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BMSCs移植对矽肺大鼠肺泡巨噬细胞自噬活化的影响
目的：：观察骨髓间充质干细胞( bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对矽肺大鼠肺泡巨噬细胞自噬活化的影响,探讨骨髓间充质干细胞对矽肺的疗效及其机制。方法：体外分离、培养雄性3-5周龄SD大鼠,获取BMSCs原代,培养至3代。将60只雌性SD大鼠随机分为3组( n=20)：对照组,矽肺模型组,BMSCs治疗组。采用非暴露气管灌注法建立大鼠矽肺病模型,于造模成功后12 h给予BMSCs干预治疗(3x106/ml)。分别于1 d、7 d、14 d及28 d处死各组大鼠,应用原位支气管肺泡灌洗技术,获取大鼠肺泡巨噬细胞( Alveolar macrophages, AM)。使用细胞流式仪鉴定BMSCs；HE染色观察AM形态学改变；免疫细胞化学法与Western blotting 法检测LC-3、Beclin-1分布、定位和定量。结果：模型组与对照组相比AM 体积较大,胞质丰富,部分细胞内可见矽尘吞噬颗粒；模型组大鼠肺组织LC-3、Beclin-1在各时间点的表达较对照组均增多(P<0.05),1 d 即开始增多,至14 d 时达高峰,28d 时回落,但仍高于对照组的表达水平；BMSCs 治疗组大鼠肺组织较模型组病理改变有明显的缓解,各时间点LC-3、Beclin-1蛋白的表达显著下调(P<0.05)。结论：在矽肺大鼠AM 中存在自噬的激活,BMSCs 可有效抑制自噬的激活,进而缓解矽肺的病理进程。
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N-乙酰-L-半胱氨酸对矽肺模型大鼠肺泡巨噬细胞基质金属蛋白酶2、9表达的影响
在SiO2粉尘引起的矽肺纤维化过程中,肺泡巨噬细胞具有重要作用.基质金属蛋白酶(MMP)是降解细胞外基质的主要酶类.肺泡巨噬细胞分泌的MMP-2和MMP-9能够降解肺泡基膜,从而启动肺间质纤维化[1].目前,阻断肺泡巨噬细胞氧化损伤对其分泌MMPs影响的研究尚不多见.本研究以N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)为抗氧化剂,应用免疫细胞化学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,探讨NAC对矽肺纤维化模型大鼠肺泡巨噬细胞MMP-2和MMP-9表达的影响.
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矽肺纤维化体外细胞模型的建立
目的根据SiO2对不同类型细胞的增殖效应,建立矽肺纤维化的体外细胞模型.方法以不同剂量的SiO2刺激SD大鼠肺泡巨噬细胞(PAM)及佛波酯(PMA)诱导分化THP-1(具有PAM特性的人血单核细胞株)细胞的培养上清液,分别作用于中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)和貂肺上皮细胞(CCL-64),采用四唑盐(MTT)比色法测定其增殖效应(以A570nm值表示).结果在0、50、100、200、500μg/ml SiO2浓度范围内,用体积分数为5%的SiO2刺激的PAM和体积分数为10%的SiO2刺激的PMA-primed THP-1细胞上清液分别作用于CHL和CCL-64细胞,均可引起细胞增殖,200、500μg/ml SiO2剂量组与对照组的差异有显著性,并存在剂量-效应关系(CHL:r1=0 914,P＜0.05;r2=0.980,P＜0.01.CCL-64:r1=0.975,P＜0 01;r2=0.956,P＜0.01).以体积分数为10%的SiO2刺激PAM的上清液分别作用于CHL和CCL-64,50μg/ml SiO2组的A570nm值为:CHL:0.66±0.05,CCL-64:0.21±0.04,与对照组(CHL:0.74±0.04;CCL-64:0.26±0.04)的差异有显著性(P＜0.05),均表现为抑制增殖作用.结论利用体积分数为5%的SiO2刺激的PAM上清液和体积分数为10%的SiO2刺激的PMA-primed THP-1细胞上清液作用于CHL和CCL-64建立的体外细胞模型在矽肺纤维化发生和矽肺相关肺癌的研究中有应用前景.
