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mir-181 a对滋养细胞HTR-8／SVneo功能的影响
目的 MicroRNAs在子痫前期的发生发展过程中发挥了重要作用，本实验通过观察mir-181 a对人滋养细胞 HTR-8/SVneo 凋亡功能的影响，进一步探讨 mir-181 a 在子痫前期发病过程中的功能。方法采用瞬时转染技术对人滋养细胞HTR-8/SVneo分别进行过表达与抑制mir-181 a，应用RT-PCR检测mir-181 a mRNA的表达。应用荧光显微镜检测细胞凋亡的变化。结果 RT-PCR显示过表达组和抑制组分别与阴性对照组和空白对照组相比均有明显差异（P＜0.05），说明转染有效。细胞凋亡结果显示与阴性对照组和空白对照组相比，过表达mir-181 a实验组细胞凋亡能力增加，抑制组细胞凋亡能力降低，差异有统计学意义（ P＜0.05）；阴性对照组和空白对照组比较无统计学意义（ P＞0.05）。结论 mir-181 a能促进人滋养细胞HTR-8/SVneo的凋亡，有望作为子痫前期的治疗靶点。
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异位妊娠术后滋养细胞大网膜种植致大出血一例
1 病例报告患者21岁,未婚,孕1产0.输卵管妊娠术后40d,突发腹痛腹胀3d,并逐渐加重半天后入院.患者40d前因停经58 d、不规则阴道流血5d、腹痛半天入住外院妇产科,妇检阴道通畅,内有暗红色血,后穹窿抽出不凝血;尿绒毛膜促性腺激素(Human chofionic gonadotropin,HCG)阳性,B超提示右侧附件区可探及不均质回声团块,诊断为异位妊娠急诊行剖腹探查术.
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人工流产后正常滋养细胞膀胱种植致大出血一例报告
妊娠滋养细胞经血液种植于膀胱黏膜引起大出血罕见.2006年8月,我们收治人工流产后正常滋养细胞膀胱种植致大出血患者1例,现报告如下.
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胚胎成纤维细胞和Ⅳ型胶原黏附分选表皮干细胞的比较研究
目的 比较以Ⅳ型胶原和胚胎成纤维细胞黏附分选表皮干细胞的效率,探索从皮肤中快速表皮干细胞分选的有效方法.方法 使用DispaseⅡ和CollagenaseⅠ混合酶、胰酶分步消化皮肤得到的细胞悬液,实验组用胚胎成纤维细胞,对照组使用Ⅳ型胶原,分别作为黏附基质,在细胞培养板中对表皮干细胞进行黏附筛选,培养5 d后统计各组表皮干细胞克隆形成数量,评价筛选效率.结果 经抗β-整合素单抗和抗角蛋白K19单抗免疫细胞染色确证形成克隆的细胞是表皮干细胞,在两个细胞密度水平,实验组和对照组培养出的表皮干细胞克隆数量差异无统计学意义(P>0.05).结论 使用成纤维细胞分选表皮干细胞与使用Ⅳ型胶原方法分选效率相当,成纤维细胞条件培养液对黏附效率没有影响,但能促进表皮干细胞生长.
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脂氧素 A4对脂多糖诱导的人滋养细胞炎症细胞因子的影响
目的：研究脂氧素A4对脂多糖（LPS）诱导的人滋养细胞炎症细胞因子的影响及其可能的机制，为临床应用脂氧素A4治疗炎症相关性病理妊娠提供理论依据。方法分离纯化并鉴定人滋养细胞，分为对照组、LPS组、干预组和拮抗组，酶联免疫法检测细胞培养上清中 TNF-α、IL-6、IL-10浓度，免疫印迹法检测细胞总蛋白中IκBα含量。结果与对照组相比，LPS组TNF-α、IL-6、IL-10浓度显著增加，IκBα含量显著减少；与LPS组相比，干预组TNF-α、IL-6显著减少，IL-10、IκBα显著增加；拮抗组 TNF-α、IL-6高于干预组、但低于LPS组，拮抗组IL-10、IκBα低于干预组、但高于LPS组。结论脂氧素A4下调LPS诱导的促炎细胞因子表达、上调抑炎细胞因子表达，促进炎症消退，这种效应可能通过影响NF-κB的活化来实现。
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印迹基因H19在早孕绒毛组织中印迹状态的研究
目的 检测早孕绒毛组织中印迹基因H19印迹的状态,探讨其印迹状态与滋养细胞浸润能力之间的联系.方法 PCR-RFLP方法 检测93例正常早孕绒毛组织中H19的印迹状态.结果 在93例正常早孕绒毛组织中,有42例为杂合子,杂合子基因型中有11例为双等位基因的表达,其中所有双等位基因表达均在孕5～9周,而孕10～12周未发现有双等位基因的表达.结论 在早孕期间,H19基因在绒毛组织中存在双等位基因的表达,主要集中在孕10周前,提示H19基因在滋养细胞中可能存在有动态变化,并与滋养细胞的浸润能力的变化有一定的联系.
