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肝细胞癌循环肿瘤细胞的检测进展
肝细胞癌（HCC）是我国发病率及死亡率都很高的恶性肿瘤之一，其术后复发转移是影响患者预后的重要因素。循环肿瘤细胞（CTCs）作为一种可以代表原发肿瘤的“液态活检标本”，有助于实时、无创性地监测疾病进程。CTCs的检测有助于HCC的早期诊断、复发与转移的监测、预后的预测以及疗效的评估，而且可能成为临床分子检测、分析转移机制及优化治疗方法的一种重要手段。本文就近年来CTCs的检测及临床研究进行综述。
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循环肿瘤细胞的检测在结直肠癌中的应用
结直肠癌是常见的癌症之一，尽管手术、化疗、放疗的联合应用使转移患者的生存率有所提高，但结果仍不令人满意。检测循环肿瘤细胞是当前研究的热点之一，被越来越多的应用于各种实体瘤。科技的日新月异使循环肿瘤细胞的检测变得更加可行，精确计数以及分子生物学分析对于肿瘤患者的预后判断、疗效评价以及个体化治疗均有重要的指导意义。本文将探讨循环肿瘤细胞的检测技术及在结直肠癌方面的临床研究进展。
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非小细胞肺癌循环肿瘤细胞检测技术与临床应用的研究进展
转移和复发被认为是影响恶性肿瘤预后的主要因素，对于转移与复发形成的相关基础理论中，“种子和土壤”假说认为，原发肿瘤在生长过程中，有微小肿瘤细胞个体或集团通过循环系统的运送到达远处器官，如同种子播散在土壤中，形成与原发灶特性极其类似的转移灶，这一理论非常形象地说明了恶性肿瘤的转移途径，并点明“种子”肿瘤细胞即循环肿瘤细胞（CTCs）是转移和复发的关键，并有相关可靠的临床研究依据。近年来CTCs又引起肿瘤研究者的热情，将CTCs作为潜在肿瘤生物学标志物及研究肿瘤转移过程成为研究的热点。在本综述中，我们将对CTC生物学和转移相关基因检测、现今常用的检测技术，及其在临床研究尤其在肺癌领域中的应用进行阐述。
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膀胱癌不同TNM分期患者外周血循环肿瘤细胞的表达探索
目的：研究不同TNM分期膀胱癌患者外周血循环肿瘤细胞（CTCs）的表达情况，探讨免疫芯片分选法的可行性，评估检测结果的临床意义。方法2014年6月至2015年2月收治的T1～T4不同分期膀胱癌患者15例，其中男12例，女3例。年龄48～78岁，平均62岁。依据2009年UICC的TNM分期标准：T1期5例，T2期5例，T3期3例，T4期2例，淋巴结转移2例。所有患者均无远处转移，均行膀胱癌根治手术。且于治疗前采取外周血7.5 ml，0～4℃ ADC管内保存，24 h内送检。用免疫芯片分选法对患者外周血进行CTC定量检测，选用抗细胞角蛋白CK8/18/19荧光抗体作为筛选标记物。结果4例膀胱癌患者外周血CTC定量检测为阳性（T1～T4期各1例），共发现6个CK8/18/19阳性的细胞，并在1例分期为T1N0M0的患者外周血中检测到3个CTCs。结论本研究并未发现肿瘤分期与CTC检出率有关。抗CK8/18/19抗体可以作为免疫芯片分选法检测膀胱癌CTC的标记物。
关键词： 膀胱肿瘤 肿瘤循环细胞 CK8/18/19抗体 -
CellSearch检测循环肿瘤细胞对转移性乳腺癌预后的Meta分析
