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电针百会穴对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆及脑源性神经营养因子表达的影响
目的 观察电针百会穴对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆功能及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响,探讨电针治疗阿尔茨海默病的作用机制.方法 将30只4月龄雌性APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、百会组和非穴组,每组10只,另取10只同窝阴性野生小鼠为野生组.百会组电针百会穴,非穴组电针非穴,干预28 d,野生组和模型组不干预.采用Morris水迷宫实验观察小鼠学习记忆能力;免疫组化技术观察小鼠大脑皮质β-淀粉样蛋白的沉积;Western blotting和RT-PCR法检测小鼠皮质脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白和基因的表达情况.结果 与模型组相比,百会组小鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05),跨越平台次数明显增加(P<0.01);β-淀粉样蛋白的沉积减少(P<0.05);BDNF蛋白和基因的表达明显增多(P<0.01).非穴组与模型组相比无显著性差异(P>0.05).结论 电针百会穴可改善APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆功能,其作用机制可能与增加大脑皮质BDNF蛋白和基因的表达,降低β-淀粉样蛋白的沉积有关.
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电针百会穴对APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠18F-FDG PET/CT成像及学习记忆的影响
目的:观察电针百会穴对APP/PS1双转基因小鼠葡萄糖代谢水平以及学习记忆的影响,探讨电针治疗阿尔茨海默病的作用机制.方法:将30只雌性12月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、百会组和非穴组,每组10只,另取10只同窝阴性野生小鼠为野生组.百会组电针百会穴,非穴组电针非穴,每次30min,每天1次,每周5天,共治疗4周,野生组和模型组不干预.采用正电子发射断层扫描技术(PET)观察各组小鼠大脑18F-FDG摄取率的水平;Morris水迷宫实验观察小鼠学习记忆.结果:与模型组相比,百会组小鼠逃避潜伏期缩短(P＜ 0.05),跨越平台次数增加(P＜0.01);非穴组小鼠逃避潜伏期与模型组相比无显著性差异(P＞0.05);百会组小鼠18F-FDG摄取率高于野生组、模型组以及非穴组.结论:电针百会穴可改善APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆功能,其作用机制可能是通过改善小鼠脑内葡萄糖代谢从而发挥神经保护作用.
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电针对APP/PS1转基因AD小鼠Morris水迷宫学习记忆行为的影响
目的 探讨电针对5月龄APP/PS1转基因阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型小鼠学习记忆行为学的影响.方法 将16只APP/PS1转基因阳性雄鼠随机分为模型组、电针组,每组各8只,8只APP/PS1转基因阴性雄小鼠为对照组,电针组针刺“百会”、“涌泉”穴位后接电针仪,疏密波,每次针刺持续15 min,隔日1次,对照组、模型组以相同方法用鼠袋束缚15 min,隔日1次,3组都持续5周,以Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力.结果 3组间的鼠逃避潜伏期的差异均有统计学意义(P＜0.05),电针组与模型组小鼠之间的差异有统计学意义(P＜0.05).结论 电针能提高APP/PS1转基因AD模型小鼠的学习记忆能力.
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APP/PS1双转基因小鼠的繁育、鉴定及评价
目的:评价APP/PS1双转基因小鼠基因表达及认知行为能力的变化,为AD的相关研究提供有效的动物模型.方法:采用雄、雌鼠1∶1合笼配对的方式,令APP/PS1双转基因小鼠自然交配进行繁育.PCR鉴定APP/PS1双转基因鼠仔鼠的基因型后,选择APP/PS1阳性小鼠作为模型(AD)组,同批APP/PS1阴性为对照(CT)组,每组8只小鼠.以Morris水迷宫实验检测仔鼠的空间学习记忆能力,以HE染色、刚果红染色观察仔鼠脑片组织病理学改变.结果:①APP/PS1双转基因鼠仔鼠基因经PCR扩增,出现约360 bp的目的基因条带,表明成功繁育出转入APP/PS1基因的仔鼠;②Morris水迷宫实验结果显示,与7月龄阴性小鼠(CT组)比较,同月龄的双转基因AD组小鼠的空间学习记忆能力明显降低(P＜0.05);③HE染色结果显示,AD组小鼠海马结构及细胞形态出现明显异常;刚果红染色结果显示,AD组小鼠脑片组织出现β淀粉样蛋白斑块沉积.结论:APP/PS1双转基因小鼠较好地模拟了AD的病理变化及行为学特征,可作为研究AD发病机制及开发AD防治药物的实验工具.
