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一种新的瘦素抵抗机制:非酒精性脂肪肝瘦素/PI3-K/Akt信号通路的激活缺陷
目的:研究瘦素、瘦素受体(obesity receptor,OB-R)以及PI3-K/Akt信号通路在非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)患者体内的表达.方法:应用免疫组织化学方法研究30例NAFLD患者及对照组肝组织中瘦素,OB-R,PI3-K(p85)及Akt的表达以及其相关性.同时检测空腹血糖、总胆固醇、甘油三酯、C肽和血清瘦素水平等.结果:NAFLD患者肝组织中瘦素,OB-R和PI3-K显著高于对照组(P＜0.05),且与血清瘦素水平成正相关.NAFLD患者肝组织中Akt的表达显著低于对照组(p＜0.05).此外,PI3-K的表达与瘦素(r=0.365,P＜0.05)呈正相关,但与Akt呈负相关(r=-0.854,P＜0.01).结论:瘦素的过度表达不能活化NAFLD患者的Akt,瘦素/PI3-K激活Akt的缺陷可能是NAFLD患者瘦素抵抗的一种新机制.
关键词： 瘦素 瘦素受体 PI3-K Phospho-Akt激酶 非酒精性脂肪肝 -
ERK PI3-K在乳腺癌及癌前组织中的表达及相关性
目的:分析乳腺癌、癌前病变及正常组织中ERK和PI3-K的mRNA、蛋白表达及激酶活性,探讨其在乳腺癌发生和发展中的作用和相互关系.方法:应用RT-PCR方法检测mRNA表达;Western blot检测蛋白表达;激酶活性检测其磷酸转移酶效率.结果:乳腺癌中ERK2 mRNA和蛋白表达均增加(100%,37/37);激酶活性增加(75.68%,28/37).有32例PI3-KmRNA表达增加(86.49%);35例蛋白表达增加(94.59%);25例激酶活性增加(67.57%).ERK在乳腺癌和癌前病变中均处于活化状态,PI3-K只在乳腺癌中处于高表达.相关性分析表明,乳腺癌中ERK2与PI3-K激酶活性呈负相关.结论:ERK和PI3-K途径在乳腺癌发生过程中均存在异常且两者可能存在某种协调关系.
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VEGF在运动诱导大鼠海马神经发生中可能的信号转导通路
目的 分析血管内皮生长因子(VEGF)在运动诱导的神经发生中可能的信号转导途径.方法 通过预先埋管方式,向动物侧脑室内分别注射Flk-1、ERK和PI3-K的对应抑制剂SU5416、PD98059和Wortmannin,采用免疫组织荧光染色技术检测海马齿状回内新生细胞数量.结果 Wortmannin和SU5416的使用可导致大鼠海马齿状回内新生细胞和新生神经元数量明显减少(P<0.05),PD98059的使用则没有导致大鼠海马齿状回内新生细胞和新生神经元数量明显减少(P>0.05).结论 VEGF可能通过受体Flk-1主要激活PI3-K所在的信号通路诱导海马的神经发生.
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大鼠脑缺血再灌注后海马组织PI3-K信号通路的变化
目的 探讨脑缺血再灌注(I/R)损伤后海马组织PI3-K信号通路的变化情况.方法 线栓法制备脑I/R大鼠模型,采用Western印迹法检测大鼠海马组织PI3-K的表达.结果 与正常对照组比较,脑缺血1 h再灌注12、24、72 h各组,海马组织PI3-K的表达均明显增加,且在12～72 h之间PI3-K表达有逐渐增加的趋势.结论 PI3-K信号通路参与了脑I/R引起的海马神经元损伤的病理过程.
