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大肠癌组织RAB5A和CD44v9表达的意义
目的:探讨大肠癌组织RAB5A和CD44v9表达的意义.方法:应用SP免疫组化法检测43例大肠癌病理蜡块中RAB5A和CD44v9的蛋白质表达;取60例大肠癌患者新鲜组织标本,提取RNA并逆转录合成cDNA,应用Real-time PCR法检测组织样本中RAB5A和CD44v9的基因表达;分析CD44v9和RAB5A的基因与蛋白质表达量与大肠癌分化及转移程度的相关性.结果:RAB5A蛋白表达阳性率为100%,阳性表达位于胞质和胞膜;CD44v9表达阳性率为86.7%,阳性表达位于胞质;荧光定量PCR结果经熔解曲线分析各样本扩增产物的Tm值一致并与阳性对照的Tm值吻合.RAB5A cDNA的表达量在高分化和中分化大肠癌组织中低于低分化大肠癌组织(P＜0.01),在无淋巴结转移的大肠癌组织中低于有淋巴结转移的组织(P＜0.01),而CD44v9 cDNA的表达趋势与RAB5A相同;RAB5A与CD44v9的蛋白和基因表达均呈正相关(x2=14.532,P＜0.01).结论:RAB5A和CD44v9的表达与大肠癌的分化和转移有关,可能在跨膜信号传导和基质侵袭中共同发挥作用.
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野生型大鼠Rab5a基因表达载体pcDNA3-Rab5(a)WT的转化扩增及鉴定
目的 对含野生型大鼠Rab5a基因载体pcDNA3-Rab5 (a) WT进行体外转化、扩增及鉴定,为基于Rah5a的相关研究提供高纯度、高丰度的表达载体.方法 取pcDNA3-Rab5 (a) WT质粒转化DH 5α感受态菌,再接种到含氨苄青霉素的LB琼脂培养板进行抗性筛选,对挑取的阳性克隆进行LB液体培养基培养后抽提质粒,用超微量核酸蛋白测定仪测定提取质粒的纯度和浓度,并取样进行琼脂糖凝胶电泳及PCR鉴定.结果 经转化后获得了大量抗氨苄青霉素的阳性克隆菌落,挑取阳性克隆并经培养后提取的pcDNA3-Rab5 (a) WT质粒均为浓度高、纯度高、超螺旋结构为主的质粒.pcDNA3-Rab5(a)WT经PCR后得到Rab5a基因.结论 成功转化并扩增了pcDNA3-Rab5 (a) WT,为Rab5的相关研究提供了高质量的表达载体.
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HPV16阳性宫颈鳞癌组织EGFR上游与下游相关蛋白表达临床意义探讨
目的 探讨HPV阳性宫颈鳞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)组织中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、Rab5a、Rab21、c-jun、c-fos蛋白表达关系及临床意义.方法 收集2012-09-01-2013-09-30新疆医科大学附属肿瘤医院病理科保存的初治HPV阳性CSCC组织标本45例.其中维吾尔族人群标本33例,汉族人群标本12例,年龄30～70岁,中位年龄46岁.采用免疫组织化学法检测45例HPV阳性CSCC组织中EGFR、Rab5a、Rab21、c-jun和c-fos蛋白表达情况.结果 EGFR、Rab5a、Rab21、c-jun和c-fos蛋白阳性表达率分别为64.4％、66.7％、60.0％、75.6％和66.7％;EGFR蛋白表达与临床分期(x2=8.008,P=0.005)、淋巴结转移(x2=7.162,P=0.007)有关,Rab5a蛋白表达与临床分期(x2 =10.045,P=0.002)、肿瘤分化程度(x2=3.906,P=0.048)、淋巴结转移(x2=5.511,P=0.019)有关,Rab21蛋白表达与临床分期(x2=9.644,P=0.002)、淋巴结转移(x2=23.766,P＜0.001)有关,c-jun(x2=4.022,P=0.045)、c-fos(x2=18.219,P＜0.001)蛋白表达与淋巴结转移有关.Spearman等级相关分析显示,c-jun、c-fos蛋白表达与肿瘤分化程度呈负相关(r=-0.347,P=0.020;r=-0.299,P=0.046),与临床分期呈正相关(r=0.362,P=0.015;r=0.329,P=0.028);EGFR与Rab21表达呈负相关(r=-0.322,P=0.031),EGFR与Rab5a、c-jun、c-fos表达呈正相关(r值分别为0.558、0.658和0.755,P值均＜0.001).结论 HPV阳性CSCC中Rab21蛋白可能阻碍EGFR介导的信号传导,Rab5a、c-jun、cfos蛋白可能促进EGFR介导的细胞信号传导,EGFR、c-jun、c-fos、Rab21、Rab5a可能作为CSCC发展、转移的参考指标.联合检测EGFR、c-jun、c-fos、Rab5a、Rab21可为CSCC的诊断、寻找新的治疗靶点和预后评估提供依据.