目的：系统性评价CellSearch检测循环肿瘤细胞在转移性乳腺癌患者预后中的作用。方法检索 PubMed、EMbase、Cochrane图书馆、中国期刊全文数据库（CNKI）及中国生物医学文献数据库（CBM）等，收集CellSearch检测循环肿瘤细胞（CTCs）对转移性乳腺癌患者预后的研究。以无进展生存期（PFS）和总生期（OS）为观察终点，Review Manager 5.1进行Meta分析。结果19篇英文文献包含3710例转移性乳腺癌患者纳入荟萃分析，分析结果显示CTCs阳性组与肿瘤转移灶数目增加呈强相关（OR＝1.53，95%CI：1.26～1.85）。与肿瘤原发灶HER2+（OR＝1.15，95%CI：0.62～2.13），肿瘤分级（OR＝1.68，95%CI：0.55～5.14），肿瘤治疗（OR＝0.89，95%CI：0.72～1.11）无相关性。CTC阳性组较阴性组在PFS（HR＝1.67，95% CI：1.44～1.92）、OS（HR＝2.80，95%CI：2.32～3.37）上均有统计学意义（P＜0.05），根据不同的标本采集时间进行亚组分析，CTC阳性组均比CTC阴性患者预后差。结论 CellSearch System检测CTCs用来预测转移性乳腺癌患者预后，其中，CTC阳性组是肿瘤的转移的风险因素，基线及治疗前CTC阳性组均预示转移性乳腺癌患者预后不良，敏感性分析和漏斗图分析结果提示该研究结果可信度高。
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利用新型免疫磁珠富集原理检测肺癌患者外周血循环肿瘤细胞
目的 建立一种新型免疫磁珠方法,检测肺癌患者外周血中循环肿瘤细胞(CTCs).方法 实验探索性研究.选择经手术切除组织病理确诊为非小细胞肺癌的42例初治患者,其中Ⅰ期7例、Ⅱ期9例、Ⅲ期16例、Ⅳ期10例,健康志愿者20名.将不同数量(50、100、200、500、1000个)的肺癌细胞株(A549)混入2 ml健康成人血标本中以模拟肿瘤患者的血样,对该血样进行红细胞裂解和离心,沉淀所得细胞与经过免疫磁珠标记的上皮细胞黏附分子(EpCAM)的抗体反应,然后经一套自制的检测装置对细胞进行富集和分离,与磁标记的EpCAM抗体反应后的上皮细胞因为磁力的作用被集中在一张玻片上,后用经典的HE染色鉴定循环肿瘤细胞并计数.计算肿瘤细胞的回收率验证该方法的敏感性,同时检测20名健康志愿者血标本验证该方法的特异性.用上述方法检测42例肺癌患者的CTCs,将检测到的结果根据患者的临床特征进行分组,以卡方检验分析CTCs的检出率与患者的年龄、性别、临床分期、肿瘤大小等临床特征的相关性,同时以直线相关法研究掺入细胞数与回收细胞数的相关性.结果 掺入肿瘤细胞回收试验的回收率在68％～82％之间,掺人细胞间回归方程为y =0.6419X+8.8875,回收的细胞与添加细胞间数量有显著的相关性(相关系数R2=0.9916,P ＜0.05).42例肺癌患者中有18例(42.9％) CTCs阳性,其中,Ⅰ期CTCs检出率为0,Ⅱ期CTCS检出率为11.1％,Ⅲ期CTCs检出率为62.5％,Ⅳ期CTCs检出率为70％.CTCs检测的阳性率与患者的年龄、性别、肿瘤大小均无明显关系(P＞0.05),而与临床分期(TNM)有密切关系(P＜0.05).特异性检测结果为20名健康志愿者外周血标本均未检测到CTCs.结论 新型免疫磁珠富集技术可以有效分离和鉴定肺癌患者外周血中的循环肿瘤细胞,有较高的敏感性和特异性；随着肺癌患者分期增高和肿瘤增大,肺癌细胞发生远处转移逐渐增多,CTCs检出的水平亦增高,对于早期发现肺癌隐形微转移和重新确定肺癌分期具有重要意义,但其临床价值仍需进一步多中心、大样本病例的临床研究加以证实.
