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HLA-I与HSP70在宫颈癌中的表达
目的:通过检测热休克蛋白70(HSP70)和人组织相容性抗原Ⅰ(HLA-I)在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变以及宫颈癌中的表达,探讨两者在宫颈癌发生、发展中的作用.方法:应用免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC) SP法检测20例宫颈鳞癌,20例宫颈上皮内瘤变(CIN),20例正常宫颈组织中HSP70和HLA-I的表达情况.分析HSP70和HLA-I的表达与宫颈癌的临床分期、组织学分级、淋巴结转移以及年龄等临床指标的相关性.结果:①HSP70和HLA-I在正常宫颈组织、CIN及宫颈癌中的表达阳性率分别为65%和100%,80%和90%,85%和30%.各组间两者表达阳性率差异具有统计学意义(P<0.001).②在宫颈癌中,HSP70和HLA-I的表达与分期、分化程度、淋巴结转移、年龄均无关(P>0.05).③从正常宫颈组织到宫颈癌的过程中,HLA-1表达逐渐减弱甚至缺失,HSP70表达的阳性率逐渐增强.结论:①从正常宫颈组织到宫颈癌的过程中,HLA-I表达减弱甚至缺失是宫颈癌免疫逃避的机制之一.②HLA-I表达减弱或缺失及HSP70上调表达可能是宫颈病变的发生、发展过程中的重要事件,在宫颈癌的发生过程中可能起一定作用.
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七方胃痛胶囊抗胃溃疡作用的实验研究
[目的]探讨中药七方胃痛胶囊抗胃溃疡的机制,及对提高溃疡愈合质量的应用价值.[方法]用乙酸诱发制作大鼠胃溃疡模型后第3d随机分为生理盐水对照组、雷尼替丁胶囊阳性对照组、七方胃痛胶囊大、小剂量组,分别以生理盐水(10ml/kg)、雷尼替丁胶囊溶液(3mg/ml,10ml/kg)、七方胃痛胶囊混悬液(2g/ml或1g/ml,10ml/kg)灌胃,1次/日.灌胃给药14d后处死.用硝酸还原酶法检测血清NO含量,测量大鼠胃溃疡面积,计算溃疡指数,观测溃疡边缘粘膜组织炎症细胞数、新生血管数,并测定溃疡边缘粘膜组织热休克蛋白(HSP)70的表达.[结果]七方胃痛胶囊组的溃疡指数明显低于雷尼替丁组和生理盐水组;七方胃痛胶囊组的再生粘膜的新生血管数明显高于雷尼替丁组和生理盐水组,固有层炎症细胞浸润数明显低于雷尼替丁组和生理盐水组;七方胃痛胶囊组血清NO含量,溃疡边缘粘膜组织的HSP70含量均明显高于雷尼替丁组和生理盐水组.[结论]七方胃痛胶囊抗胃溃疡的作用机制可能是通过提高血清NO及溃疡边缘粘膜组织HSP70含量,降低溃疡指数与炎症细胞浸润数,增加再生粘膜的新生血管生成而发挥作用.七方胃痛胶囊对于提高溃疡愈合质量有肯定的价值.
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葛根素对急性缺血脑神经细胞损伤的保护及对HSP70蛋白表达的干预作用
目的探讨葛根素对大鼠急性脑缺血损伤的保护作用和对HSP70表达的影响及其作用机制.方法采用闭夹大脑中动脉造成局部脑缺血模型,对实验标本作HE染色及用免疫组化SP法作HSP70染色,观察其组织病理学改变及HSP70表达情况.结果葛根素干预组死亡神经元数明显少于单纯缺血组,脑水肿程度较轻,而HSP70表达强度显著强于单纯缺血组.葛根素干预暴露因素与神经细胞死亡呈显著负相关(P＜0.01).结论葛根素对大鼠急性脑缺血损伤有保护作用,其作用机制与上调HSP70的表达有关.