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Rab5a和APPL1在乳腺癌组织中的表达及意义
目的 探讨Rab5a和APPL1在乳腺癌组织中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学方法检测40例乳腺纤维瘤组织和74例乳腺癌组织中Rab5a和APPL1的表达水平,分析其与乳腺癌转移、病理分级和人表皮生长因子受体2 (HER-2)表达的相关性.结果 Rab5a和APPL1在乳腺纤维瘤组织中的阳性率分别为45.0％和30.0％,在乳腺癌组织中的阳性率分别为91.9％和83.8％(均P＜0.01).Rab5a在乳腺癌HER-2阳性组和阴性组中的阳性率分别为92.6％和90.0％ (P ＜0.05),APPL1在乳腺癌HER-2阳性组和阴性组中的阳性率分别为85.2％和80.0％ (P ＞0.05).Rab5a和APPL1在有无乳腺癌局部转移和不同病理学分级中的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Rab5a和APPL1在乳腺癌中高表达,并与HER-2表达呈正相关；Rab5a和APPL1可能通过调节HER-2的信号传导而影响乳腺癌细胞生物学行为.
关键词： 乳腺肿瘤 RAB5A APPL1 人表皮生长因子受体2 免疫组织化学 -
VHL和RAB5A在胃癌中的表达及其临床意义
目的:讨论胃癌患者中VHL、RAB5A的表达情况及相关性的研究.方法:搜集本院2013-2015年被确诊为胃癌并进行手术治疗的标本组织152例,用免疫组织EliVisionTMplus染色的方法对其中临床资料完整的100例胃癌标本进行VHL和RAB5A的表达情况探究.结果:VHL、RAB5A在癌旁组织标本中阳性表达率分别为66%和46%,在胃癌标本中表达率分别为28%和84%,二者在胃癌和癌旁组织中的表达情况差异有统计学意义(P<0.05).胃癌患者的淋巴结转移情况和临床分期与VHL和RAB5A的表达情况有着密切的关联(P<0.05),但与胃癌患者的性别、年龄、组织学类型和瘤径大小无明显的相关性(P>0.05).VHL和RAB5A相互之间具有负相关性(Rs值=-0.419,P<0.05).结论:VHL的失活和RAB5A过度表达共同参与胃癌发生和发展的整个过程,随着胃癌患者临床分期的不同或者某些患者伴有淋巴结转移致胃癌进一步发展.VHL和RAB5A二者之间具有负相关性,二者的联合检测有助于诠释胃癌在发生发展、浸润和转移等方面的机制.
