首页 > 文献资料
-
软脉灵对血管平滑肌细胞丝切蛋白的影响
目的 观察软脉灵药物血清对血小板源性生长因子(PDGF)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)骨架蛋白α肌动蛋白和调节蛋白丝切蛋白(cofilin)重排的影响.方法 组织块贴壁法培养VSMC,α肌动蛋白单克隆抗体鉴定细胞,间隔12 h灌胃5次后制备SD大鼠软脉灵药物血清;将VSMC按照如下方式进行处理:未作任何处理(空白对照组)、加入PDGF(10 μg/L,PDGF组)、10％正常血清+PDGF(正常血清组)、10％软脉灵药物血清+PDGF(软脉灵药物血清组)和阿托伐他汀+ PDGF(Ator组).使用免疫荧光技术对丝切蛋白和α肌动蛋白进行染色,激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架蛋白的重排情况,并通过共聚焦显微镜软件计算丝切蛋白的荧光强度变化.结果 PDGF刺激后,细胞呈梭形,细胞骨架重排,细胞浆中出现应力纤维且排列集中;丝切蛋白表达增强(空白对照组32.05±6.10比PDGF组77.68±13.15,P＜0.01),且和微丝“共位”于胞质和板状伪足处,沿细胞膜边缘呈线状分布.10％软脉灵药物血清干预1h后,细胞微丝无集中排列,应力纤维减少且排列松散,丝切蛋白表达减弱(软脉灵药物血清组61.15±6.23比PDGF组77.68±13.15,P＜0.01;软脉灵药物血清组61.15±6.23比Ator组51.85±10.59,P=0.036),板状伪足减少且只有少量微丝和丝切蛋白分布.结论 PDGF可增强血管平滑肌细胞骨架蛋白丝切蛋白的表达;软脉灵药物血清可抑制细胞骨架调节蛋白丝切蛋白的表达和在胞质中重排,抑制PDGF诱导的VSMC形态变化.
-
外源性转化生长因子β1对大鼠原代肝星状细胞活化的影响
目的:探讨大鼠原代肝星状细胞(HSC)体外培养过程中,不同时期外源性转化生长因子β1(TGF-β1)对其活化的影响及相关因素的变化.方法:分离大鼠原代HSC,于无包被的塑料培养板上分别培养2,3,4,5,6,7 d时予TGF-β15 μg/L处理24 h,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,应用Western blot法检测处理前后细胞α-肌动蛋白(α-SMA)的变化,及活化过程中TGF-β1Ⅱ型受体(TβR-Ⅱ)的表达.结果:HSC在体外培养过程中,不同培养时间对TGF-β1的刺激活化作用反应不同.TGF-β1处理后,对培养2,3,4,5 d HSC的活化有促进作用,以对培养第3天的细胞作用明显,其α-SMA表达增加78.05%,而培养6,7 d的HSC的形态和α-SMA变化不明显.培养第7天的HSC比培养第3天的细胞TβR-Ⅱ表达增高(3.30±0.83 vs 1.55±0.38,P＜0.05).结论:TGF-β1对处部分活化状态中某阶段细胞的活化具有促进作用.完全活化的细胞对TGF-β1的刺激活化作用不敏感,原因与TβR-Ⅱ的表达量无关.
-
酶消化法培养老龄SD大鼠血管平滑肌细胞
目的:采用酶消化法培养老龄SD大鼠血管平滑肌细胞,为血管疾病,特别是为动脉粥样硬化研究提供大量的原代平滑肌细胞.方法:无菌取老龄SD大鼠主动脉,0.2%Ⅱ型胶原酶消化分离细胞.采用自然纯化、差速贴壁纯化平滑肌细胞,免疫组化鉴定平滑肌细胞α肌动蛋白.结果:免疫组化染色显示细胞纯度在95%以上.结论:酶消化法分离获取SD大鼠平滑肌细胞方法简单,易掌握,采用本方法可稳定获得大量的平滑肌细胞供实验使用.