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远志皂苷对APP/PS1双转基因小鼠海马神经细胞线粒体的保护作用
目的 观察远志皂苷对APP/PS1双转基因小鼠海马神经细胞线粒体功能的调控,探讨远志皂苷的神经保护作用机制.方法 将APP/PS1双转基因小鼠分为模型组,远志皂苷低、中和高剂量组(18.5、37.0和74.0 mg·kg-1·d-1),选同月龄C57BL/6小鼠为空白对照组,采用免疫荧光检测海马神经细胞线粒体膜电位,流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法等检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力和丙二醛(MDA)含量.结果 与空白对照组相比,模型组线粒体膜电位降低,神经细胞凋亡率增高,SOD,过氧化氢酶(CAT)和(GSH-PX)活性明显降低,MDA含量明显增高;与模型组相比,远志皂苷各剂量组的线粒体膜电位升高,神经细胞凋亡率下降,SOD,CAT和GSH-PX活性明显升高,MDA含量明显降低(P<0.05).结论 远志皂苷可能通过调控线粒体功能,发挥保护海马神经元的作用.
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电针对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力及LC3Ⅱ、P62表达水平的影响
目的 研究电针对APP/PS1双转基因小鼠自噬相关蛋白LC3Ⅱ及受体蛋白P62相关的作用机制.方法 将7月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、电针治疗组,以同窝转基因阴性小鼠为正常对照组.电针治疗组予电针涌泉、百会,15 min/次,隔日1次,治疗6周,利用Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力以及用Western blot法检测小鼠海马区域LC3Ⅱ及P62蛋白的表达.结果 水迷宫结果显示,模型组与正常对照组比较,逃避潜伏时增加(P<0.01);WB结果显示,与对照组相比,模型组LC3Ⅱ表达增强,P62表达减弱(P<0.05);与模型组相比,针刺组LC3Ⅱ表达减弱,P62表达增强(P<0.05).结论 APP/PS1转基因鼠存在神经元自噬途径功能亢进,电针可能通过抑制自噬水平,从而改善学习记忆功能.
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电针对APP／PS1转基因 AD鼠 Morris水迷宫学习记忆及脑皮层Aβ水平的影响
目的：探讨电针对5月龄APP/PS1转基因AD模型鼠学习记忆行为学及脑皮层Aβ水平的影响。方法：20只APP/PS1转基因阳性雄鼠随机分为模型组、电针组，每组各10只，APP/PS1转基因阴性雄鼠10只为对照组，电针组针刺“百会”、“涌泉”后接电针仪，疏密波，每次针刺持续15 min，隔日1次；对照组、模型组以相同方法用鼠袋束缚15 min，隔日1次，3组都持续5周，以Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力，用免疫组化方法检测脑皮层Aβ1-40、Aβ1-42的表达。结果：3组间的逃避潜伏期差异有统计学意义（P＜0．05），电针组与模型组之间的差异有统计学意义（ P＜0．05）。免疫组化电针组Aβ1-40、Aβ1-42的表达降低。结论：电针或许通过减少Aβ的生成来提高APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆能力。
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米索前列醇对APP/PS1转基因小鼠的神经保护作用
目的：观察米索前列醇对APP/PS1转基因小鼠海马和皮层损伤的保护作用并探讨其机制。方法实验动物设4组：转基因模型组和药物处理组 APP/PS1转基因小鼠各10只,老年对照组为野生型C57小鼠10只,药物处理组给予米索前列醇,另两组给予羧甲基纤维素钠,均在小鼠24周龄时以200μg·kg-1的量开始灌胃给予,连续给药20周,每周连续5 d,每天1次；在指标测试阶段,另取10只8周龄野生型C57小鼠作为青年对照组。采用Morris水迷宫测试空间学习记忆能力,HE染色观察海马和皮层神经元形态变化,生化法检测海马和皮层SOD活性、MDA含量变化,免疫组织化学法检测海马和皮层Aβ表达情况。结果与老年对照组小鼠相比,转基因模型组小鼠寻台潜伏期明显延长,海马和皮层神经元出现明显核固缩,SOD活性明显下降,MDA含量明显增加, Aβ表达明显增多；给予米索前列醇后, APP/PS1转基因小鼠寻台潜伏期明显缩短,海马和皮层神经元核固缩明显减轻,SOD活性明显升高,MDA含量明显降低,Aβ表达明显减少。结论米索前列醇对APP/PS1转基因小鼠海马和皮层的神经损伤有显著保护作用,其机制可能与米索前列醇减轻APP/PS1转基因小鼠脑组织氧化应激有关。
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电针百会穴改善APP/PS1转基因小鼠空间学习记忆能力及对磁共振波谱的影响
目的:探讨电针百会穴对APP/PS1转基因小鼠空间学习记忆能力及氢质子磁共振波谱(1H-MRS)的影响.方法:雄性APP/PS1转基因小鼠及雌性阴性小鼠育种后代,经PCR鉴定后将育种后代中15只转基因小鼠根据随机数字表分为模型组7只和电针组8只,8只同窝阴性小鼠作为正常组.电针百会穴干预4周,正常组及模型组同等条件抓取.Morris水迷宫观察小鼠空间学习记忆能力,1H-MRS检测小鼠脑内海马区N-乙酰天门冬氨酸(NAA)、谷氨酸(Glu)水平.结果:Morris水迷宫试验显示,电针组小鼠逃避潜伏期较模型组显著缩短(P＜0.05),穿越平台次数增加(P＜0.05);与模型组小鼠比较,电针组小鼠海马区NAA、Glu水平均较高,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:电针百会穴可改善APP/PS1转基因小鼠空间学习记忆能力,其作用机制可能与脑内海马区NAA、Glu含量增加有关.