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Rab5a促进CpG诱导的巨噬细胞中炎性细胞因子和Ⅰ型干扰素的表达
目的：采用稳定表达Rab5a及其显性负性突变体Rab5aN133I的巨噬细胞系RAW264.7，研究Rab5a及其突变体过表达后对 CpG 诱导的炎性细胞因子和Ⅰ型干扰素的表达的影响。方法：通过脂质体法将 Rab5a 及其突变体Rab5aN133I的真核表达载体转染到RAW264.7细胞中，用G418选择性培养基进行筛选，建立稳定表达Rab5a、Rab5aN133I的细胞系。通过RT-PCR、Real time-PCR和Western blot方法鉴定稳定表达的细胞系。用CpG刺激稳定表达Rab5a、Rab5aN133I的细胞系8 h后检测细胞因子TNF-α、IL-1β和IFN-β的表达量变化。结果：RAW264.7转染Rab5a真核表达载体后Rab5a的表达量显著高于对照质粒转染细胞（ P＜0.05）。 Rab5a过表达后，在CpG刺激作用下RAW264.7分泌的TNF-α、IL-1β显著升高（P＜0.01），IFN-β的分泌也显著升高（P＜0.05），而Rab5aN133I过表达后上述细胞因子的分泌均有所恢复。结论：Rab5a促进了 CpG诱导的巨噬细胞中炎性细胞因子和Ⅰ型干扰素的表达，Rab5a可能是TLR9信号通路的正向调控蛋白。
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Rab5 a促进LPS活化的巨噬细胞中细胞因子的表达
目的：建立稳定表达Rab5a及其失活突变体Rab5aN133I巨噬细胞系，并分析Rab5a对LPS刺激的RAW264．7巨噬细胞中iNOS、TNF-α和IL-6表达的影响。方法：将Rab5a及其失活突变载体Rab5a N133I转染RAW264．7细胞，通过G418筛选稳定表达细胞系。通过Real-time PCR鉴定稳定表达细胞系。 MTT法分析其生长特性，LPS刺激稳定表达细胞系不同时间，检测iNOS、TNF-α和IL-6的表达水平。结果：转染Rab5a／Rab5aN133I细胞Rab5a mRNA 水平显著高于对照（ P＜0.05）。 Rab5a过表达促进RAW264．7细胞增殖，而过表达Rab5aN133I细胞增殖显著慢于对照（ P＜0．05）。 Rab5a过表达后， LPS诱导的RAW264．7细胞中iNOS、 TNF-α和IL-6的表达显著增高（P＜0．01）。然而，过表达Rab5aN133I对LPS诱导的iNOS、TNF-α和IL-6的表达没有显著影响。结论：Rab5a过表达显著促进了LPS活化的RAW264．7细胞中iNOS、 TNF-α和IL-6的表达，这种促进作用依赖于其结合GTP的能力。
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RAB5A、CD44v9在乳腺癌中的表达及其关系
目的 检测RAB5A、CD44v9在乳腺癌组织中的表达及两者之间的相互关系.方法 应用免疫组织化学EnVision二步法对54例乳腺癌组织、20例乳腺良性病变组织中RAB5A和CD44v9进行检测.结果 RAB5A和CD44v9在乳腺癌组织中的阳性表达显著高于良性病变.54例乳腺癌病例中,RAB5A蛋白的阳性率为75.93%(41/54),阳性表达于胞质;CD44v9的阳性率为87.04%(47/54),阳性表达于胞质和胞膜.RAB5A和CD44v9表达在有淋巴结转移的患者中表达程度均高(P=0.002,P=0.005).浸润性乳腺癌分化程度越低,RAB5A和CD44v9的高表达越显著(P=0.01,P=0.036).RAB5A和CD44v9的表达存在正相关(r=0.503,P＜0.001).结论 RAB5A和CD44v9的表达与肿瘤分化程度、浸润转移有密切关系,且两者之间具有正相关关系,可能作为判断乳腺癌恶性程度、转移的参考指标.