-
神经细胞分泌因子促进骨骼肌细胞生长
背景：周围神经损伤可引起支配肌肉萎缩，目前尚无明确的方法治疗肌肉萎缩。肌细胞是实现肌肉收缩功能的结构单位，体外培养的骨骼肌细胞可用于失神经肌肉萎缩相关研究。
目的：观察神经元分泌因子对体外骨骼肌细胞的生长的促进作用。
方法：将体外原代培养的骨骼肌细胞分为2组，实验组加神经细胞分泌因子培养，对照组加普通培养液培养，用苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色检测神经元分泌因子作用后骨骼肌细胞数目及α肌动蛋白表达的变化。
结果与结论：①骨骼肌细胞数量、骨骼肌细胞肌动蛋白的表达：实验组骨骼肌细胞数量、骨骼肌细胞α肌动蛋白的表达均多于对照组(P<0.05)；②结果说明：神经元分泌因子有促进大鼠骨骼肌细胞生长的作用，可能具有治疗失神经肌肉萎缩的作用。 -
粘着斑激酶在增生性瘢痕成纤维细胞中的表达和意义
目的 探讨粘着斑激酶(FAK)在增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB)中的表达和意义.方法 运用细胞免疫组化技术,测定HSFB和正常皮肤成纤维细胞(NSFB)中的FAK、整合素α1、转化生长因子受体1(TGF-βR1)及α肌动蛋白(α-SMA)的表达;同时将HSFB分别用抗FAK、整合素α1、TGF-βR1及α-SMA抗体进行阻断培养,并测定培养前后整合素α1、TGF-βR1、α-SMA及FAK的表达.结果 与NSFB相比,HSFB中的FAK、整合素α1、TGF-βR1、α-SMA的表达增高,差异具有显著意义(P＜0.05).分别用抗整合素α1、TGF-βR1、α-SMA抗体进行阻断培养后,HSFB中的FAK表达下降(P＜0.01);阻断FAK表达也可分别导致了整合素α1、TGF-βR1、α-SMA的表达降低(P＜0.01).结论 FAK对整合素α1、TGF-βR1及α-SMA的蛋白合成具有重要的调控作用,与增生性瘢痕的发生、发展关系密切.减少FAK在成纤维细胞中的过度表达,可能是抑制瘢痕增生、软化瘢痕的新途径.
关键词： 增生性瘢痕成纤维细胞 粘着斑激酶 整合素α 转化生长因子受体1 α肌动蛋白 -
肾络瘀阻证患者肾间质中α-SMA的表达及意义
目的:研究α平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)在肾络瘀阻证患者肾小管间质中的表达特征.方法:采用免疫组织化学法检测54例肾络瘀阻证患者肾穿刺标本中间质α-SMA的表达.结果:肾络瘀阻的程度与肾间质纤维化程度呈正相关(P<0.01),并与间质中α-SMA的表达呈正相关(P<0.01).结论:肾络瘀阻是中医认识肾纤维化的病理本质之一,随着血瘀程度的加重,肾间质中肌成纤维细胞大量增殖,是导致肾间质纤维化的重要原因.
-
阿托伐他汀对兔动脉粥样硬化的作用及其机制
目的:观察阿托伐他汀对动脉粥样硬化(AS)早期病变的作用.方法:雄性新西兰白兔随机分为正常对照组(正常饮食)、动脉粥样硬化组(高脂饮食)和阿托伐他汀组,10周后测定血清中血脂、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP)及白介素-10(IL-10)水平,H-E染色测定胸主动脉内膜及中膜厚度,免疫组织化学法测定胸主动脉环氧化酶2(COX-2)、氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)及α肌动蛋白(α-actin)的表达.结果:高脂饮食后兔血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG),低密度脂蛋白胆固醇(ox-LDL)浓度升高,胸主动脉形成典型脂质条纹.与动脉粥样硬化组相比,阿托伐他汀组血清血脂、oxLDL、TNF-α、CRP水平降低,IL-10水平则增高.胸主动脉内膜厚度和内膜/中膜厚度比下降,主动脉COX-2、LOX-1、α-actin 的表达降低.结论:阿托伐他汀通过抑制血管炎症反应及平滑肌细胞增殖、降脂等多环节抑制动脉粥样硬化斑块的早期形成.