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HSP70敲低对AD转基因果蝇的神经保护作用
目的:探讨HSP70敲低(HSP70RNAi)在阿尔茨海默病(AD)发病机制中的作用.方法:利用经典的GAL4/UAS系统,选用ninaE-GAL4启动子,将突变位点在R406W处的Tau蛋白在果蝇复眼内选择性表达,构建ninaE-GAL4/UAS系统AD转基因果蝇模型.然后观察在敲低和不敲低分子伴侣HSP70表达的情况下,HSP70在AD转基因果蝇模型中的作用.结果:HSP70RNAi明显抑制了AD转基因果蝇模型的复眼视网膜光感受神经元变性.结论:HSP70RNAi对AD转基因果蝇模型具有神经保护作用.
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热休克蛋白70在人冠状动脉粥样硬化中的表达及意义
目的:探讨热休克蛋白70 (HSP70)在人冠状动脉粥样硬化中的表达及其意义.方法:采用免疫组化法检测30例人尸检冠状动脉石蜡标本HSP70的表达.结果:正常动脉组织HSP70呈阴性表达,粥样硬化动脉中HSP70呈阳性表达.结论:HSP70可能与冠状动脉粥样硬化的发展有关.
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阿托伐他汀对急性冠脉综合征患者血浆中HSP70、HSF1的影响
目的:探讨阿托伐他汀对急性冠脉综合征(ACS)患者血浆中HSP70、HSF1的影响.方法:选取正常者39例,阿托伐他汀治疗组48例,酶联免疫吸附法(ELISA)测定样本血浆中HSP70、HSF1表达的变化.结果:(1)给药前,阿托伐他汀治疗组血浆中HSP70、HSF1表达明显高于对照组(P＜0.05)；(2)给药后,阿托伐他汀治疗组患者血浆中HSP70、HSF1表达较给药前升高明显(P＜0.01).结论:阿托伐他汀可通过诱导HSP70表达增多发挥抗ACS作用.
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500kV变电站工人HSP70表达水平研究
目的 探讨工频电磁场对500 kV变电站工人外周血HSP70表达水平的影响,寻找可实际应用早期效应标记物.方法 选择广东省内500kV变电站263名巡检人员作为暴露人群及抽取252名各变电站行政管理人员作为对照人群,分别抽取外周血5 ml,用HSP70 ELISA试剂盒进行测定.结果 500 kV变电站工人与对照组的工频电场(t=12.455,P=0.000)、工频磁场(t=18.942,P=0.000)暴露比较差异有统计学意义.经校正后,变电站工人与对照人群外周HSP70蛋白表达水平比较差异无统计学意义(F=0.624,P=0.430).结论 长期接触工频电磁场没有引起变电站工人HSP70表达水平增加.
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温生理盐水腹腔灌洗对大鼠胰腺内HSP70表达的影响
目的 探讨温生理盐水腹腔灌洗对大鼠胰腺内热休克蛋白(HSP70)表达的影响.方法 选取清洁级SD大鼠30只,将其作为临床研究对象,并随机分为两组,每组SD大鼠15只,分别为急性胰腺炎模型组及42℃温生理盐水腹腔灌洗急性胰腺炎组.比较两组大鼠术后2h和6h所检测的HSP70、IL-8、TNF、血淀粉酶水平,观察其病理切片及评分等相关指标.结果 与急性胰腺炎模型组比较,42℃温生理盐水腹腔灌洗急性胰腺炎组术后2h和6h所检测的IL-8、TNF、血淀粉酶及病理评分均明显减少,而HSP70阳性率明显提高,其差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 温生理盐水腹腔灌洗可以诱导大鼠胰腺HSP70的大量表达,从而抑制炎症因子的表达,减轻炎症因子对胰腺的损伤,并使全身炎症反应减弱,起到保护机体的作用,值得在临床推广.