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复发性流产孕妇早期妊娠滋养细胞中E-钙黏素的表达与HPV感染的相关性
目的：探讨E-钙黏素在复发性流产孕妇妊娠早期滋养层细胞中的表达与人乳头状瘤病毒（H PV ）感染的相关性，以分析E-钙黏素在复发性流产中的作用。方法选取2012年1月-2013年6月妊娠早期复发性流产孕妇（研究组）与拟行人工流产术的早期妊娠妇女（对照组）各40例，取绒毛标本采用免疫组化法及 PC R法分别检测绒毛滋养细胞中E-钙黏素的表达及 HPV-DNA感染率，数据采用SPSS16．0统计软件进行分析。结果 E-钙黏素阳性率研究组为57．50％，对照组为92．50％，差异有统计学意义（ P＜0．05）；H PV 感染率研究组为35．0％，对照组为12．5％，H PV感染率研究组高于对照组，比较差异有统计学意义（ P＜0．05），研究组中 H PV感染以 HPV16为主占85．71％，对照组HPV16感染占40．00％，差异有统计学意义（P＜0．05）；HPV感染阳性的孕妇E-钙黏素阳性率研究组为35．71％，对照组为100．00％，差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论在妊娠早期滋养细胞中存在 E-钙黏素的阳性表达，E-钙黏素表达下调可能与复发性流产相关，推测 H PV 感染，特别是HPV16感染可能是引起E-钙黏素的异常表达的因素之一。
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宫腔冲洗法收集妊娠早期滋养细胞的可行性研究
目的 探讨宫腔冲洗法收集妊娠早期滋养细胞的安全性和有效性.方法 选择妊娠35～76天拟行人工流产术的妇女行宫腔冲洗,以不孕症妇女输卵管通液回收液作阴性对照,人流后的绒毛组织作阳性对照,对回收的冲洗液涂片进行免疫组织化学染色,并观察两种单克隆抗体抗HLA-G、抗CK-7对冲洗液中滋养细胞的识别情况,同时记录回收液的血污程度,观察受试对象的流产率.结果 92例早孕妇女行宫腔冲洗,有86例收集到冲洗液,回收率93.5%;其中可见中重度血细胞污染者61例,血细胞污染率70.9%;86例宫腔冲洗样本中,有63例发现滋养细胞,阳性率为73.3%;抗HLA-G、CK-7抗体识别孕早期宫腔冲洗液中滋养细胞的敏感度分别为59.5%、88.5%,特异度92.3%、10%;观察1周后再行人工流产的25例受试对象的流产率为0%.结论 妊娠早期宫腔冲洗可获取一定数量的滋养细胞,单用抗HLA-G或CK-7抗体无法高效识别宫腔冲洗液中的滋养细胞,而宫腔冲洗样本质量不影响滋养细胞的检测,该法不失为一种安全、有效的产前诊断取材方法.
