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同位素稀释质谱法与高效液相色谱法测定胆固醇的方法学比较:JCTLM列表中两个国际公认参考方法的比对研究
目的 对国际检验医学溯源联合委员会(JCTLM)收录的两种胆固醇参考方法进行方法学比对研究,评价两法测定结果的一致性和可比性.方法 方法学比对研究.用同位素稀释液相色谱串联质谱法(LC/MS/MS法)和高效液相色谱法(HPLC法)同时测定52份新鲜冰冻人血清样本中的胆固醇,浓度范围为3 ~10 mmol/L.计算两法的精密度和准确度,对测定结果绘制散点图和偏差图,进行离群值检验,并选取佳拟合模型进行回归分析,计算回归方程及各项参数.将两法测定结果进行统计学分析,计算胆固醇医学决定水平处的预期偏差及95%的可信范围.结果 HPLC法仪器测定的CV为0.22%(0~0.49%),测定样本的总CV为0.36%(0.02%~0.83%),分析有证参考物质的平均偏倚 -0.37%(-1.31% ~0.14%).LC/MS/MS 法仪器测定的 CV 为0.50%(0~1.51%),测定样本的总 CV 为0.55%(0.03% ~1.17%),分析有证参考物质的平均偏倚 -0.24%(-0.53%~0.14%).经统计分析两法测定结果未出现离群点,可采用线性回归方法进行分析.两法测定新鲜冰冻人血清样品的线性回归参数如下:斜率b=0.9895,斜率标准误Sb=0.0034,截距a=0.0634 mmol/L,截距标准误Sa=0.0199 mmol/L,Y估计值的标准误Sy/x=0.0348 mmol/L,相关系数r=0.9997,n=52.同LC/MS/MS法相比,HPLC法测定新鲜血清样品的绝对偏差为0.000 mmol/L(-0.083~0.076 mmol/L),相对偏差为0.07%(-1.22%~1.24%).t检验结果显示两个方法的测定结果没有统计学差异.在胆固醇医学决定水平处的预期偏差均在正负95%的可信区间范围内,且预期偏差远远小于允许误差.结论 现有的HPLC法同权威的测量原理LC/MS/MS法测定血清总胆固醇的结果具有较好的一致性和可比性,且HPLC法比LC/MS/MS法价格低廉、技术简单、仪器精密度更高,故HPLC法可望在胆固醇的溯源过程中发挥重要作用.
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同位素稀释质谱法在甾体激素测定中的应用
同位素稀释质谱法是目前公认的可准确测量小分子化合物的分析原理.该法精密、准确,具有高度的特异性,适于测定甾体激素这一类浓度极低、干扰多的项目.目前国内外发表的相关参考方法都是基于这一分析原理.本文就同位素稀释质谱法在甾体激素测定中的应用进行了归纳和分析.
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10种市售总25-羟基维生素D免疫检测系统测定偏差评价
目的 评价10种25-羟基维生素D[25(OH)D]免疫检测系统的测定偏差.方法 本研究属于方法学比对.先选用含有不同25 (OH)D类型的4浓度水平的人血清标准物质SRM972a,应用本室建立的液相色谱-同位素稀释质谱法(ID-LC/MS/MS)和迈瑞、新产业、迈克、科美、雅培、西门子、罗氏、梅里埃8个厂家的10种标记免疫检测系统共同测定,利用Excel软件计算测量值和标准物质标示值之间的相对偏差.再选用2支含不同浓度水平25(OH)D3的临床血清样本进行共同测定,利用Excel软件计算免疫检测系统测量值和ID-LC/MS/MS测量值之间的相对偏差.对各免疫检测系统测定偏差结果进行评价,要求免疫检测系统相对偏差不大于10％,同时简要分析各检测系统分析特异性.结果 通过对血清25(OH)D标准物质测试,自建ID-LC/MS/MS测量结果和标准物质标示值接近,测量偏差在1.6％ ～2.8％,各免疫检测系统对不同类型25(OH)D成分的检测能力有差别,有8个检测系统对高含量25(OH)D3标准物质(水平1)测量偏差较小(1.5％～3.5％),但只有2个免疫检测系统对高含量25(OH) D2标准物质(水平3)测量偏差较小(3.6％～3.7％),5个免疫检测系统对高含量3-epi-25(OH)D3标准物质(水平4)测量偏差较小(-0.3％ ～9.0％).总体而言检测系统7表现出较小的测定偏差,对25 (OH) D2、25 (OH) D3和无活性异构体3-epi-25 (OH) D3有较好的分析特异性.对2支25(OH)D3血清临床样本的测试显示,与同位素稀释质谱法测量结果相比,免疫检测系统高值样本检测时测定偏差较小.结论 不同免疫检测系统对25(OH)D检测结果与ID-LC/MS/MS相比,测量偏差的差异较大.各25 (OH)D免疫检测的特异性检测能力,尤其是对25(OH)D2和25(OH)D3的等效识别上还有提升的空间.
