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胃内Cajal间质细胞的功能
西班牙神经解剖学家Cajal于1893年首次采用甲基蓝及嗜银染色法在胃肠道观察到一种特殊类型的间质细胞,主要分布在消化道自主神经末梢与平滑肌细胞之间,后称其为Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)[1-2].ICC的功能状态对胃肠动力的正常运行至关重要.另外,不成熟的ICC过度增殖可形成胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GISTs),同样受到广泛关注[3].本文对胃内ICC的研究进展作一综述.
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甲基蓝对阿片类物质产生耐受和依赖的阻断作用
目的:探讨鸟苷酸环化酶(sGC)抑制剂甲基蓝(MB)对阿片耐受和依赖的阻断作用.方法:体外培养iNOS稳定表达的神经细胞做为模型,竞争性蛋白结合法、放免法和3H-Arg转化3H-Cit法检测胞内cAMP,cGMP水平和NOS活性, 激光共聚焦扫描技术测定胞内Ca2+浓度.观察MB对δ-阿片激动剂DPDPE和吗啡预处理细胞48 h及纳洛酮戒断,对胞内cGMP,cAMP含量、[Ca2+]i 和NOS活性的影响.结果:MB可明显抑制阿片激动剂长时程所致cGMP含量增加(P<0.01),对cAMP含量、[Ca2+]i和NOS活性的变化无影响.结论:MB通过抑制sGC活性,使NO-cGMP通路下调,减缓阿片耐受和依赖的发生.
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体外培养小鼠睾丸间质细胞的形态学特征
本研究初步观察了睾丸间质细胞体外培养的形态学特征,以期为深入研究其分泌睾酮的影响因素奠定基础.方法为无菌取成年雄性昆明小白鼠的双侧睾丸,置于盛有适量PBS的培养皿中;用尖镊撕去附睾及白膜,用吸管吹打至曲细精管与间质组织分散;加入10倍体积的胶原酶,37℃下消化10～15 min后移入10 mL离心管,待曲细精管及间质组织沉降后移出上层细胞悬液;取一滴细胞悬液,加入适量台盼蓝混匀后用红细胞记数板计算细胞数目,调整细胞密度至3×105个/mL;将细胞接种在直径35 mm的塑料培养皿中,常规条件下培养;当细胞开始贴壁时,小心吸去旧液,加入新鲜培养液(D-MEM+10%小牛血清+1%双抗+1%谷氨酰胺)培养,定时观察;当培养细胞80%汇合时,弃去培养液,用PBS缓冲4%多聚甲醛室温固定1 h,PBS洗2次;用异丙醇油红法略加改进后进行脂质染色,苏木精复染;另用95%乙醇和PBS缓冲4%多聚甲醛(9∶1)室温下固定细胞40 min,PBS洗2次,1.4%甲基蓝染色后进行观察.本实验每次所获细胞悬液量均为3 mL,细胞密度为1.76×106个/mL,平均每侧睾丸可获间质细胞5.28×106个,其中活细胞、死细胞的平均百分比分别为88.94%、12.06%.在体外,间质细胞贴壁性状良好,不需特殊粘附分子.接种后一般8～10 h后即发生极化,胞质铺展,伸出突起.培养约14～15 h后即开始贴壁.镜见贴壁细胞透明,基本无颗粒,轮廊不清,增殖的细胞相互连接成单层膜状.细胞化学:甲基蓝染色显示,间质细胞核呈圆形或卵圆形,嗜碱性,位于胞质中央;核仁1～2个,清晰可见,一般位于核的边缘部;其胞质轮廊为多角形,一般有3～4个突起,遥抟中可见有多量大小不一的空泡状结构.油红O脂质染色显示,这些空泡状结构为脂质小滴,呈红色或红褐色,大小不一,圆形悬浮状存在,聚集于胞质两极或散布于核的四周.本实验结果表明,间质细胞胞质中存在大量脂滴,推测这些脂质是为其雄激素分泌功能提供必备前体物质而存在的.
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大鼠延髓尾端加压区微量注射L-精氨酸对血压、心率和肾灌流压的影响
目的：研究NO前体L-Arg微量注入大鼠延髓尾端加压区（CPA）对心血管活动的影响并探讨其可能的机制。方法：采用延髓腹外侧部微量注射法，以整体灌流肾为模型观察与NO代谢有关的试剂对心血管活动的影响。结果：①CPA内微量注入L-Arg（60～100 nmol），动脉血压与心率呈剂量依赖性下降，肾灌流压下降，与生理盐水对照，差异有显著意义；②预先在CPA内注入鸟苷酸环化酶抑制剂甲基蓝可取消L-Arg的降压降肾灌流压作用；③CPA内注入L-Glu，AP上升。如预先注入L-Arg后5 min再注入L-Glu，L-Glu的升压效应被衰减，其衰减程度与L-Arg是剂量依赖性关系。结论：CPA内的L-Arg-NO通路参与延髓心血管中枢对AP的调控，其机制之一可能是通过cGMP抑制CPA内谷氨酸能神经突触。
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大鼠延髓腹面降压区微量注射L-精氨酸对心血管活动的影响
目的:观察NO前体L-精氨酸(L-Arg)微量注入大鼠延髓腹面降压区(VSMd)对心血管活动的影响及其和L-谷氨酸(L-Glu)降压作用的关系.方法:采用延髓腹外侧部微量注射法,以整体灌流肾为模型观察与NO有关的药物对心血管活动的影响.结果:①VSMd内微量注入L-Arg,动脉血压(AP)呈剂量依赖性升高,肾灌流压(PPK)与AP同步上升,与注入生理盐水对照,差异均具有显著意义,但L-Arg对心率无显著影响;②预先在VSMd内注入甲基蓝可取消L-Arg的升压、升PPK作用;③VSMd内注入L-Glu,AP下降.如预先注入L-Arg后5 min再注入L-Glu,L-Glu的降压效应被衰减,其衰减程度依赖于L-Arg剂量.结论:VSMd内的L-Arg-NO通路参与延髓心血管中枢对AP的调控,其机制之一可能是通过cGMP抑制VSMd内的谷氨酸能神经突触.