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大脑皮层细胞低氧条件液诱导神经干细胞分化及其可能的信号转导通路
本研究旨在分析大鼠大脑皮层细胞低氧条件液对神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化的影响,并探讨PI3-K和JNK两条信号通路在此过程中的作用.原代培养出生后24 h内SD大鼠大脑皮层细胞5d后,全量换液并分别在4％ O2、1％ O2和常氧浓度环境下继续培养细胞6h以制备低氧条件液和常氧条件液.用三种条件液及结合使用PI3-K、JNK信号通路抑制剂LY294002和SP600125培养NSCs,使用免疫荧光双标法鉴定NSCs后代细胞表型,并计算每种表型细胞在后代细胞中所占比例,以分析不同条件下NSCs的分化情况.结果显示,在三种条件液培养下NSCs分化出神经元的比例均高于星形胶质细胞的比例;与常氧条件液组比较,4％低氧条件液促进了NSCs向神经元方向分化(P＜0.01),而1％低氧条件液则抑制了NSCs向神经元方向分化(P＜ 0.01).在4％低氧条件液中使用LY294002和SP600125均抑制了NSCs向神经元方向分化(P＜0.01),且LY294002抑制作用较SP600125大(P＜0.01).以上结果提示,4％低氧条件液能促进大脑皮层NSCs向神经元方向分化,且PI3-K信号通路在此过程中发挥主要作用.
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壮骨镇痛胶囊对裸鼠乳腺癌移植瘤细胞磷脂酰肌醇3-激酶的影响
目的：探讨壮骨镇痛胶囊对裸鼠乳腺癌转移瘤细胞磷脂酰肌醇3-激酶的作用。方法32只裸鼠随机等分为壮骨镇痛胶囊预防组、壮骨镇痛胶囊治疗组、参一胶囊阳性药物对照组和模型组，每组8只，接种乳腺癌细胞MDA-MB-231制备移植瘤，药物干预后，采用免疫组织化学染色法检测各组裸鼠移植瘤细胞磷脂酰肌醇3-激酶( PI3-K)的表达水平。结果与模型组比较，各药物组瘤重均显著减轻(均P<0.05)，且预防组瘤重显著低于治疗组和参一胶囊阳性对照组(均P<0.05)；各药物组PI3-K表达水平均显著低于模型组(均P<0.05)，并且预防组PI3-K表达水平显著低于参一胶囊阳性对照组和壮骨镇痛胶囊治疗组(均P<0.05)。结论壮骨镇痛胶囊能够抑制裸鼠乳腺癌移植瘤的生长，其作用可能与抑制磷脂酰肌醇3-激酶表达水平相关，预防组较治疗组疗效更佳。
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七氟烷激活PI3-K/Akt/p70S6K信号转导通路抑制缺血/再灌注损伤神经元的凋亡
目的 研究七氟烷对神经元缺血/再灌注损伤后PI3-K/Akt/P70S6K信号转导通路的影响,探讨七氟烷脑保护机制.方法 将96孔和6孔培养板上培养7d的海马神经元随机分为6组:正常培养组(C组)、缺血/再灌注组(L/R组)、缺血/再灌注+2%Sevoflurane组(Sevo组)、缺血/再灌注+2%Sevoflurane+10μmol·L-1 LY294002(PI3-K拮抗剂)组(LY组)、缺血/再灌注+2%Sevoflurane+10 μmol·L-1Triciribin(Akt拮抗剂)组(Tri组)、缺血/再灌注+2%Sevoflurane+10 nmol·L-1 Rapamycin(P70S6K拮抗剂)组(Rap组).C组神经元按正常培养方法培养.Sevo组在神经元缺糖缺氧的同时接受2%Sevoflurane麻醉.LY组、Tri组和Rap组在神经元进行缺糖同时分别加入LY294002、Triciribin或Rapamycin使其终浓度分别为10μmol·L-1、10μmol·L-1或10 nmol·L-1后同Sevo组处理.96孔培养板的神经元进行细胞存活力的检测.6孔培养板的神经元进行神经元纯度鉴定、神经元凋亡和PI3-K、Akt和p70S6K蛋白表达的检测.结果 Sevo组PI3K、Akt、P70S6K蛋白表达增加,神经元存活率增加、神经元凋亡率降低(vsI/R组,P＜0.01).LY组PI3K、Akt和p70S6K表达降低,神经元存活率降低、神经元凋亡率增加(vs Sevo组,P＜0.05或P＜0.01);Tri组Akt和P70S6K表达降低,神经元存活率降低、神经元凋亡率增加(vsSevo组,P＜0.05或P＜0.01);Rap组P70S6K表达降低,神经元存活率降低、神经元凋亡率增加(vs Sevo组,P＜0.01).结论 Sevoflurane激活了PI3-K/Akt/P70S6K信号通路,在海马神经元缺血/再灌注损伤过程中抑制了神经元凋亡,保护了神经元.