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柿叶黄酮类化合物对 APP／PS1转基因小鼠脑组织突触的保护作用
目的：探讨柿叶黄酮类提取物（FLDK）对 APP／PS1小鼠认知水平、突触结构及突触相关蛋白表达的影响。方法20只4月龄 APP／PS1小鼠，随机分为阿尔茨海默病（AD）模型组（AD 组）及治疗组（AD ＋FLDK 组），每组10只；10只4月龄 C57BL／6小鼠为正常对照组（NC 组）。AD ＋FLDK 组给予 FLDK 80 mg ／（kg·d）灌胃干预60 d，AD 组与 NC 组同样方法给予等量生理盐水60 d。分别采用 Morris 水迷宫测试小鼠逃避潜伏期（EL）及穿越平台次数，电镜观察突触超微结构，并用免疫组织化学方法检测皮层及海马区突触素（SYP）和大脑发育调节蛋白（drebrin）的含量。结果与 NC 组相比，AD 组小鼠 EL 明显延长，穿越平台次数显著减少，突触结构模糊，SYP 及drebrin 表达明显减少。与 AD 组相比，AD ＋FLDK 组 EL 减少，穿越平台次数明显增多，突触结构更完整且 SYP、drebrin 表达显著增加。结论FLDK 可显著改善 APP／PS1小鼠学习记忆水平，增强突触结构完整性，提高突触相关蛋白含量，具有认知及突触保护作用。
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异海松酸对AP P／P S1小鼠学习记忆功能及突触可塑性的影响
目的：研究大电导钙激活钾通道（ BKCa ）激活剂异海松酸（ ISO）对APP／PS1转基因阿尔茨海默病模型小鼠认知功能及突触可塑性的影响。方法应用脑立体定向技术向4月龄雄性APP／PS1小鼠和相匹配的野生型（ WT）小鼠左侧侧脑室植入连接Alzet微量渗透压泵的套管，通过微量渗透压泵持续性注射ISO或DMSO治疗。治疗第3周开始在体进行旷场实验和Morris水迷宫实验，之后制备海马脑片，记录海马CA1区兴奋性突触后电位，给予双脉冲刺激检测海马的短时程突触可塑性，给予高频强直电刺激检测海马的长时程突触可塑性。结果在旷场实验中，各组小鼠30 min内自发活动总数及垂直运动距离比较，差异无统计学意义（P＞0．05）；APP／PS1＋DMSO组小鼠水平方向运动距离显著长于WT＋DMSO组（P＜0．05）。定位航行实验的逃避潜伏期，第3～5天APP／PS1＋DMSO组与WT＋DMSO组比较显著延长（P＜0．05）；第4～5天APP／PS1＋ISO组较APP／PS1＋DMSO组显著缩短（P＜0．05）。空间探索实验显示APP／PS1＋DMSO组小鼠穿越平台区时间百分比和穿越平台次数[（34．19±2．56）％，（1．93±0．33）次]较WT＋DMSO组[（43．27±3．24）％，（4．25±0．66）次]显著降低（P＜0．05），APP／PS1＋ISO组小鼠穿越平台区时间百分比[（46．16±3．51）％]和穿越平台次数[（3．41±0．34）次]较APP／PS1＋DMSO组显著增加（P＜0．05）。双脉冲间隔为30、40、和50 ms时，APP／PS1＋DMSO组海马CA1区的双脉冲易化较WT＋DMSO组显著下降（P＜0．05），短时程突触可塑性受损。双脉冲间隔为40 ms时APP／PS1＋ISO组海马CA1区的双脉冲比值[（224．50±13．79）％]与APP／PS1＋DMSO组[（174．99±6．68）％]相比显著升高（P＜0．05），说明ISO促进APP／PS1小鼠海马双脉冲易化作用，有助于恢复海马的短时程突触可塑性。