR-9抑制剂组相比显著增加;PCR结果显示,蛇床子素100μmol/L可增加miR-9 mRNA的表达.结论:蛇床子素可促使NSCs向神经元分化,其机制可能与蛇床子素上调miR-9信号通路有关.
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miR-9在TGF-β诱导的人肾小管上皮细胞纤维化中的作用
目的 探讨miR-9对转化生长因子β(TGF-β)诱导的HK-2肾小管上皮细胞纤维化过程中的作用.方法 永生化的HK-2细胞给予5 ng/mL TGF-β刺激0、72 h,应用实时荧光定量PCR检测上皮钙黏素(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、1型胶原蛋白(Col1)、3型胶原蛋白(Col3)、纤连蛋白(fibronectin)、结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA和miR-9水平;Western blot法检测E-cadherin、α-SMA、Col1、Col3、fibronectin、CTGF的表达变化;给予5 ng/mL TGF-β刺激或不用TGF-β刺激的HK-2细胞,培养48 h,转染miR-9的模拟物、模拟物阴性对照,采用实时定量PCR及Western blot法检测上述指标的变化.生物信息学方法预测miR-9的靶基因,荧光素酶报告基因法进行验证.结果 TGF-β刺激72 h后,HK-2细胞中的miR-9、α-SMA、Col1、Col3、fibronectin、CTGF的水平增加,而E-cadherin水平下降;给予HK-2细胞转染miR-9模拟物后,miR-9、α-SMA、Col1、Col3、fibronectin、CTGF含量增加,E-cadherin含量下降;给予HK-2细胞TGF-β刺激48 h并转染miR-9抑制剂后,miR-9、α-SMA、Col1、Col3、fibronectin、CTGF含量下降,E-cadherin含量增加.通过TargetScan进行生物学信息预测,结果显示E-cadherin可能为miR-9的靶基因,并通过荧光素酶报告基因确证.结论 miR-9在人HK-2细胞转分化中起重要作用,并且通过抑制E-cadherin的表达而促进HK-2细胞转分化及纤维化.miR-9抑制剂可逆转TGF-β刺激HK-2细胞转分化及纤维化.
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miR-9对肾癌细胞株侵袭和增殖能力的影响
目的 研究miR-9在肾癌、癌旁组织表达情况及其在肾癌细胞系(ACHN)中的作用.方法 运用荧光定量RT-PCR方法测定32例肾癌及相应癌旁组织中miR-9的相对表达量.运用侵袭实验(transwell)及增殖实验(MTT、CCK-8)评估miR-9对ACHN功能的影响.结果 与癌旁正常组织相比,miR-9在肾癌组织中表达显著上调(P＜0.05).体外实验证实,miR-9抑制物inhibitor可显著降低ACHN的侵袭及增值能力,而miR-9类似物minic可显著增加ACHN的侵袭及增值能力(P＜0.05).结论 miR-9影响ACHN的侵袭及增殖能力,其表达可能与肾癌的发生及转移机制相关.
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mir-9在新疆维吾尔族、汉族胶质母细胞瘤中的表达及临床病理分析
目的：检测 mir-9在新疆维吾尔族和汉族胶质母细胞瘤中的表达，以及探讨异常表达的 microRNA与胶质母细胞瘤临床病理学特征的相关性。方法收集25例来源于新疆医科大学第一附属医院2011－2014年手术切除经病理证实的胶质母细胞瘤（WHOⅣ级）患者石蜡组织标本，包括13例汉族和12例维吾尔族，并选取2例癫痫患者切除的正常脑组织作为对照。采用实时定量荧光逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测 mir-9的 mRNA水平的表达。用 Fisher确切概率法、Cox回归和 Graph Pad Prism生存分析方法分析其表达水平与胶质母细胞瘤临床病理特征和预后的关系。结果在胶质母细胞瘤中 mir-9有21例显示高表达，占21／25（84．0％）。与对照组相比，mir-9在胶质母细胞瘤中 mRNA相对平均表达量显著增高（P ＜0．05）。不同年龄的患者其 mir-9异常表达差异有统计学意义（P ＜0．05），而不同民族、性别、发病部位的患者 mir-9异常表达差异均无统计学意义（P ＞0．05）。mir-9、化疗、放疗、放化疗联合和年龄与胶质母细胞瘤患者预后相关（P ＜0．05）。结论 mir-9在胶质母细胞瘤中起着重要的作用，且影响患者的预后，可能作为胶质母细胞瘤的预后指标。
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miR-9在H/RS细胞的表达及其对靶点PRDM1的调控
目的 检测miR-9在霍奇金淋巴瘤H/RS细胞的表达及其对靶点PRDM1的调摔作用.方法 采用荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和原位杂交方法从定量和定位两方面检测miR-9在正常CD19+B淋巴细胞及8株淋巴造血系统肿瘤细胞株中的表达,并将化学合成的miR-9反义寡核苷酸瞬时转染L428细胞使其沉默,观测PRDM1蛋白表达的变化.结果 荧光定量RT-PCR结果显示L428细胞株miR-9的表达远高于正常的CD19+B淋巴细胞和其他淋巴瘤细胞株[分别为OCI-Ly1细胞、Raji细胞、EB病毒(EBV)+永生化B细胞、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)细胞的47倍、50倍、7倍、6倍]；原位杂交结果显示miR-9的表达定位于胞质,在L428细胞呈弥漫强阳性表达,在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和伯基特淋巴瘤细胞株呈散在弱阳性表达,在KARPAS-299和Jurkat细胞表达阴性；瞬时下调L428细胞中miR-9后PRDM1蛋白的表达水平升高.结论 miR-9在经典霍奇金淋巴瘤中扮演着“癌基因”的角色,可能通过转录后调控PRDM1基因发挥着潜在的调节终末B细胞分化功能.
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miR-9通过靶向TIMP-2升高mmp2/mmp9促进胶质瘤细胞迁移与侵袭
目的:探讨miR-9通过靶向抑制TIMP-2蛋白从而促进胶质瘤细胞U-87MG和U251侵袭迁移的影响,方法:体外培养人正常胶质细胞和人胶质瘤细胞U87、U251;采用荧光定量PCR检测人正常胶质细胞HEB和胶质瘤细胞中miR-9各自的表达水平;CCK-8方法检测mir-9对胶质瘤细胞的增殖的影响;克隆形成方法检测miR-9对胶质瘤细胞细胞克隆形成的影响Transwel实验检测miR-9对胶质瘤细胞侵袭的影响;划痕试验检测miR-9对胶质瘤细胞迁移的影响;Annexin V/PI细胞凋亡流式细胞技术检测技术检测miR-9对胶质瘤细胞凋亡的影响;荧光素酶报告基因实验验证miR-9的靶基TIMP-2;Westernblot实验检测TIMP-2、mmp2、mmp9蛋白的表达.结论:胶质瘤细胞miR-9表达水平明显高于人正常胶质细胞HEB;降低miR-9的表达水平能明显抑制胶质瘤细胞U87MG、U251的侵袭迁移能力,升高TIMP-2蛋白水平降低mmp2、mmp9蛋白水平,并促进胶质瘤细胞的凋亡.