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搜风祛痰中药复方对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块HO-1和HSP70表达的影响
目的 观察搜风祛痰中药复方对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块HO-1和HSP70的影响.方法 将造模成功的ApoE基因敲除小鼠,分别给予阿托伐他汀钙以及低剂量、中剂量、高剂量稳斑汤干预,模型组和空白对照组采用生理盐水灌胃.给药13周后,采用免疫组化和RT-PCR技术检测HO-1和HSP70的表达水平.结果 与空白对照组相比,模型组nO-1和HSP70阳性表达量明显减小(P＜0.01);与模型组相比,西药组及稳斑汤各剂量组均能增加HO-1和HSP70阳性表达量(P＜ 0.05或P＜ 0.01);与西药组相比,中药高剂量组增加HO-1和HSP70阳性表达量无差异(P＞0.05).结论 搜风祛痰中药复方稳斑汤可能通过影响HO-1和HSP70的表达而干预AS斑块形成及破裂.
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稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠主动脉粥样硬化不稳定斑块HSP70表达的影响
目的 观察搜风祛痰法中药复方稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠主动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块HSP70表达的影响.方法 ApoE基因敲除小鼠高质饮食喂养13周后,待其形成成熟的AS斑块,随机分为模型组、稳斑汤低剂量组、稳斑汤中剂量组、稳斑汤高剂量组、西药组、空白对照组.各组相应处理13周后,取主动脉组织HE染色后在光学显微镜下进行病理学观察,然后采用免疫组化和RT-PCR技术检测HSP70的表达水平.结果 治疗组主动脉组织中HSP70表达水平高于对照组(P＜ 0.05或P＜0.01),稳斑汤高剂量组HSP70表达水平与西药组无明显差异(P＞0.05).结论 搜风祛痰中药复方稳斑汤可通过影响HSP70以稳定易损斑块,其机制可能与HSP70对心血管系统的保护作用相关.
关键词： 搜风祛痰法 复方稳斑汤 ApoE基因敲除小鼠 动脉粥样硬化不稳定斑块 HSP70 -
痛风宁对急性痛风性关节炎大鼠HSP70表达的影响
目的 观察痛风宁对急性痛风性关节炎大鼠滑膜组织热休克蛋白(HSP)70表达的影响.方法 将60只Wistar大鼠随机分为5组,每组12只.除空白组外,均采用尿酸钠注射大鼠右踝关节诱发急性痛风性关节炎,药物组分别给予痛风宁高、低剂量,秋水仙碱治疗.给药5d后,采用HE染色法观察大鼠右踝关节炎症改变,免疫组化LSAB法检测HSP70表达情况.结果 与模型组相比,痛风宁治疗组大鼠右踝关节病理切片炎症浸润度、关节肿胀度均明显改善;且大鼠右踝关节滑膜组织HSP70的表达量明显升高.结论 痛风宁治疗急性痛风性关节炎明确有效,诱导体内HSP70的高表达是其治疗急性痛风性关节炎的重要作用途径之一.
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刺血疗法对实验性脑缺血大鼠相关脑区HSP70m RNA的影响
目的 探讨刺血疗法对实验性脑缺血再灌流大鼠相关脑区(大脑皮层和海马区)HSP70 mRNA的影响.方法 复制大鼠脑缺血再灌注模型,并取相应穴位刺血,检测HSP70 mRNA含量.结果 大鼠缺血后刺血组大脑皮层和海马区HSP70 mRNA表达明显增加.结论 刺血可促进脑内HSP70 mRNA表达,通过HSP70调节细胞膜钙离子通道而达到神经保护作用.
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局灶性脑缺血/再灌注及电针对Wistar大鼠脑组织HSP70表达的影响
应用免疫组化S-P法,探讨局灶性脑缺血/再灌注及电针双侧"合谷”穴(LI4)对Wistar大鼠脑组织中热休克蛋白(HSP70)表达的影响及意义.结果局灶性脑缺血3h、再灌注3h及6h组HSP70的表达较假手术组明显增加(P<0.01),缺血3h/再灌注6h+电针"合谷”穴组与缺血3h/再灌注6h组相比HSP70表达进一步增加(P<0.05).提示电针对局灶性脑缺血/再灌注的保护作用可能与HSP70表达增加有关.