-
蚯蚓提取物对肝纤维化大鼠α-SMA、TGFβ1、uPA及PAI-1蛋白表达的影响
目的研究蚯蚓提取物地龙2号对实验性大鼠肝纤维化的α肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF β1)、尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及Ⅰ型纤溶酶原激活抑制物(PAI-1)蛋白表达的影响.方法 52只雄性Wistar大鼠,随机分成6组:正常组(N);阴性对照组(NC),皮下注射花生油,灌单蒸水;模型组(M),皮下注射CCl4,每日单蒸水灌胃;阳性对照组(PC),造模同时用秋水仙碱0.1 mg·kg-1·d-1灌胃;地龙大剂量组(Eh),造模同时用地龙2号50 mg·kg-1·d-1灌胃;地龙小剂量组(El),造模同时用地龙2号25 mg·kg-1·d-1灌胃.8周末处死大鼠,用免疫组化法检测各组大鼠肝脏组织中α-SMA、TGFβ1、uPA及PAI-1的表达情况.结果地龙2号大、小剂量组与模型组相比,α-SMA、TGFβ1、uPA及PAI-1的表达均显著降低,且uPA、PAI-1与α-SMA及TGFβ1表达下降呈明显的正相关.结论地龙2号可能通过抑制肝纤维化大鼠肝组织中肝星状细胞的活化,降低TGFβ1、uPA及PAI-1的表达,发挥抗肝纤维化作用.
-
几丁聚糖对大鼠颈动脉球囊损伤术后血管内膜增生的影响
目的 研究几丁聚糖对大鼠颈动脉球囊损伤术后再狭窄的影响,并探讨其机制.方法 60只SD大鼠分为几丁聚糖组和模型组各30只.复制大鼠颈动脉球囊损伤模型.几丁聚糖组在术前1周即开始每天一次灌胃几丁聚糖2 g,并在术后继续给予至处死;模型组只建立模型但不予以任何处理.分别于手术后即刻(0 d)、7 d、14 d、28 d和35 d,每组各处死大鼠6只.光镜下观察血管内膜损伤;运用图形分析系统检测增殖的内膜面积;α肌动蛋白免疫组织化学检测增殖内膜细胞的性质,血管内皮生长因子免疫组织化学标记血管内皮细胞明确损伤后血管内皮修复情况.结果 模型复制成功53例,几丁聚糖组28例,模型组25例.手术后即刻见血管内膜完全剥脱,部分可见平滑肌细胞断裂.手术后7 d可见内膜增生.模型组血管内膜在第28天增生达高峰,几丁聚糖组内膜增生在术后14 d达到高峰.几丁聚糖组与模型组比较内膜增生程度差异有显著性(P均<0.05).α肌动蛋白检测结果显示增殖的内膜细胞为血管平滑肌细胞.血管内皮生长因子检测结果显示几丁聚糖组在手术后14 d血管完全再内皮化,而模型组手术后28 d才完全再内皮化.结论 几丁聚糖能预防大鼠颈动脉球囊损伤术后再狭窄,其机制可能与几丁聚糖促进血管再内皮化有关.
-
大鼠血管平滑肌细胞体外培养的表型转换及其鉴定
目的 探讨体外传代培养对血管平滑肌细胞表型转换的影响,确认体外培养的血管平滑肌细胞不同表型的佳指标.方法 选择以未经培养传代的血管平滑肌细胞和体外培养的第4代血管平滑肌细胞作对比研究,采用免疫组织化学法检测血管平滑肌细胞α肌动蛋白,逆转录聚合酶链反应检测血管平滑肌细胞肌动蛋白22α、基质γ-羧基谷氨酸蛋白和骨桥蛋白各目的基因mRNA相对表达水平,透射电镜观察血管平滑肌细胞的形态学特征,确定其表型转换特征及各表型指标的区分效能.结果 电镜观察显示,未经培养传代的血管平滑肌细胞胞质中肌丝分布丰富、均匀,并可见到收缩表型血管平滑肌细胞的典型结构-密斑,内质网、高尔基复合体等细胞器相对较少;而体外培养至第4代时血管平滑肌细胞胞质中肌丝明显减少,内质网、高尔基复合体明显增多.原代血管平滑肌细胞α肌动蛋白免疫组织化学染色强且广泛,而体外培养至第4代时α肌动蛋白染色明显变浅、稀疏.第4代血管平滑肌细胞的骨桥蛋白mRNA表达量较原代血管平滑肌细胞显著增高(P<0.01),肌动蛋白22α mRNA在血管平滑肌细胞中的表达量较原始血管平滑肌细胞降低,但差异不大,基质γ-羧基谷氨酸蛋白mRNA表达量较未经培养传代的血管平滑肌细胞升高(P<0.05).结论 血管平滑肌细胞体外培养至第4代,即可从典型的收缩表型转化为合成表型,提示血管平滑肌细胞是一种很容易去分化的细胞.电镜形态观察α肌动蛋白和骨桥蛋白在两型血管平滑肌细胞中的差异,可作为血管平滑肌细胞表型区分的有效标志.而肌动蛋白22α和基质γ-羧基谷氨酸蛋白的表达在两型血管平滑肌细胞中虽有一定的差异,但重叠较大.