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子宫动脉血流监测高危妊娠的研究进展
母胎间的营养物质和代谢产物的交换是维持正常妊娠必须的条件之一，这一过程的完成，需要滋养细胞在妊娠早期成功侵袭子宫螺旋动脉壁，破坏其肌性成分，将管腔狭细和高血管阻力的子宫螺旋动脉转化为管腔宽大、低血管阻力的子宫胎盘循环动脉（uteroplacental artery），同时逐渐深入胎盘向更低压力的胎盘绒毛间隙供血，在绒毛间隙完成母体与胎儿间氧和营养物质的交换。如果子宫螺旋动脉的这种妊娠生理性改变不足，便会导致子宫胎盘循环阻力增高，进一步导致子痫前期、胎儿宫内发育受限等病理妊娠发生。因此监测子宫动脉的血管阻力对早期发现高危妊娠，并为进一步临床管理减少母儿不良预后提供帮助。
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母胎界面病原微生物识别与感染预防
母胎界面是由代表母体组织的子宫蜕膜与代表胎儿组织的滋养细胞共同形成的界面，是一个免疫学环境很特殊的地方。因为带有父方同种异体抗原的胎儿对母体来说是一个半同种移植物，母胎界面既要促进对胎儿的耐受，同时又要保持对外来病原体的宿主防御功能。因此，如果机体不能有效地清除感染物质，或者免疫反应过度，都有可能对妊娠结局产生不良影响。临床研究显示，母体子宫内细菌或病毒感染与妊娠期综合征，如流产、早产、宫内生长受限和子痫前期等有密切关联。因此，在母胎界面，对入侵的病原微生物做出快速正确的免疫应答反应对成功妊娠至关重要。
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黏蛋白1和整合素β3在子痫前期患者胎盘中的表达及相关性
目的 研究子痫前期(preeclampsia,PE)患者胎盘组织中的黏蛋白1(MUC1)、整合素β3(Integrinβ3)的表达情况,探讨二者在子痫前期胎盘中的作用.方法 采用蛋白质印迹法检测子痫前期轻度组(轻度PE组,20例)、重度组(重度PE组,20例)和正常妊娠组(正常组,20例)胎盘组织中MUCl和Integrinβ3蛋白的表达.结果 ①MUC1在正常组,轻度PE组和重度PE组胎盘组织中相对表达量分别为0.53±0.13、0.56±0.12和0.90±0.20,轻、重度PE组均明显高于正常组(P＜0.05);②正常组、轻度和重度PE组胎盘组织中Integrinβ3的相对表达量分别为0.61±0.14、0.57±0.13和0.51±0.12,轻、重度PE组表达均低于正常组(P＜0.05);③MUC1与Integrinβ3在子痫前期患者胎盘中的表达呈负相关(r=-0.79,P＜0.05).结论 MUC1蛋白在子痫前期的表达随病情加重而增加,Integrinβ3蛋白的表达随病情的加重而降低,二者可能共同参与子痫前期发病.
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miR-451a对人滋养细胞迁移、侵袭能力的影响
目的 研究miR-451a对人滋养细胞系(HTR-8/SVneo)细胞迁移、侵袭能力的影响.方法 以人工合成的寡核苷酸miR-451a模拟物(miR-451amimics)、miR-451a抑制物(miR-45 la inhibitor)分别转染人滋养细胞,过表达与特异性抑制miR-451a;应用逆转录-实时荧光定量聚合酶链反应技术(qRT-PCR)检测转染后miR-451a的表达;应用划痕实验和Transwell小室侵袭实验观察转染前后细胞的迁移和侵袭能力的变化.结果 对比空白组及阴性对照组,人滋养细胞转染miR-451amimics后,miR-451a表达明显升高,细胞迁移、侵袭能力下降;而转染miR-451a inhibitor后,miR-451a表达明显下降,细胞迁移、侵袭能力提高.结论 miR-451a可以抑制人滋养细胞的迁移、侵袭能力.
关键词： microRNA-451a 滋养细胞 侵袭 -
5-羟色胺对人胎盘滋养细胞钙通道的影响
目的 探讨5-羟色胺对胎盘滋养细胞钙通道的影响.方法 将体外培养的胎盘滋养细胞分成3组,低深度5-羟色胺组(5-TH,1 μmol/L)、高浓度5-TH组(10μmol/L)和对照组.采用全细胞膜片钳方法,在胎盘滋养细胞外液中分别加入L-型钙通道阻滞剂、T-型钙通道阻滞剂、钠通道阻滞剂及5-TH,检测其电流值.结果 在-60～-50 mV电压时,胎盘滋养细胞L-型钙通道开放,-40～-30 mV时,其大峰值电流为(82.31±6.46)皮安(pA).加入尼莫地平(Nimodpine)可阻断大部分电流.氟桂利嗪(Flunarizne)和替曲朵辛(TTX)不能抑制该电流成分.加入 1μmol/L和10μmol/L 5-TH,其峰值电流分别为(104.77±10.84)pA和(117.16±9.67)pA,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);加入5-TH(1μmol/L)和Nimodpine 、5-TH(10μmol/L)和Nimodpine 后,峰值电流分别为(85.35±6.54)pA和(89.42±7.62)pA,与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 5-TH可激活胎盘滋养细胞L-型钙通道,促使钙电流值增加.