与WT＋DMSO组[TBS后60 min，LTP＝（172．17±4．15）％]相比，APP／PS1＋DMSO组[TBS后60 min，LTP＝（135．19±1．32）％]海马CA1区的长时程增强（LTP）显著下降（P＜0．01）；APP／PS1＋ISO组[TBS后60 min，LTP＝（160．48±1．19）％]海马 CA1区 LTP 与APP／PS1＋DMSO组相比显著升高（P＜0．01），说明ISO对APP／PS1小鼠海马CA1区LTP具有促进作用，有助于恢复海马的长时程突触可塑性。结论 BKCa通道激活剂ISO通过促进双脉冲易化（ PPF）及提高海马LTP恢复APP／PS1小鼠的神经突触可塑性，改善学习和记忆能力。
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pEGFP/A2M(FP6)转染神经干细胞海马移植治疗APP/PS1双转基因AD小鼠的实验观察
目的:携带pEGFP/A2M(FP6)的神经干细胞(NSCs)定向移植到APP/PS1 双转基因AD 小鼠海马内,观察移植细胞的分化、迁移,脑内A茁沉积的变化,以及对AD 小鼠学习记忆功能的影响.方法:APP/PS1 转基因AD 小鼠分为假手术(SO)组、人工脑脊液(ACSF)组、转染pEGFP 的NSCs(pEGFP-NSCs )组及转染pEGFP/A2M(FP6)的NSCs(pEGFP/A2M(FP6)-NSCs )组,移植物小鼠海马CA1 区定位注射,水迷宫实验检测小鼠认知功能,免疫组化观察小鼠脑内移植细胞的分化、迁移及A茁病理变化.结果:pEGFP/A2M (FP6)-NSCs 组和pEGFP-NSCs 组转基因小鼠逃避潜伏期较SO 组及ACSF 组显著缩短(P＜0.05);pEGFP/A2M (FP6)-NSCs 组转基因小鼠逃避潜伏期较pEGFP-NSCs 组缩短(P＜0.05).pEGFP/A2M(FP6) -NSCs 组和pEGFP-NSCs 组转基因小鼠海马及皮质内,部分A茁染色阳性斑块周围可见表达EGFP 的移植细胞.pEGFP/A2M(FP6)-NSCs 组转基因小鼠额叶、海马区域,A茁染色阳性斑块数量和平均面积均较其他3 组显著减少(P＜0.05).移植的NSCs,部分细胞Nestin 染色呈阳性,部分细胞GFAP 染色呈阳性,少数细胞MAP-2 染色呈阳性.结论:移植pEGFP/A2M(FP6)NSCs 到APP/PS1 双转基因AD 小鼠海马,可减少AD 小鼠脑内A茁斑块沉积,部分移植的NSCs 分化为神经元及星形胶质细胞,小鼠的学习记忆功能显著改善.
关键词： 神经干细胞 pEGFP/A2M(FP6) APP/PS1 双转基因小鼠 -
APP/PS1阿尔茨海默病转基因动物模型胼胝体损害研究
目的 探讨APP/PS1阿尔茨海默病转基因动物模型胼胝体病理学改变.方法 取胼胝体作为白质代表区域,采用氯化金髓鞘染色和轴突免疫组织化学染色方法 ,利用光密度方法 对胼胝体轴突密度和髓鞘化程度的染色进行ROD定量分析.结果 年龄相关性分析表明, 老年组小鼠(包括APP/PS1和PS1)的轴突密度较年轻组小鼠显著下降,然而老年组小鼠的髓鞘化程度较年轻组有所增高.不同表型分析显示,年轻组APP/PS1小鼠的轴突密度和髓鞘化程度和年轻组PS1小鼠一致,然而老年组APP/PS1小鼠轴突密度和髓鞘化程度较老年组PS1小鼠显著下降.结论 在APP/PS1阿尔茨海默病转基因动物模型中胼胝体存在着轴突的丢失和脱髓鞘改变,与β淀粉样蛋白对白质的毒性作用有关.