关键词： 局灶性脑缺血/再灌注 电针 HSP70 "合谷”穴 -
内源性大麻素2-AG促进HSP70基因的热应激表达
目的 探讨内源性大麻素对热应激反应是否存在调控作用,及其可能的受体调控机制.方法 以不同浓度(10-7、10-6、10-5mol/L)内源性大麻素2-AG(2-Arachidonylglycerol)预处理大鼠胶质瘤C6细胞1 h,热刺激(42℃水浴)1 h,通过RT-PCR及Western blot检测热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)的mRNA及蛋白表达水平;同时观察特异性受体拮抗剂AM251或AM630的拮抗效应,探讨信号通路机制.结果 内源性大麻素2-AG可显著促进热刺激处理的C6细胞HSP70基因及蛋白的表达,该调控效应由CB1介导.结论 一定浓度的内源性大麻素2-AG对热刺激处理的C6细胞内HSP70基因的表达有明显促进效应,表明2-AG对细胞热应激反应可能具有一定的调控能力;同时,在C6细胞内,该调控效应主要由CB1介导.
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RNA干扰Hsp70基因表达抑制胃癌细胞增殖
目的 构建Hsp70的短发夹状RNA(shRNA),检测其在胃癌细胞株SGC-7901中对Hsp70基因表达的抑制作用以及对肿瘤细胞增殖的影响.方法 根据Hsp70编码基因,设计并合成2对反向重复序列,同时设计1对与目的 基因不相匹配的重复序列作为对照组分别定向克隆至载体pTZU6+1的U6转录启动子下,构建重组质粒phspl-siRNA,phsp2-siRNA及对照组质粒phsp3-siRNA,分别转染胃癌细胞株SGC-7901,采用RT-PCR和Western blot检测phsp-siRNA对Hsp70基因表达的抑制作用.利用AlamarBlue法检测转染后对胃癌细胞生长的影响.结果 酶切电泳分析和DNA测序证实重组质粒phsp-siRNA构建成功;证实phsp1-siRNA和phsp2-siRNA对内源性Hsp70基因的表达有明显的抑制作用,同时phsp1-siRNA和phsp2-siRNA转染组细胞的生长较对照组受到明显抑制.结论 构建的重组质粒phsp1-siRNA和phsp2-siRNA能特异而有效抑制内源性Hsp70基凶在SGC-7901细胞中的表达,并对细胞生长有明显抑制作用.
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胃饲乙醇预处理对缺血再灌注大鼠肝脏HSP70表达和缺血再灌注损伤的影响
目的探讨胃饲乙醇预处理对缺血再灌注大鼠肝脏HSP70表达的影响.方法雄性Wistar大鼠随机分组,动物乙醇预处理后制作缺血再灌注模型,于术后0～72 h内不同时相活杀大鼠,留取血及肝脏标本保存待检.结果实验组和对照组较正常组ALT值明显升高,72 h后基本恢复,实验组恢复较快,但实验组和对照组间统计学差异不明显;病理观察见实验组较对照组表现为较轻的病理损害;免疫组化结果:正常肝脏仅见弱阳性,散在分布于胞浆;术后随再灌注时相的延长,HSP70表达逐渐增强,实验组表达明显强于对照组和正常组(P<0.05);Western Blotting 显示HSP70阳性条带于再灌注3 h开始增强,6 h明显增强,持续至72 h达到强,实验组和对照组相差显著.结论胃饲乙醇预处理能够明显增强缺血再灌注大鼠肝脏HSP70的表达,从而提示与较好肝脏保护相关.
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HSP70在肾脏缺血预适应中的作用
目的 探讨缺血预适应对肾脏HSP70表达的影响.方法 大鼠3个循环的2min缺血加5min再灌注缺血预适应模型,免疫组化观察在体肾脏HSP70的表达.结果 缺血预适应后肾脏HSP70的表达显著升高.结论 缺血预适应可升高缺血再灌注损伤后肾脏HSP70的表达,改善肾功能.