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Rab5A与CD44v9在乳腺癌组织中的表达及其相关性
目的 研究乳腺癌组织中Rab5A与CD44v9蛋白的表达及其相关性.方法 应用免疫组织化学S-P法检测53例术后乳腺癌标本、21例乳腺良性肿瘤标本中Rab5A与CD44v9蛋白的表达情况.结果 Rab5A与CD44v9蛋白在乳腺癌组的表达率显著高于良性肿瘤组(P＜0.05);Rab5A和CD44v9蛋白在有淋巴结转移的乳腺癌组中的表达率显著高于无淋巴结转移组(P＜0.05),并且二者的表达水平均与淋巴结状态相关,二者的表达水平增高,则发生淋巴结转移的概率增加(P＜0.05);Rab5A和CD44v9蛋白的表达程度与乳腺癌TNM分期呈正相关,分期越晚表达越强(P＜0.05);乳腺癌组织中,Rab5A与CD44v9蛋白的表达呈正相关(P＜0.05).结论 Rab5A和CD44v9蛋白在乳腺癌的发生发展、侵袭转移中可能起到协同作用.两者联合检测对于早期诊断乳腺癌及判断其预后有重要的临床意义.
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RNAi沉默Rab5a基因对乳腺癌细胞MCF-7侵袭能力的的影响
目的 探讨miRNA表达载体靶向沉默Rab5a表达对人乳腺癌细胞MCF-7侵袭能力的影响.方法 设计4条miRNA干扰载体分别转染乳腺癌细胞MCF-7.应用RT-PCR和Western blot筛选出一组抑制效率高的miRNA干扰载体进行Transwell小室实验检测细胞侵袭能力.结果 转染Rab5a-miRNA-2干扰载体对MCF-7细胞Rab5a表达抑制效果明显,RT-PCR结果显示其对Rab5a基因mRNA抑制率达到(50.01±2.69)%,Western Blot结果显示其对Rab5a蛋白抑制率达到(55.58±3.16)%.选择Rab5a-miRNA-2组干扰载体进行后续实验.Transwell实验显示,Rab5a-miRNA-2组穿膜细胞数为67.8±12.03,与阴性对照组和空白对照组之间均有显著性差异(P<0.01).结论 RNAi靶向沉默Rab5a基因可以抑制乳腺癌细胞MCF-7的侵袭能力.
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RAB5A反义寡脱氧核苷酸抑制大肠癌细胞转移侵袭的实验研究
目的 应用RAB5A反义寡脱氧核苷酸(ASODN)体外转染高转移度的大肠癌细胞LS174T,观察其对肿瘤细胞的增殖、侵袭和运动的影响,初步探讨RAB5A在大肠癌转移中的作用与机制.方法 用脂质体将RAB5A转染人大肠癌高转移细胞LS174T,细胞增殖抑制实验(MTT法)检测RAB5A反义寡核苷酸对细胞的生长和增殖的影响;Transwell小室法检测对细胞的侵袭和运动能力的影响,明胶酶谱法检测细胞基质金属蛋白酶2(MMP2)的分泌与活性的变化;RT-PCR法检测大肠癌细胞的RAB5A的mRNA表达.结果 RAB5A-ASODN能抑制大肠癌高转移细胞LS174T的增殖和高转移大肠癌细胞的浸润和运动能力,并能抑制基质金属蛋白酶的分泌和活性.RAB5A-ASODN组RAB5A表达量比对照组明显减少.结论 在体外抑制RAB5A的表达可抑制大肠癌的转移.
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RAB5A基因对大肠癌细胞侵袭能力的影响
目的研究RAB5A基因转染后对大肠癌细胞侵袭能力的影响.方法用脂质体将RAB5A反义寡核苷酸转染人大肠癌细胞LS174T,48h后transwell小室法观察其对细胞转移能力的影响.结果 RAB5A反义寡核苷酸转染后48h,transwell小室结果可见转染后大肠癌细胞LS174T的侵袭和运动能力明显低于对照组(P《0.01).结论 RAB5A在人大肠癌细胞的侵袭及转移特性的形成中具有重要的作用,RAB5A的反义分子能够有效地阻断该基因表达的翻译过程,在细胞内发挥预期作用.