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床旁实时浓度监测氦气稀释法检测功能残气量的实验观察
目的 探讨床旁实时浓度监测氦气稀释法(RHe法)检测功能残气量的准确性、精度及重复性.方法 选择18例健康比格犬,利用静脉注射油酸制作急性呼吸窘迫综合征(ARDS)动物模型,在制作动物模型前后采用床旁RHe法及胸部CT扫描法检测功能残气量,实验过程中,实时监测实验动物呼吸、心率、血压等生命体征,选用Bland-Altman分析法及配对t检验进行统计学分析.结果 对于造模前健康肺,CT扫描法检测功能残气量(FRCCT)与床旁RHe法检测功能残气量(FRCRHe)呈线性相关,回归方程为FRCRHe=0.959×FRCcT+ 23.3(R2=0.89,P＜0.000 1).RHe法与CT法的偏倚为(6.3±27.6)ml(1.5％±7.1％),95％可信区间为-47.7 ～60.3 ml;对于造模后ARDS肺,直线回归方程为FRCRHe=0.693×FRCcT+ 66.4(R2=0.507,P＜0.001).RHe法与CT法的偏倚为(7.9±27.1)ml(4.5％±13.6％),95％可信区间为-45.3 ～61.1 ml.两次FRCRHe之间的差别在健康肺和ARDS肺分别为(-0.1％±5.8％)和(0.2％±9％).结论 床旁RHe法用于检测健康及ARDS模型肺功能残气量均具有良好的准确性、精度及重复性.
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连续性肾脏替代治疗中枸橼酸抗凝前后稀释效果比较
目的：比较枸橼酸抗凝前后稀释在连续性肾脏替代治疗（ CRRT）中的效果。方法选取2012年4月-2014年2月于本院接受CRRT的患者40例，采用连续静脉-静脉血液滤过（ CVVH）模式进行CRRT，采用枸橼酸抗凝行CRRT，随机分为两组，A组为前稀释法，B组为后稀释法，比较前后稀释CRRT的滤器寿命、滤后净减少血钙值、跨膜压（TMP）、病死率。结果 A组滤器及管路寿命、滤前后血钙减少值、TMP均优于B组，差异均有统计学意义（ P<0.05）。结论在患者行CRRT中，枸橼酸抗凝前稀释法的应用效果更佳，值得在临床中推广。
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标本稀释液对电化学发光法检测血清人绒毛膜促性腺激素结果的影响
目的：探讨不同的稀释液对电化学发光法检测血清中人绒毛膜促性腺激素（hCG）水平结果的影响。方法27例孕周为3～8周的妊娠妇女血清，按β-hCG 的浓度分为以下3组：低浓度组β-hCG ＜1000 mIU /ml；中浓度组β-hCG 1001～10000 mIU /ml；高浓度组β-hCG ＞10000 mIU /ml。分别用通用稀释液、0．9％氯化钠注射溶液、蒸馏水以1∶10稀释，然后用 Roche cobas E601电化学发光分析仪测定其β-hCG 值。结果低浓度组用0．9％氯化钠注射溶液稀释所测得的β-hCG 值与通用稀释液稀释后测得的值相比差异有统计学意义（P ＝0．042），而在中、高浓度组两者的检测结果差异无统计学意义（P ＝0．201，P ＝0．076）；在低、中、高三个浓度组用蒸馏水稀释所测得的β-hCG 值与通用稀释液测得的值相比，差异均有统计学意义（P ＝0．000）。结论稀释液对电化学发光分析仪测定β-hCG 结果影响较大，0．9％氯化钠注射溶液和蒸馏水均不适宜作为低浓度β-hCG 的替代稀释液，而对于中高浓度的标本可以选0．9％氯化钠注射溶液作为替代稀释液。
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ELISA共系统检测HBeAg与抗-HBe结果分析
目的 探讨用ELISA[稀释中和(竞争)抑制法]共系统检测HBeAg与抗-Hbe的可行性及结果判定方法.方法 以预包被纯化乙肝e抗体(HBeAb)板孔结合稀释的中和试剂(HBeAg)等试剂组分,以ELISA共系统检测1 000例随机血清(浆)标本HBeAg与抗-Hbe,并分别以常规ELISA作平行对照.结果 ELISA共系统检测HBeAg,易于目测,其比色判定临界值(cutoff value,COV)易于设定(或使用HBeAg临界值血清或抗-Hbe阴性对照),与常规ELISA检测HBeAg比色判定差异无统计学意义(配对计数资料比较的X~2检验;相关检验均为P<0.005,u=1,a=0.05,优劣检验依次为HBeAg临界值血清(1)P>0.900,u=1,a=0.05、抗-Hbe阴性对照;(2)0.100 > P>0.050,u=1,a=0.05、ELISA共系统检测HBeAg COV,(3)0.100>P>0.050,u=1,a=0.05,但X_1~2