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子痫前期相关miR-18a对人正常滋养细胞浸润功能影响的研究
目的 通过研究子痫前期相关微小RNA-18a (microRNA-18a,miR-18a)对人正常滋养细胞(HTR8)浸润功能的影响,探讨miR-18a与子痫前期疾病的相关性及其在发病过程中的作用机制.方法 将miR-18a前体分子分组转染HTR8细胞,并分为三组:pre-miRNA阴性对照组(NC)、miR-18a过表达组和miR-18a抑制组;反转录PCR检测转染后各组中miR-18amRNA的表达水平;侵袭小室实验(Transwell)检测转染后各组细胞浸润能力的变化情况.结果 与NC组(0.407±0.019)比较,miR-18a过表达组抑制效果显著(0.884±0.061;0.161±0.014),差异具有统计学意义(P＜0.05);与NC组(66.67±3.05)比较,抑制miR-18a的表达可明显降低细胞的浸润能力(29.631±3.112,P＜0.05).结论 miR-18a能够在一定程度上影响人正常滋养细胞的浸润功能,可能与子痫前期的发病相关.
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AP-2α对滋养细胞凋亡、侵袭作用的影响
目的 研究转录因子激活蛋白-2α(Transcription factor activator protein-2 α,AP-2α)对滋养细胞BeWo凋亡、侵袭等生物学功能的影响,探讨在子痫前期(preeclampsia,PE)发生发展中的作用.方法 将已构建的pIRES2-EGFP/AP-2α真核表达载体,采用瞬时转染的方法转入滋养细胞系BeWo细胞中,应用real time-PCR及Western blot方法,检测各组BeWo细胞中AP-2αmRNA及蛋白表达;采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell法检测转染后各组细胞侵袭力.结果 AP-2α转染BeWo细胞后AP-2αmRNA和蛋白表达量较对照组显著增加,其差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示:与对照组比较,AP-2 α转染组细胞凋亡数量明显增多,差异有统计学意义(P＜ 0.05);Transwell检测细胞侵袭能力实验结果显示:与对照组比较,AP-2α转染组细胞侵袭的数量显著减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 证明AP-2α促进滋养细胞凋亡并降低其侵袭力,造成滋养细胞层浅表植入,从而为子痫前期致病机理研究提供了理论依据.
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HO在子痫前期患者胎盘组织和滋养细胞中的表达及青心酮的干预
目的 探讨血红素氧合酶(heme oxygenase,HO)在子痫前期胎盘中的表达和作用机制,以及青心酮(DHAP)治疗子痫前期的理论依据.方法 应用半定量反转录-聚合酶链反应法检测正常孕妇和妊娠期高血压疾病子痫前期患者胎盘组织以及青心酮干预的滋养细胞中HO mRNA表达水平.结果 与正常孕妇组比较,子痫前期组胎盘中HO-1、2 mRNA表达明显降低(P ＜0.05,P＜0.01);青心酮能上调滋养细胞中HO-1 mRNA的表达水平(P ＜0.05),并呈浓度依赖关系.结论 子痫前期患者胎盘组织中HO-1、2表达降低,可能系子痫前期疾病发病的重要机制之一.青心酮能够上调滋养细胞中HO-1基因表达,其作用机制可能为通过改善HO-CO系统防治子痫前期.