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RMB5A反义寡脱氧核苷酸对不同转移潜能大肠癌细胞系裸鼠移植癌体内影响研究
目的 观察RMB5A反义寡脱氧核苷酸对人大肠癌高、低转移潜能细胞系的裸鼠移植瘤的抑制作用及抑制肿瘤转移效果.方法 建立人大肠癌高转移和低转移的裸鼠模型,分组给予RAB5A反义寡核苷酸治疗,观察荷瘤鼠的肿瘤体积、肿瘤大小以计算抑瘤率;RT-PCR和免疫组化法检测治疗组RAB5A的表达.结果 在大肠癌裸鼠移植瘤高转移和低转移组中RAB5A反义寡核苷酸均具有抑瘤效果(P＜0.05).反义寡核苷酸组的肿瘤组织中RAB5A基因和蛋白质表达均减少,远隔脏器无转移发生.而正义寡核苷酸组以上指标均与模型组无差别(P＞0.05).结论 体内抑制RAB5A可抑制裸鼠移植癌生长及推迟转移.
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应用重组基底膜侵袭技术对人肺腺癌细胞侵袭能力的研究
目的研究RAB5A基因转染后对肺腺癌侵袭能力的影响.方法采用重组基底膜侵袭实验,观察转染前后的细胞系对基底膜侵袭能力的改变.结果转染pcDNA3.1-RAB5A正义表达载体的AGZY83-a细胞系基底膜侵袭能力增强,转染pcDNA3-AntiRAB5A反义RNA重组质粒的Anip973细胞系侵袭能力明显减弱.结论 RAB5A在人非小细胞肺癌的侵袭及转移特性的形成中具有重要的作用,RAB5A的反义分子能够有效地阻断该基因表达的翻译过程,在细胞内发挥预期作用.
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基底膜侵袭实验技术对人肺腺癌细胞侵袭能力的研究
目的:研究RAB5A基因转染后对肺腺癌侵袭能力的影响.方法:采用重基底膜侵袭实验,观察转染前后的细胞系对基底膜侵袭能力的改变.结果:转染PcDNA3.1-RAB5A正义表达载体的AGZY83-a细胞系基底膜侵袭能力增强,转染PcDNA3-AntiRAB5A反义RNA组质粒的Anip973细胞系侵袭能力明显减弱.结论:RAB5A在人非小细胞肺癌的侵袭及转移特性的形成中具有重要的作用,RAB5A的反义分子能够有效地阻断该基因表达的翻译过程,在细胞内发挥预期作用.
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细胞信号转导因子——Rab5a的表达与宫颈癌转移相关性的研究
目的:研究Rab5a基因在正常组织和癌组织的表达及Rab5a基因的表达与宫颈癌淋巴结转移因素的相关性,初步探讨细胞信号转导因子Rab5a与肿瘤转移的关系.方法:选用近几年诊断明确的宫颈癌标本46例;用免疫组化技术检测Rab5a表达.结果:Rab5a的表达在正常组织中不表达,而在癌组织中有不同程度的表达(P＜0.01).宫颈癌中Rab5a的表达程度与淋巴结转移有明显相关性(P＜0.05).结论:Rab5a是一个可能与宫颈癌转移相关的基因.
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RAB5A在不同分化程度大肠癌组织中的表达
目的检测不同分化程度大肠癌组织中RAB 5AmRNA的表达.方法应用RT-PCR法检测60例不同分化程度的大肠癌组织标本中RAB5A基因表达.结果 60例大肠癌组织中,RAB5AmRNA表达阳性率达100%(60/60),高低分化程度不同者RAB5A表达程度差异有显著性(P＜0.01),随着大肠癌分化程度的降低,表达明显增高.结论 RAB5A基因与大肠癌分化程度呈负相关,RAB5A在其中起调节作用,可作为预测肿瘤分化程度和预后的客观指标.