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染矽尘大鼠肺组织自噬现象观察
目的 研究游离SiO2粉尘刺激时,大鼠肺组织效应细胞在不同时间自噬活动的变化.方法 选择60只体重220～230 g Wistar大鼠,采用非气管暴露法建立大鼠矽肺模型,分别在染尘后1、7、14、21、28 d各处死6只染尘组和6只对照组大鼠.取肺组织制作组织切片.采用苏木素-伊红(HE)染色法观察肺部炎症、纤维化等病理变化.用透射电子显微镜(TEM)观察肺组织切片中自噬前体、自噬体、自噬溶酶体的变化.结果 染尘第1d,实验组和对照组中均可见较多自噬前体、自噬体；染尘第7d,实验组肺组织自噬体较对照组增多；染尘第14d,实验组自噬体较对照组减少；染尘第21和第28 d实验组和对照组巨噬细胞胞浆中均观察到自噬溶酶体.实验组自噬溶酶体浊肿、膨胀、部分呈空泡化,第28 d更加明显.结论 游离SiO2粉尘可诱发大鼠肺组织自噬活动,不同染尘时间自噬活动强弱亦不同.
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非暴露式气管注入石英粉尘:大鼠矽肺模型的制备
目的 采用非暴露式气管注入方法制备大鼠矽肺模型.方法 取SPF级SD大鼠48只,24只由大鼠肺部注入50 mg/只的二氧化硅粉尘,24只注入1 ml/只生理盐水,然后连续30 d超声波喷雾生理盐水.处死动物后通过测量脏体系数、全肺胶原含量、干湿重、游离二氧化硅含量、肺灌洗液中细胞计数及分类,观察肺组织病理学变化,全面评估大鼠矽肺模型制备效果.结果 模型组大鼠脾、肺、肾脏器系数、肺湿重、干重、细胞总数、中性粒细胞率、羟脯氨酸含量分别为0.252％、1.294％、0.729％、3.045 g、1.090 g、0.833×109个/ml、75.083％、0.728 mg/g,明显高于阴性对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);淋巴细胞、巨噬细胞率分别为11.916％、13.000％,明显低于阴性对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);肺组织可见散在或灶性纤维细胞结节,部分结节胶元纤维形成并相互融合连成片,形成结节为主的结节性肺纤维化,使肺组织完全实变.结论 通过非暴露式气管注入石英粉尘,成功制备大鼠矽肺模型,为尘肺病的治疗研究提供途径.
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气管暴露注射法制备大鼠矽肺模型
矽肺是一种严重危害人类身体健康的职业病,国内外许多研究者都致力于矽肺纤维化机理的研究[1~4].其研究方法大多利用动物模型来模拟人肺纤维化的进程,以探究其发生机理.动物模型的成功建立是探讨肺纤维化发生发展机理的关键步骤.目前利用大鼠进行矽肺模型建立的方法有很多,如伯莱霉素气管注射法[5,6]、伯莱霉素雾化吸入法[7]、二氧化硅气雾法[8]、非暴露法[9]等.笔者在本次实验中采用气管暴露法,旨在探究此方法在实行时的合理操作.经过对不同二氧化硅浓度,
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晚期糖基化终末产物受体及配体高迁移率族蛋白-1在矽肺肺纤维化中的作用
本实验通过测量小鼠矽肺模型肺灌洗液中高迁移率族蛋白(HMGB)-1、TNF-α和肺组织中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)的表达改变,进而探讨RAGE及HMGB-1在矽肺肺纤维化中的作用,现报告如下.
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白及多糖对矽肺大鼠模型治疗作用的实验研究
目的:观察白及多糖的抗矽肺作用.方法:采用暴露式气管注入法,在大鼠两气管软骨环之间,注入50mg/mL的无菌石英粉混悬液1mL制备大鼠矽肺模型.将实验大鼠随机分成5组,即假手术组、模型组及白及多糖高、中、低3个剂量组.白及多糖高、中、低剂量组大鼠灌胃给予白及多糖400、200、及100mg/kg,连续10w,假手术组、模型组灌胃给予等量生理盐水.结果:白及多糖能显著降低矽肺大鼠的肺湿重,能显著降低肺组织中羟脯氨酸的含量.结论:白及多糖可在一定程度上延缓或抑制矽肺病变的发展,其作用机制与抑制肺组织中羟脯氨酸的生成有关.