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小细胞性肺癌患者外周血循环肿瘤细胞的表达及临床意义
目的：研究小细胞肺癌（ SCLC ）患者不同分期外周血循环肿瘤细胞（ CTC ）的表达情况，探讨其在肺癌转移早期诊断中的意义。方法病例对照研究。选取2011年4月至2013年4月在上海长海医院住院治疗的SCLC患者35例（局限期12例，广泛期23例）和非结核肺良性疾病患者25例。采集静脉血7.5 ml放入CellSave管中，样品经过处理后经CellTracks AutoPrep 系统荧光扫描后，系统根据荧光结果判读，对CTC进行计数。分析比较SCLC和良性肺疾病患者外周血CTC表达的差异，分析比较临床广泛期和局限期SCLC患者CTC表达的差异。同时，采集2 ml静脉血，离心后取上清液进行NSE （神经元特异性烯醇化酶）检测。研究CTC 与NSE的相关性。相关分析采用Sperman′s rank法。结果 SCLC患者外周血CTC表达显著高于良性疾病对照组[ CTC≥1阳性率分别为80.0％和12.0％（χ2＝27.003，P＜0.0001），CTC≥5的阳性率分别为51.4％和0（χ2＝18.367， P＜0.0001），CTC≥10阳性率分别为34.3％和0（χ2＝10.714，P＜0.001），CTC≥50阳性率分别为17.1％和0（P＝0.036，P＜0.05）]。广泛期SCLC的CTC阳性率显著高于局限期[CTC≥1阳性率分别为58.3％和91.3％（P＝0.033，P＜0.05）， CTC≥5的阳性率分别为65.2％和25.0％（P＝0.035， P＜0.05）]。 SCLC患者外周血CTC数量与血清NSE水平呈明显正相关（r＝0.7437，P＜0.0001）。结论 SCLC患者CTC的表达显著高于良性对照组，且与临床分期密切相关，CTC的表达对于早期预测SCLC的转移和恶化具有一定的指导意义。
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原发性肾脏小细胞癌合并下腔静脉和肺动脉癌栓一例报告并文献复习
目的 探讨原发性肾脏小细胞癌的临床进程及免疫组织化学特点.方法 总结1例原发性肾脏小细胞痛合并下腔静脉、肺动脉癌栓形成患者的临床治疗资料,复习文献报道20例肾脏小细胞癌的临床特点及治疗方法.结果 患者在深低温体外循环下顺利进行左肾癌根治、肺动脉切开取癌栓、下腔静脉切开取癌栓及下腔静脉重建术.肿瘤免疫组织化学染色内分泌标记CgA、Syn(+),上皮标记CK、EMA(+).患者随访7个月仍存活.结论 肾脏小细胞癌源于神经内分泌系统,恶性程度高、进展迅速,预后很差.手术切除是首选治疗方案.
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肾和肾上腺恶性肿瘤合并下腔静脉瘤栓的外科治疗
目的 提高肾和肾上腺恶性肿瘤伴下腔静脉瘤栓的治疗效果.方法 1985年1月至2008年4月收治肾和肾上腺恶性肿瘤合并下腔静脉瘤栓患者29例,均经彩色多普勒超声、CT及MRI检查确诊.瘤栓分型:I型7例、Ⅱ型10例、Ⅲ型8例、Ⅳ型4例.其中肾上腺肿瘤4例,肾肿瘤25例.TNM分期:T2NoMo 23例,T2N1Mo 1例,T2N1M1 1例,T3N.Mo 1例,T3N1M1 2例,T3N2Mo 1例.肿瘤平均直径8.7(4.O～16.0)cm.瘤栓平均长度:I型3.2(2.5～4.O)cm,Ⅱ型5.3(4.5～6.O)cm,Ⅲ型8.2(6.5～9.0)cm,IV型15.1(12.O～18.5)cm.29例均在全麻下行肾或肾上腺肿瘤根治性切除加下腔静脉瘤栓切除术.结果 29例手术均获成功.术后病理报告:肾透明细胞癌18例、肾肉瘤样癌3例、肾乳头腺癌2例、肾细胞癌(未分化型)1例、肾颗粒细胞癌1例、肾上腺皮质癌3例、肾上腺转移性恶性黑色索瘤1例.失访3例,余26例平均随访35(0～62)个月,患者3年生存率58%(15/26),5年生存率42%(11/26).T2、T3患者3年生存率分别为64%(14/22)、25%(1/4),5年生存率分别为45%(10/22)、25%(1/4).I、II、Ⅲ和Ⅳ型瘤栓患者3年生存率分别为4/6、5/8、5/8和1/4,5年生存率分别为3/6、4/8、3/8和1/4.膈肌以下瘤栓患者3、5年生存率分别为64%(14/22)、45%(10/22),膈肌以上瘤栓患者分别为1/4、1/4.肾和肾上腺恶性肿瘤伴下腔静脉瘤栓无转移患者的3、5年生存率为12/18、9/18,有转移患者分别为3/8、2/8.3例术前出现转移患者生存时间分别为6、10、22个月.结论 根治性肿瘤切除和下腔静脉取栓治疗无淋巴和远处转移的肾和肾上腺恶性肿瘤合并下腔静脉瘤栓效果良好;即使存在远处转移,外科手术仍可以提高患者生活质量,延长患者生存期.