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子痫前期滋养细胞sFlt-1和HIF-1α表达及细胞功能在低氧条件下的变化
目的 探讨低氧对子痫前期滋养细胞中可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)和缺氧抑制因子-1α(HIF-1α)的表达及滋养细胞凋亡和侵袭能力的影响.方法取正常妊娠及子痫前期孕妇终止妊娠后的胎盘绒毛组织,分离培养滋养细胞.分为:对照组(正常孕妇):21％O2浓度培养;子痫前期组:分别行21％O2浓度(21％O2组)和1％Q浓度(1％O2组)培养.采用细胞免疫荧光检测滋养细胞密度,实时定量-多聚酶链反应(real tima-PCR)和蛋白印记(Western Blot)法检测滋养细胞中sFlt-1和HIF-1α mRNA及蛋白的表达,TUNNEL法检测滋养细胞调亡,Transwell测定滋养细胞的侵袭能力.结果 子痫前期21％O2组、1％O2组与对照组sFlt-1 mRNA的表达分别为(2.87±1.94)ng/ml、(3.51±1.25)ng/ml和(1.93±0.77) ng/ml,HIF-1αmRNA的表达分别为(2.79±0.64)ng/ml、(1.77±0.23)ng/ml和(3.63±0.38),三组比较,差异均有统计学意义(P均＜0.01).21％O2组、1％O2组与对照组sFlt-1蛋白分别为(4.99±1.77) μg/ml、(7.02±1.23) μg/ml和(3.83±0.63) μg/ml,HIF-1α蛋白分别为(3.83±0.63)μg/ml、(3.06±0.25)μg/ml和(7.73±1.02) μg/ml,三组比较,差异均有统计学意义(P均＜0.01).21％O2组、1％O2组与对照组72 h滋养细胞凋亡分别为(15.81±3.93)个、(20.18±3.47)个和(6.64±1.37)个,侵袭数目分别为(10.05±1.92)个、(18.65±4.17)个和(2.22±0.43)个,三组比较,差异均有统计学意义(P均＜0.01).结论 子痫前期和正常妊娠孕妇滋养细胞均对低氧敏感,低氧对滋养细胞sFlt-1和HIF-1α的表达有影响,且低氧条件下促使滋养细胞凋亡及侵袭能力强化.
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复发性流产患者滋养细胞及蜕膜凋亡因子Fas、FasL表达的研究
目的通过检测凋亡调控因子Fas、FasL在复发性流产(RSA)患者胎盘绒毛滋养细胞以及蜕膜中的表达情况,以探讨RSA的免疫发病机制.方法采用免疫组化SP方法以及流式细胞仪技术测定20例RSA患者、16例正常妊娠妇女胎盘绒毛FasL表达以及蜕膜中CD3(+)T淋巴细胞Fas抗原表达情况.结果① RSA组患者胎盘绒毛滋养细胞FasL的表达以及蜕膜中CD3(+)T淋巴细胞Fas抗原的表达情况均低于正常妊娠组,差异有显著性(P<0.05);②胎盘绒毛FasL的表达与蜕膜中CD3(+)T淋巴细胞Fas抗原表达无相关性(P>0.05).结论 RSA的发生可能与绒毛滋养细胞表面FasL表达减少,以及蜕膜中Fas(+)T淋巴细胞凋亡减少有关.
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胎盘Snail表达与前置胎盘和胎盘植入发病关系的研究
目的 研究胎盘Snail的表达与胎盘滋养细胞侵袭性及前置胎盘和胎盘植入发病的关系.方法 选取60例孕产妇,分为胎盘植入组10例、前置胎盘组20例及对照组30例.采用免疫组织化学、Western Blot和RT-PCR检测各组胎盘母体面Snail的表达情况.结果 胎盘植入组和前置胎盘组Snail蛋白的表达水平高于对照组,胎盘植入组Snail mRNA相对水平高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 胎盘植入和前置胎盘患者胎盘母体面Snail表达升高可能与胎盘滋养细胞侵袭性增强及胎盘植入发病相关.
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人激活转录因子3在子痫前期胎盘的表达及意义
目的 探讨胎盘人激活转录因子3 (ATE3)的表达与子痫前期的关系.方法 分别应用实时荧光定量-PCR (qRT-PCR).免疫组化和Western Blot检测35例正常妊娠和38例子痫前期胎盘上ATF3 mRNA和蛋白的表达水平.结果 正常妊娠组和子痫前期组胎盘ATF3 mRNA表达水平分别为1.02±0.21和1.78±0.28,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.001);ATF3蛋白在子痫前期胎盘表达升高(P＜0.001);并且重度子痫前期胎盘ATF3的表达水平(189.0±62.8)明显高于轻度子痫前期(108.0±25.1,P＜0.05).结论 子痫前期胎盘组织中异常表达的ATF3可能参与了子痫前期的发病.