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PI3-K及NF-κB在胃腺癌及癌旁正常组织中的表达及相关性
目的 分析胃腺癌及癌旁正常组织中PI3-K和NF-κB的蛋白表达,探讨两者在胃腺癌发生发展中的作用和相互关系.方法 应用免疫组化方法检测20例胃腺癌及其癌旁正常组织中PI3-K和NF-κB蛋白的表达水平,比较在不同组织中PI3-K和NF-κB的阳性表达率及表达强度.结果 PI3-K蛋白及NF-κB蛋白在胃腺癌中阳性表达率分别为100.0%、95.0%,均明显高于癌旁正常组织中的阳性表达率(40.0%、20.0%)(均P<0.01);且胃腺癌中PI3-K与NF-κB蛋白表达强度均高于癌旁正常组织(均P<0.01).胃腺癌中PI3-K与NF-κB蛋白表达成明显正相关(r=0.584,P<0.01).结论 胃腺癌组织中PI3-K和NF-κB蛋白表达明显上调,且二者成正相关,PI3-K和NF-κB可能协同促进胃腺癌的发生发展.
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红景天苷对大鼠脑缺血-再灌注损伤后PI3-K、p-Akt及Caspase-3表达的影响
目的:观察红景天苷对大鼠脑缺血-再灌注损伤后PI3-K、p-Akt及Caspase-3表达的影响.方法:将60只SD雄性大鼠随机分为假手术组12只、脑缺血-再灌注组(模型组)及红景天苷组(10 mg/kg)各24只.采用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉缺血-再灌注模型,观察缺血2h再灌注6h、12 h、24h、48 h4个不同时间点,采用Western Blotting法检测PI3-K、p-Akt及Caspase-3的蛋白表达.结果:与假手术组比较,模型组及红景天苷组4个不同时间点PI3-K、p-Akt、Caspase-3蛋白表达量均显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.01).与模型组比较,红景天苷组4个不同时间点PI3-K、p-Akt蛋白表达量均升高,Caspase-3蛋白表达量均减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).模型组及红景天苷组PI3-K、p-AKT蛋白表达趋势均从再灌注6h开始逐渐升高,24h达高峰,48h较24h下降,但高于12h;Caspase-3蛋白表达趋势均从再灌注6h开始逐渐升高,48h达高峰.结论:红景天苷可能通过激活PI3-K/Akt信号转导通路,上调PI3-K、p-Akt的蛋白表达,抑制Caspase-3的蛋白表达,从而发挥对大鼠脑缺血-再灌注损伤抗凋亡的神经保护作用.
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RTK与结肠肿瘤研究进展
RTK即受体酪氨酸激酶,是一类小分子跨膜蛋白质.其结构共同点是均有一个保守的激酶位点.RTK与其配体结合后,使激酶位点磷酸化,激活一系列下游信号途径.在结肠肿瘤中有多种RTK的异常表达,且与肿瘤的恶性程度相关.利用基因治疗或者RTK的抑制剂,可以延缓结肠肿瘤的发展.
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PI3-K-AKT信号转导途径与凋亡的关系
PI3-K(phosphatidylinositol 3-kinase,磷脂酰肌醇3-激酶)-AKT(v-akt murine thymoma viral oncogene homolog)信号转导途径是细胞内重要的信号转导通路,在细胞的凋亡、存活、增殖以及细胞骨架的变化等活动中发挥重要的生物学功能,其中尤为重要的是它对细胞凋亡、存活的调节作用.细胞凋亡是一个瀑布式的基因表达结果,在其发生与调控过程中有许多基因产物的参与,PI3-K-AKT信号转导途径通过对这些凋亡相关基因的调节作用在凋亡的发生与调控过程中发挥重要的生物学功能.