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肾癌伴膈下型癌栓的手术治疗
目的 探讨根治性肾切除术加下腔静脉切开取栓术的安全性及有效性,评价术前放置下腔静脉临时滤网及术中充分游离肝脏显露下腔静脉,以避免癌栓脱落栓塞的有效性. 方法 回顾性分析2004年1月至2010年12月42例肾癌伴膈下型癌栓患者施行根治性肾切除术加下腔静脉切开取癌栓术的临床资料.患者术前均常规置入腔静脉临时滤网,术中12例癌栓位于肝后的患者均采用充分游离肝脏的手法,游离并向左翻开肝脏,显露下腔静脉,依次阻断血流,完成下腔静脉切开取栓.术后当天取出滤网.常规随访. 结果 42例均完成手术.手术时间130 ～ 320 min,平均220 min;出血量200 ～2500 ml,平均750 ml;12例输血,输血量400 ～2000 ml,平均800 ml.围手术期未发生有症状的癌栓脱落栓塞.1例术后因严重肺部感染死亡.41例获随访,随访时间6 ～ 60个月,平均36个月.37例术前未出现转移的患者中,15例出现转移,22例无瘤生存. 结论 根治性肾切除术加下腔静脉切开取癌栓术治疗肾癌伴有膈下型下腔静脉癌栓患者较为安全、有效.术前放置下腔静脉临时滤网及术中充分游离肝脏显露下腔静脉,能较有效地避免癌栓脱落,提高手术安全性.
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肝癌伴下腔静脉癌栓的分型及外科治疗
目的 探讨肝细胞癌伴下腔静脉癌栓(hepatocellular carcinoma with inferior vena cava tumor thrombus,HCIVCTT)的分型方法,并根据分型选择合理的外科治疗方式. 方法 回顾性分析我院8例接受手术治疗的HCIVCTT患者.其中男7例,女1例,平均年龄44岁.结合术前影像和术中食道超声判定癌栓位置,将HCIVCTT分为3型:Ⅰ型(膈下型)2例:癌栓位于膈肌水平之下,肾静脉之上.行肝切除、膈下全肝血流阻断、下腔静脉(IVC)切开取栓;Ⅱ型(膈上型)5例:癌栓位于膈肌与有心房入口之间.行肝切除、膈上全肝血流阻断、经腹切开膈肌显露膈上IVC并阻断、切开IVC取栓;Ⅲ型(心内型)1例:癌栓已进入有心房.经胸腹联合切口,肝切除、静脉转流、有心房及IVC切开取栓.结果 全组病例手术均获得成功,无1例术中死亡.术中全肝血流阻断时间为6 ～ 10 min,术后中位生存时间8.4个月.结论 结合术前影像和术中食道超声检查,根据癌栓位置所提出的分型方式,对于外科治疗HCIVCTT具有一定的指导价值.
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磁激活细胞分选技术用于结直肠癌外周血癌细胞富集的研究
目的 用磁激活细胞分选技术富集并定量分析结直肠癌患者外周血循环中的癌细胞. 方法 术前抽取21例结直肠癌患者和9例对照者的外周血样,标记带磁珠的细胞角蛋白(Cytokeratin,CK)抗体,经磁柱富集CK+上皮细胞,用流式细胞仪检测其含量. 结果 在未经富集的标本中均未发现 CK+CD45-细胞;在经富集的标本中其含量在对照组与患者组间(P<0.01)以及Dukes A-B期与Dukes C-D期患者间(P<0.01)均差异有显著意义. 结论 本方法 能有效地富集上皮来源细胞; CK+CD45-细胞能反映外周组织中肿瘤细胞情况;其与恶性肿瘤的存在、临床分期密切相关.