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Rab5a和maspin在大肠腺瘤组织中的相关性研究
目的:本研究旨在探讨Rab5a、maspin在大肠腺瘤患者病理组织中的表达情况,为找到一种判断大肠腺瘤病情发展情况的标准提供依据.方法:留取50例于佳木斯大学附属第一临床医院手术切除后经病理明确诊断的存档石蜡标本作为实验组(所有患者术前均未做生物治疗、放疗、化疗、手术);留取瘤组织旁正常组织50例作为对照组,采用免疫组化的方法分别检测两组中Rab5a、maspin的表达情况.结果:实验组组织中Rab5a、maspin的表达水平与对照组相比差异明显(P＜0.05),Rab5a、maspin分别在大肠腺瘤和正常的大肠组织中的比较有统计学意义.结论:大肠组织中Rab5a、maspin表达异常程度有助于评判大肠腺瘤病情发展情况.
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CD44V6和RAB5a在结肠癌中的表达及相关性研究
目的:研究CD44V6和RAB5a在结肠癌中的表达情况,结合癌旁组织及正常组织分子的表达情况,探讨CD44V6和RAB5a在结肠癌中的表达与临床病理之间的关系.方法:采用免疫组化(SP法)检测CD44V6和RAB5a在60例结肠癌原发灶、结肠癌癌旁组织(3～5cm)和正常组织中的表达情况,结合临床病理资料进行综合性分析.结果:CD44V6在结肠癌中阳性表达率为68.33％(41/60)明显高于正常组织10％(2/20)及癌旁组31.67％(19/60),与后二者相比有显著性差异(P＜0.05).RAB5a在结肠癌组织中阳性表达100％(60/60),明显高于正常组织5.0％(1/20)及癌旁组织43.33％(26/60),与后二者相比有显著性差异(P＜0.01).结论:CD44V6和RAB5a在结肠肠癌中高表达,且CD44V6与RAB5a的表达呈正相关,并随着结肠癌的分化程度、淋巴结转移以及局部浸润深度之间存在密切的联系.
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Rab5 A在结直肠癌中的表达及其意义
背景：结直肠癌是消化系统常见恶性肿瘤之一，多数患者确诊时已为进展期，预后较差，早期诊断对改善患者预后尤为重要。目前，分子标记物诊断结直肠癌备受关注。目的：探讨Rab5A在结直肠癌中的表达及其意义。方法：收集135例行结直肠癌切除术患者的癌组织及其配对癌旁非癌组织。采用real-time PCR检测21例患者癌组织及其配对癌旁非癌组织以及结肠癌细胞株HCT116、HT-29、LoVo、SW480和正常结肠上皮细胞株NCM460中的Rab5A mRNA表达；采用蛋白质印迹法检测4例患者癌组织及其配对癌旁非癌组织中的Rab5A蛋白表达；采用免疫组化法检测110例患者癌组织中的Rab5A蛋白表达；分析Rab5A表达与结直肠癌临床病理特征和预后的关系。结果：结直肠癌组织中的Rab5A mRNA表达水平显著高于癌旁非癌组织（ P=0.003）；结肠癌细胞株HCT116、HT-29、LoVo、SW480中的Rab5A mRNA表达水平显著高于正常结肠上皮细胞株NCM460（P﹤0.05）。结直肠癌组织中的Rab5A蛋白表达水平显著高于癌旁非癌组织。110例结直肠癌组织中，51例（46.4%）为Rab5A低表达，59例（53.6%）为Rab5A高表达。Rab5A蛋白表达与肿瘤大小、血清癌胚抗原（ CEA）水平和TNM分期相关（ P=0.008；P=0.002；P=0.010）。Rab5A高表达患者的3年生存率显著低于低表达者（52.1%对77.5%，P﹤0.05）。Rab5A、血清CEA和TNM分期与结直肠癌患者的预后相关（ P=0.009；P=0.006；P=0.017），是影响预后的独立因素（ P=0.026；P=0.032；P=0.014）。结论：Rab5A参与了结直肠癌的恶性演进过程，其高表达提示患者预后不良，可作为预测结直肠癌患者预后的有效指标。