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染色法鉴别旋毛形线虫成虫死活的实验观察
目的:探讨快速鉴别旋毛形线虫成虫死活的染色方法.方法:分别以0.5%番红、1.0%中性红和0.5%甲基蓝3种染液,对死或活旋毛形线虫成虫进行染色.结果:0.5%番红、1.0%中性红染液能使死亡旋毛形线虫成虫着色;旋毛形线虫活成虫对3种染液均不着色.结论:0.5%番红、1.0%中性红染液染色均可快速鉴别旋毛形线虫成虫死活.
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L-Arg-NO通路对大鼠延髓腹面加压区心血管活动的影响及与L-Glu通路的关系
目的研究一氧化氮(NO)前体L-精氨酸(L-Arg)单侧微量注入大鼠延髓腹面加压区(VSMp)对动脉血压(AP)、心率(HR)、肾灌流压(PPk)的影响及与L-谷氨酸(L-Glu)升压作用的关系.方法采用延髓腹外侧部微量注射法,以整体灌流肾为模型观察与NO有关药物对心血管活动的影响.结果(1)VSMp内微量注入L-Arg(40～100 nmol),AP和HR呈剂量依赖性下降,与生理盐水注入后的变化相比较,差异均有显著性.如预先注入NO合酶抑制剂L-硝基-精氨酸甲酯(L-NAME)或鸟苷酸环化酶抑制剂甲基蓝,L-Arg的降压效应被衰减.(2)VSMp内微量注入L-Arg(100 nmol),PPk与AP同步下降,与基础值比较,差异有显著性.(3)VSMp内微量注入L-Glu(350 nmol),AP上升.如预先注入L-Arg(40～100 nmol)后5 min再注入L-Glu,L-Glu的升压效应被衰减,衰减程度与L-Arg呈剂量依赖性关系.结论VSMp内的L-Arg-NO通路参与动脉血压的调控,其机制之一可能是通过抑制VSMp内的谷氨酸能神经突触.
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双波长催化光度法测定水和人发中痕量铁
目的:建立用双波长催化动力学光度法测定痕量铁的新方法.方法:在硫酸介质中,利用铁催化过氧化氢氧化甲基蓝和茜素红褪色反应,分别在390 nm和610 nm处测量催化体系和非催化体系的吸光度的变化,用双波长催化光度法测定痕量铁离子.结果:测定铁离子的线性范围:0.050～1.20 μg/25 ml,检测限:3.2×10-11 g/ml.结论:该法简单,灵敏度高,选择性好,可用于水和人发中痕量铁的测定.
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甲基蓝共振瑞利散射法测定穿琥宁
目的 通过实验,以期建立一种测定穿琥宁的新方法.方法 在pH4.4的酸性溶液中,取适量对照品溶液和甲基蓝溶液混合,以二次蒸馏水稀释,放置一段时间后在荧光光度计上以λem=λex方式进行同步扫描.结果 甲基蓝和穿琥宁能够迅速反应生成离子缔合物,导致共振瑞利散射(RRS)光谱的改变,产生比较特征的新的RRS光谱,大峰值在650.0nm,并且在2.0-14.0×10-5mol/L范围内,RRS强度和穿琥宁的浓度成正比.结论 我们建立了测定穿琥宁的共振瑞利散射法.该法灵敏度较高,检测限达到2.65×10-5mg/L,用于检测某些穿琥宁样品中穿琥宁的含量,结果较满意.
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用甲基蓝分光光度法测定亚硝酸根
目的:研究亚硝酸根与甲基蓝的褪色反应,建立一个简单、灵敏、选择性高的亚硝酸根的测定方法.方法:采用紫外分光光度法测定不同条件下的吸光度.结果:实验表明,当甲基蓝与NO2-反应后发生颜色变化,在590nm波长处发生褪色反应,此长波处,吸光度的变化与溶液中NO2-的浓度成正比,其线性范围在0～5mg/L,摩尔吸光系数为ε=1.4×104L·mol-1·cm-1,相关系数为0.9955.结论:甲基蓝分光光度法具有良好的稳定性和选择性,用于环境水样中微量NO2-的测定,结果满意;建立了测定亚硝酸根的新方法.
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复方局部缓释药物治疗牙周炎的实验研究
目的:探讨复方局部药物缓释剂对牙周病治疗效果及其临床耐药性研究.方法:建立实验大鼠人工感染牙周炎模型后,将大鼠分A组(实验组),局部使用复方局部药物缓释药物；B组(对照组).选择甲基蓝和米诺环素两种抗菌药物,通过检测细菌总数和观察组织学变化,探讨其抑制牙周袋内相关致病菌增殖的方法,了解其治疗牙周病的效果.结果:实验组检测结果发现总细菌数持续下降,与对照组相比牙周袋内相关致病菌总数明显减少,在统计学上有显著差异(P＜0.01)；组织学观察结果显示,该复方制剂可产生明显杀菌作用及有效消除炎症现象.结论:应用甲基蓝和米诺环素局部缓释药物能有效抑制牙周炎的发生及发展过程.