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肝移植术中门静脉血栓和瘤栓的处理
目的探讨肝移植时门静脉血栓和瘤栓的处理方法和临床效果.方法2000年8月至2004年底我院施行的150例肝移植患者中5例为肝硬化伴门静脉血栓形成,21例为肝癌伴门静脉瘤栓及/或血栓形成,共26例.这些病例在术中清除了门静脉内的栓子,3例又行门静脉壁部分切除及低位门静脉对端吻合术,1例行门腔静脉半转位吻合术.结果26例中1例术后门静脉又再发血栓形成.21例肝癌合并门静脉瘤栓者,术后近期死亡3例,分别死于:门静脉继发性血栓形成,移植肝原发性无功能和多器官衰竭.18例得到长期随访,术后1、2、3年生存率分别为:66.7%,38.9%,27.8%.结论肝移植时受体门静脉合并血栓/瘤栓者在清除栓子后再行肝移植仍然可取得较好的疗效.
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门静脉灌注化学治疗药物治疗肝癌伴门静脉癌栓的临床价值
目的探讨肝细胞肝癌伴门静脉癌栓(portal vein tumor thrombi,PVTT)外科手术后,门静脉灌注化学药物治疗的价值.方法本组45例伴门静脉主干或Ⅰ级分支癌栓的肝癌患者,在行手术切除后随机分为两组,一组行肝动脉化疗,同时行门静脉置泵灌注化疗(治疗组),另一组行肝动脉化疗(对照组).结果治疗组6个月、12个月、18个月的生存率分别为86%(18例)、76%(16例)、48%(10例);对照组为75%(18例)、58%(14例)、33%(8例).两组比较差异均有显著意义(P<0.05).结论肝癌伴PVTT手术切除术后,为防治门静脉癌栓导致肝内转移、复发,术中除应尽量取净癌栓组织外,门静脉灌注化疗是有效的措施之一.
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肝癌合并下腔静脉癌栓11例的外科治疗体会
目的探讨并总结肝细胞癌(肝癌)合并下腔静脉(inferior vena cava, IVC)癌栓手术治疗的方法和经验. 方法对11例肝癌合并IVC癌栓患者进行了手术治疗,手术先在入肝血流阻断下作肝癌原发灶切除,然后再阻断IVC血流行切开取栓. 结果本组11例原发灶和IVC癌栓均成功切除,全组无手术死亡,术中、术后均未发生与IVC取栓相关的并发症.平均手术时间为179(120～255)min,平均手术失血量为1 482(600～3 000)ml,平均肝门阻断和全肝血流阻断时间分别为27.9(12～83)min和16.5(7～28)min.术后发生胸水1例、胆漏1例,均治愈;随访3例已死亡,8例存活1～14个月. 结论肝癌合并IVC癌栓的手术可安全施行,手术应先作原发灶切除再作IVC切开取栓.
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T7RNA聚合酶催化的荧光扩增技术检测结直肠癌循环肿瘤细胞hTERT
目的 T7 RNA聚合酶催化的荧光扩增技术(Cellular FACTT)检测人循环肿瘤细胞中hTERT表达.方法 以亲和素作为连接分子,连接生物素化的检测抗体和生物素化的DNA,加入T7 RNA聚合酶进行转录扩增反应,对生成的RNA产物进行荧光检测,并同时用酶联免疫方法检测hTERT及CEA作为比对.结果 64例结直肠癌患者血清hTERT阳性率是 45.3%(29/64),血清CEA阳性率是 57.8%(37/64);Cellular FACTT方法检测循环肿瘤细胞的hTERT检出率为81.3%(52/64).其检测的灵敏度与酶联免疫检测方法有显著差异P<0.01.结论 T7 RNA聚合酶催化的荧光扩增技术较酶联免疫检测方法具有更高的敏感性,有可能作为一种新的检测方法用于临床的诊断.