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老年胰岛素抵抗小鼠骨骼肌细胞磷脂酰肌醇-3激酶的表达
目的了解老年胰岛素抵抗小鼠胰岛素刺激的骨骼肌细胞磷脂酰肌醇-3激酶(PI3-K)表达和活性变化.方法18月龄雌性C57BL/SJ老年小鼠20只,随机平均分成两组:A组予喂养普通膳食,B组予喂养高脂肪膳食(58%脂肪,21%蛋白,21%碳水化合物),同时设立青年组(Y组).16周后提取各组小鼠完整的骨骼肌束,放于胰岛素浓度为10-7的缓冲液中孵育15 min.用Western blot方法检测各组大鼠骨骼肌细胞PI3-Kp85 α蛋白水平,免疫沉淀、激酶测定方法检测PI3-K活性.结果A组小鼠胰岛素刺激的PI3-K活化水平较Y组明显下降(P＜0.05),B组小鼠骨骼肌细胞PI3-Kp85α蛋白及PI3-K活化水平均较A组明显降低(P＜0.05).结论老龄及老年胰岛素抵抗与胰岛素信号传导中的PI3-K下调有关.
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脱氟烷诱导神经元HO-1mRNA表达信号通路的研究
目的 研究脱氟烷(desflurane)诱导氧糖剥夺损伤神经元血红素氧合酶-1表达的信号转导通路,探讨脱氟烷脑保护机制.方法 将96孔和6孔培养板上培养7d的大鼠海马神经元随机分为6组(n=12):正常培养组(C组),神经元按正常培养方法培养;氧糖剥夺组(I/R组),神经元缺糖缺氧后复糖复氧处理;氧糖剥夺+6% desflurane组(Des组),神经元缺糖缺氧的同时接受6% desflurane麻醉;氧糖剥夺+6% desflurane+10μmol/L tin-protoporphyrin (HO-1抑制剂)组(Tin组)、氧糖剥夺+6% desflurane+10μmol/L LY 294002 (PI3-K抑制剂)组(LY组)、氧糖剥夺+6% desflurane+10μmol/L Triciribin (Akt抑制剂)组(Tri组)神经元进行缺糖同时分别加入tin-protoporphyrin、 LY 294002或Triciribin使其终浓度均为10μmol/L后同D组处理.96孔培养板的神经元进行细胞存活率的检测.6孔培养板的神经元进行神经元纯度鉴定、神经元凋亡、HO-1mRNA表达、PI3-K和Akt蛋白表达的检测.结果 Des组PI3K和Akt蛋白表达增加,HO-1mRNA表达增加,神经元存活率增加、凋亡率降低(vs I/R组,P<0.01).Tin组PI3K和Akt蛋白表达变化不明显(vs Des组,P0.05), HO-1mRNA表达降低,神经元存活率降低、凋亡率增加 (vs Des组,P<0.01). LY组PI3K和Akt表达降低,HO-1mRNA表达降低,神经元存活率降低、凋亡率增加(vs Des组,P<0.05或P<0.01). Tri组PI3K表达变化不明显(vs Des组,P0.05), Akt表达降低,HO-1mRNA表达降低,神经元存活率降低、凋亡率增加(vs Des组,P<0.05或P<0.01).结论 Desflurane通过PI3-K/Akt信号转导通路诱导大鼠海马神经元HO-1表达,保护了神经元.
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不同乳腺疾病中ERK、PI3-K mRNA的表达
目的:检测正常乳腺组织、良性增生、非典型增生和乳腺癌中ERK、PI3-KmRNA的表达,探讨其在乳腺癌发生、发展中的作用及关系.方法:应用RT-PCR方法检测ERK、PI3-K mRNA在正常乳腺组织及不同乳腺疾病中的表达.结果:ERK2和PI3-K mRNA在乳腺癌组织中表达明显高于其他乳腺组织,分别为100%(37/37)和94.59%(35/37).ERK2 mRNA在乳腺癌、非典型增生、良性增生和正常组织的表达强度依次减弱;PI3-K mRNA表达在乳腺癌中明显增高,而在非典型增生和良性增生和正常组织中的表达无明显差别.结论:MAPK/ERK途径参与乳腺癌发生的信号转导,而PI3-K途径参与乳腺癌后期进展阶段的信号转导.