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异常黑胆质成熟剂对APP/PS1转基因AD模型小鼠海马CA11区神经元超微结构的影响
目的 探讨维药异常黑胆质成熟剂(ASMq)对APP/PS1转基因AD模型小鼠海马CA1区神经元超微结构、突触功能与海马神经元存活的影响. 方法 将50只APP/PS1转基因AD模型小鼠随机分为模型组和异常黑胆质成熟剂低、中、高剂量组(异常黑胆质成熟剂给药剂量分别为2.53、5.06、10.12 g/kg体质量)及阳性对照组(多奈哌齐为0.92 mg/kg体质量),各组10只动物;相同月龄10只C57BL/6J小鼠作为正常组.异常黑胆质成熟剂不同剂量组和阳性对照组连续灌胃4个月,1次/d,末次给药1 h后颈椎脱臼处死动物,取出脑组织并固定,扫描镜及透视镜观察其小鼠海马CAI区神经元中突起及突触超微结构的改变. 结果 与模型组比较,异常黑胆质成熟剂各剂量组海马神经元结构均比较完整,突触数量也基本完整其中. 结论 异常黑胆质成熟剂能够改善APP/PS1转基因小鼠脑内神经元突触和线粒体的结构,保护神经元超微结构受损,其中异黑成熟剂高剂量组疗效显著.
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异常黑胆质成熟剂对APP/PS1转基因AD模型小鼠Aβ淀粉样肽生成和聚集途径的影响
目的 探讨异常黑胆质成熟剂(ASMq)对APP/PS1转基因AD模型小鼠Aβ淀粉样肽生成和聚集途径的影响.方法 将50只APP/PS1转基因AD模型小鼠随机分为模型组和异常黑胆质成熟剂低、中、高剂量组(异常黑胆质成熟剂给药剂量分别为2.53、5.06、10.12 g/kg体质量)及阳性对照组(多奈哌齐为0.92 mg/kg体质量),各组10只动物;相同月龄10只C57BL/6J小鼠作为正常组.异常黑胆质成熟剂不同剂量组和阳性对照组连续灌胃4个月,1次/d,末次给药1 h后颈椎脱臼处死动物,取出脑组织并固定,制作常规病理切片,用免疫组织化学和Western blot检测脑组织APP和PS1蛋白表达.结果 模型组小鼠海马CA1区中的APP和PS1阳性细胞数量增多,胞浆着色深,APP和PS1阳性细胞平均数目和平均密度明显高于正常组和异常黑胆质成熟剂高、中剂量组 (P 均<0.01).Western blot结果显示:脑内存在的APP和PS1的含量和表达,与模型组相比异常黑胆质成熟剂各剂量组条带明显变细,颜色变浅,蛋白表达减少.结论 异常黑胆质成熟剂能够降低APP/PS1转基因AD模型小鼠大脑Aβ生成,从而减少Aβ的神经毒性,通过改善突触可塑性提高小鼠的学习记忆功能.
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异常黑胆质成熟剂对APP/PS1转基因AD模型小鼠神经轴突损伤的修复作用
目的 探讨异常黑胆质成熟剂(ASMq)对APP/PS1转基因AD模型小鼠神经轴突损伤的修复作用.方法 将50只APP/PS1转基因AD模型小鼠随机分为模型组和异常黑胆质成熟剂低、中、高剂量组(异常黑胆质成熟剂给药剂量分别为2.53、5.06、10.12 g/kg体质量)及阳性对照组(多奈哌齐为0.92 mg/kg体质量),各组10只动物;相同月龄10只C57BL/6J小鼠作为正常组.异常黑胆质成熟剂不同剂量组和阳性对照组连续灌胃4个月,1次/d,末次给药1 h后颈椎脱臼处死动物,取出脑组织并固定,制作常规病理切片,用免疫组织化学和Western blot检测脑组织Doublecortin、GAP43蛋白表达.结果 模型组小鼠海马CA1区Doublecortin表达的平均密度低于正常组、阳性对照组及异常黑胆质成熟剂中、高剂量组 (P <0.05~0.01).模型组小鼠海马CA1区GAP43表达的平均数目和平均密度明显低于正常组及异常黑胆质成熟剂低、中、高剂量组 (P <0.05~0.01).Western blot结果显示:异常黑胆质成熟剂不同剂量组的Doublecortin和GAP43条带颜色均变深,表明蛋白表达增加.结论 APP/PS1转基因AD模型小鼠脑内存在Doublecortin和GAP43的含量和表达改变,异常黑胆质成熟剂通过调整Doublecortin和GAP43的表达来改善小鼠学习记忆能力.