关键词： 结直肠肿瘤 指导DNA的RNA聚合酶类 肿瘤循环细胞 端粒 末端转移酶 -
实体恶性肿瘤循环肿瘤细胞检测的研究进展
恶性实体肿瘤远处转移是导致肿瘤患者死亡的主要原因。目前，恶性肿瘤的诊断主要依赖影像学检查、病理学检查及肿瘤标志物等。随着精准医疗时代的到来，循环肿瘤细胞（ CTC）检测技术应运而生，已成为肿瘤学界的研究热点，使人类对恶性肿瘤的检测达到单细胞水平，从而被视为恶性肿瘤的“液体活检”样本，并具有无创、多次、实时获取及整体性等优点，在实体恶性肿瘤的诊断、治疗及病情监测等方面具有独特优势。本文通过综述相关文献，分析了常见CTC检测技术的特点及其临床应用现状，旨在为进一步完善CTC检测技术，指导其在科研及临床中的应用提供参考。
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原发性肝细胞癌肝外转移与循环肿瘤细胞的关系
目的 研究原发性肝细胞癌肝外转移与外周血肝癌细胞的关系.方法 收集2005年10月至2006年12月收治的30例原发性肝细胞癌患者术前及手术结束时的外周血标本.并收集10名健康志愿者的外周血作为对照.采用免疫磁珠的方法,富集、分离肝癌患者术前、术后外周血中的癌细胞;随访观察术后患者肝外转移与外周血肝癌细胞的关系.结果 免疫磁珠技术可以富集分离到肝癌患者外周血中游离癌细胞,经甲胎蛋白免疫组化证实为肝细胞癌细胞.30例肝癌患者术前和术后外周血肝癌细胞阳性率分别是53.3%和83.3%,两者差异有统计学意义(P<0.05);术前外周血肝癌细胞阳性与肝外转移发生密切相关;外周血癌肝细胞浓度低于1×10~3个/L者未发现肝外转移.结论 原发性肝细胞癌患者肝外转移与术前外周血肝癌细胞阳性率及肝癌细胞浓度有关.
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腋窝淋巴结阳性原发性乳腺癌循环肿瘤细胞与临床病理特征的相关性研究
目的 探讨腋窝淋巴结阳性原发性乳腺癌循环肿瘤细胞(CTC)与空芯针穿刺原发肿瘤临床病理特征之间的相关性.方法 采集126例腋窝淋巴结阳性原发性乳腺癌患者的外周静脉血,使用CellSeareh系统检测外周血CTC,分析CTC与原发肿瘤临床病理特征之间的相关性.患者均为女性,年龄27～ 65岁,中位年龄49岁.结果 126例患者中,32例可检测出CTC,阳性率为25.4％(32/126),其中人类表皮生长因子受体2(HER-2)阳性患者CTC阳性率为36.2％ (17/47),HER-2阴性患者CTC阳性率为19.0％(15/79),两者差异有统计学意义(x2=4.592,P＜0.05).多因素回归分析显示,HER-2阳性患者外周血检出CTC的风险是HER-2阴性患者的2.712倍(OR=2.712,95％ CI:1.117 ～6.584,P=0.027),而年龄、月经状态、肿瘤T分期、病理类型、组织学分级、激素受体状态及Ki-67表达水平不同的患者之间,CTC阳性率的差异并无统计学意义(P＞0.05).结论 腋窝淋巴结阳性原发性乳腺癌CTC与原发肿瘤HER-2状态相关,而与患者年龄、月经状态、肿瘤T分期、病理类型、组织学分级、激素受体状态及Ki-67表达水平无明显相关性.
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肝细胞癌门静脉癌栓形成的临床相关因素
目的 明确肝细胞癌门静脉癌栓(PVTT)形成的临床相关因素.方法 回顾性研究1991年1月至2002年6月实施根治性肝切除、且随访和临床资料完整的234例肝细胞癌(HCC)患者的临床资料,Logistic单因素和多因素回归分析PVTT形成与18个常见临床因素的相关性.结果 234例患者的PVTT发生率为15%(35/234),Logistic单因素回归分析发现PVTT形成的相关因素为:年龄(P=0.016)、谷氨酰转肽酶(GGT,P=0.003)、侵犯肝段数目(P=0.007)、微血管侵犯(P<0.01)、肿瘤位于S2段(P=0.001)、S3段(P<0.01)、s4段(P=0.004)、S6段(P=0.016);Logistic多因素回归分析发现PVTT形成独立相关因素为:年龄(RR:0.373;95%CI:0.146～0.954;P=0.040)、肿瘤位于S3段(RR:4.625;95%CI:1.916～11.165;P=0.001)、微血管侵犯(RR:20.912;95%CI:4.745～92.172;P<0.01)、GGT(RR:4.091;95%CI:1.448～11.553;P=0.008).结论 PVTT多发生于年龄<50岁、肿瘤位于第Ⅲ段、GGT升高、显微镜下可见微血管侵犯的HCC患者.
关键词： 癌 肝细胞 门静脉 肿瘤循环细胞 Logistic回归分析