-
TTX停搏液对心肌α肌动蛋白的影响及机制研究
目的:研究Na+通道阻滞剂河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)停搏液对离体大鼠心肌α肌动蛋白(α-actin)的影响及其机制.方法:20只Wistar大鼠随机均分入St.Thomas-2停博组(STH-2组),TTX)(停博组(TTX组),建立离体心脏Langendorff和Neely灌注模型,搏动稳定后,灌注30min后停搏60min,冉灌注60min,观察各组心脏停搏前后的心率(HR)、冠状动脉流量(CAF)、左心室收缩未期压力(LVESP)和压力变化速率(±dp/dt)的恢复率,采用免疫组化检测钙蛋白酶(Calpain),免疫组化和Western blot检测α-actin的分布及量的变化.结果:恢复灌注后,TTX)(停搏组的各项心功能恢复率明显优于STH-2组(P＜0.01,P＜0.05),STH-2组的calpain分布紊乱,表达量明显增多(P＜0.01);α-actin分布紊乱,表达量明显减少(P＜0.01).结论:以TTX阻断Na+通道为特点的心脏停搏液对大鼠心肌缺血-再灌注损伤(Myocardial ischemia/reperfusion injury,MIRI)时的α-actin 及心功能的保护作用优于STH-2停搏液,其机制町能足直接或者间接的减少激活calpain引起的.
-
压力性尿失禁大鼠盆底肌肉微丝形态和结构改变与盆底功能的关系
目的观察大鼠压力性尿失禁(SUI)时盆底肌肉微丝形态和结构的变化,探讨盆底肌肉功能障碍的原因.方法取SUI模型大鼠及正常大鼠的耻尾肌(各5例),透射电镜下观察其超微结构改变,并用免疫组化检测肌肉中α肌动蛋白(α-actin)含量的变化.结果SUI大鼠盆底肌细胞中微丝的走行有明显的改变,其α-actin含量也较正常组减少.结论发生SUI时,盆底肌肉发生了退行性改变,造成了盆底功能障碍.
-
银杏叶提取物对新生鼠HIBD后心肌肌动蛋白表达的影响
目的:探讨银杏叶提取物对新生鼠缺氧缺血后心肌α肌动蛋白表达影响的情况.方法:采用54只7天大小的SD大鼠以完全随机的方法分为三组,分别为生理盐水对照组、银杏叶组提取物组及假手术组,每组18只,并对生理盐水组及银杏叶提取物组进行右则颈总动脉结扎术,术后放入特制缺氧箱中进行缺氧2小时,缺氧实验完成后半小时分别对新生鼠进行腹腔注射生理盐水和银杏叶提取物.经过以上方法处理后将各组的新生鼠分别在处理后的第3、7、14d给予处死并留取新生鼠完整的心脏,采用HE染色法观察心脏组织病理改变及免疫组化方法来检测心脏组织中α肌动蛋白的表达.结果:HE切片可见HIBD后新生鼠心肌细胞3d、7d、14d组均有损伤,其中3d组心肌细胞损伤严重,部分心肌细胞胞膜破裂,但银杏叶提取物组心肌细胞损伤较生理盐水组减轻明显;免疫组化可见银杏叶提取物组心肌α肌动蛋白表达较生理盐水组表达增强明显;结论:银杏叶提取物在对缺氧缺血性心肌损害后心肌α肌动蛋白的表达有增强作用,对心肌细胞起到一定的保护作用;