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HSP70腺相关病毒的制备、表达及纯化
目的 构建HSP70腺相关病毒载体,用于肾脏缺血预适应(ischemia preconditioning,IP)中HSP70的作用及机制研究.方法 利用已构建的转染真核表达重组质粒HSP70/pAAV-MCS,用磷酸钙转染法转染AAV-293细胞产生病毒颗粒,用氯仿- PEG8000/NaCl-氯仿的方法纯化病毒,用流式细胞仪检测病毒滴度.结果 AAV-293细胞产生表达绿色荧光蛋白病毒颗粒,经纯化,其获得滴度为2.2×106的病毒液,其感染活性能满足下一步体内外转染实验所需. 结论成功制备HSP70腺相关病毒并进行扩增及纯化,为下一步研究HSP70在肾脏缺血预适应中的作用及其机制打下基础.
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束缚-低氧交叉适应的心血管机制及其与HSP70表达的关系
[目的]研究束缚-低氧交叉适应大鼠心功能变化及与心肌HSP70表达水平间的关系.[方法]雄性Wistar大鼠随机分为对照组、低氧应激组、束缚适应组和低氧适应组.通过检测血浆肾上腺素浓度,评价交叉适应模型的建立;测定各组经低氧暴露后的心率、心电图、血清LDH活性,从而评价大鼠心功能的变化.同时测定各组中心肌细胞HSP70表达水平,并分析HSP70与大鼠血清LDH活性的相关性.[结果]交叉适应组大鼠的心率、异常心电图率和血清LDH活性均明显低于低氧应激组,而心肌HSP70表达水平明显高于低氧应激组.HSP70表达水平与大鼠血清LDH活性具有负相关性.[结论]束缚适应可通过提高机体的心功能产生对低氧应激的保护作用,交叉适应的建立与HSP70在细胞中的表达量相关.
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妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中HSP70、HIF-1α的表达及相关性研究
目的 通过测定妊娠期高血压疾病患者和正常妊娠妇女胎盘组织中热休克蛋白70 (Heat Shock Protein 70,HSP70)及胎盘组织中缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-Inducible Factor-1α,HIF-1α)的表达,探讨其在妊娠期高血压疾病发病中的作用,并为临床治疗提供实验性理论依据.方法 收集90例妊娠期高血压疾病患者为妊娠期高血压疾病组(妊娠期高血压组30例,轻度、重度子痫前期组各30例),同期健康孕妇30例为对照组.用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法检测胎盘组织中HSP70、HIF-1α蛋白表达水平并进行定位、半定量及相关性分析;用逆转录聚合酶链法检测胎盘组织中HSP70、HIF-1α mRNA表达水平并进行相关性分析.结果 (1)胎盘组织中HSP70蛋白、mRNA表达水平:妊娠期高血压组、轻度、重度子痫前期组高于对照组(P＜0.05);重度子痫前期组高于妊娠期高血压组、轻度子痫前期组(P＜0.05);轻度子痫前期组较妊娠期高血压组升高,但差异无统计学意义(P＞0.05). (2)胎盘组织中HIF-1α蛋白、mRNA表达水平:轻度、重度子痫前期组均高于对照组、妊娠期高血压组(P＜0.05);重度子痫前期组高于轻度子痫前期组(P＜0.05);妊娠期高血压组较对照组升高,但差异无统计学意义(P＞0.05). (3)胎盘组织中HSP70和HIF-1α蛋白、mRNA表达的相关性:妊娠期高血压疾病组胎盘组织中HSP70蛋白表达水平与HIF-1α蛋白呈正相关(r=0.648,P＜0.05),HSP70 mRNA表达水平与HIF-1 α mRNA呈正相关(r=0.619,P＜0.05).结论 (1) HSP70、HIF-1α在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中表达均升高,且随疾病严重程度加重表达明显升高. (2) HSP70与HIF-1α在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中表达呈正相关,提示HIF-1α表达升高可能上调HSP70表达,两者紧密联系共同在妊娠期高血压疾病发病的病理生理过程中发挥作用.
