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抑瘤基因NGX6对人结肠癌细胞HT-29生长的影响
目的:NGX6是新克隆的侯选抑瘤基因,其在结肠癌组织中表达明显下调,提示NGX6的差异表达与结肠癌发生有关.本文通过研究NGX6对人结肠癌细胞HT-29生物学特性的影响以明确NGX6在结肠癌发生发展中的作用.方法:脂质体介导pcDNA3.1(+)/NGX6重组体转染低表达NGX6的人结肠癌细胞HT-29,Dot blot及RT-PCR方法检测外源性NGX6基因的表达,借助生长曲线、MTT、软琼脂集落形成、流式细胞仪、裸鼠成瘤实验对NGX6转染前后人结肠癌细胞HT-29的生物学行为进行检测.结果:pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组细胞生长速度比pcDNA3.1(+)/HT-29和HT-29组明显减慢(P＜0.05),其倍曾时间为345 h比pcDNA3.1(+)/HT-29(27.1 h)和HT-29(23.0 h)延长;pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组软琼脂集落形成率较对照组明显下降(P＜0.05);流式细胞仪检测NGX6高表达能延缓HT-29细胞周期由G0/G1期→S期的进程;裸鼠成瘤实验表明pcDNA3.1(+)/NGX6/HT-29组成瘤受抑.结论:NGX6的重表达可逆转人结肠癌细胞HT-29的恶性表型;NGX6是极具前途的结肠癌相关抑瘤基因侯选者.
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LTF基因在鼻咽癌细胞系中生物学功能的初步研究
目的:初步探讨野生型LTF基因在鼻咽癌细胞系中的生物学功能.方法:野生型LTF导入鼻咽癌细胞系,G418筛选,RT-PCR和Western-blotting分别在mRNA和蛋白质水平进行验证,得到稳定表达LTF基因的鼻咽癌细胞系.流式细胞术、平板克隆形成实验和MTT法分别检测细胞周期、细胞的克隆形成能力和细胞生长曲线.结果:成功导入LTF并稳定表达的鼻咽癌细胞系,G0-G1期细胞百分比例明显增加(72.01％ vs 62.31％),G2-M期细胞百分比例减少(6.26％vs 10.81％);克隆形成能力降低(39.5％ vs 59.7％),体外瘤细胞增殖能力降低(P＜0.05).结论:LTF基因可阻滞细胞周期、抑制鼻咽癌细胞系的增殖能力和克隆形成率,同时为进一步的体内试验研究奠定基础.
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Bif-1在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义
目的:探讨肾透明细胞癌组织中Bif-1的表达及意义.方法:通过实时定量PCR和免疫组织化学方法分别检测Bif-1在肾癌及对应癌旁组织中mRNA和蛋白的表达情况,并分析Bif-1的mRNA和蛋白与临床病理资料的关系.结果:肾癌组织中Bif-1阳性表达率明显低于癌旁组织(P＜0.05).Bif-1的mRNA和蛋白在肾癌的TNM分期和临床分期组间比较,差异有统计学意义(P＜0.05);在不同年龄、性别组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:肾癌组织中存在Bif-1表达下降,可能与肾癌的发生有着密切关系,且对肾癌的恶性生物学行为有重要影响.
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APEH基因在肾透明细胞癌中的表达研究
目的 研究APEH基因在肾透明细胞癌中的表达,以探索其意义.方法 应用半定量RT-PCR、实时定量PCR、免疫组化(IPH)检测30例配对肾透明细胞癌组织/癌旁正常肾组织标本中APEH基因mRNA和蛋白的表达,并对其中16例配对标本进行Western blot蛋白检测,予以统计分析.结果 相较正常对照组,RT-PCR 、实时定量PCR 及IPH均显示肾细胞癌组织中APEH基因表达下调,其比例分别达到60.0%(18/30)、73.3%(22/30)和80.0%(24/30),另外,Western blot示62.5%(10/16)的癌组织标本APEH蛋白表达下调.4种方法检验P值均<0.05,差异有统计学意义,且针对同一批配对标本各检测方法结果之间一致性显著.结论 APEH可能为一新的肾透明细胞癌分子标志物.
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肿瘤相关基因NAG6在胃癌中的表达和限制性片段长度多态性分析
目的检测NAG6基因在胃癌及癌旁组织中的表达,探讨此基因在胃癌发生、发展中的作用以及它在胃癌中的基因结构变化.方法采用RT-PCR,Northern杂交,点杂交方法检测42例胃癌和癌旁组织中NAG6的表达;RFLP分析检测该基因在胃癌中是否存在基因结构的改变.结果 59.5%(25/42)的胃癌组织中NAG6基因表达缺失,NAG6在胃癌组织中的表达较癌旁组织显著下调(P<0.005),但NAG6表达下调与胃癌组织类型、淋巴结或远处转移无明显关系(P＞0.05).点杂交证实NAG6在胃癌组织中表达下调.RFLP分析发现NAG6在7例胃癌及癌旁组织中的基因型为11.5Kb/5.0Kb,在3例癌组织中发现5.0Kb这条等位基因片段的杂合性丢失.结论 NAG6基因在胃癌组织中表达显著下调,该基因的表达下调可能在胃癌的发生和发展过程起到一定的作用,但是与胃癌的转移无明显关系.而遗传物质的丢失可能与该基因表达下调有关.提示NAG6基因可能为定位于7q31-32的与胃癌相关的侯选抑瘤基因.
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p53与鼻咽癌关系的研究进展
p53基因是重要的抑瘤基因, 是细胞增牛的主要负调控子,它通过调控细胞周期和启动细胞凋亡维持细胞的正常功能.虽然p53基因突变在鼻咽癌叶中属于少发事件,但大部分鼻咽癌中都可检测到P53蛋白过表达且功能失活,EB病毒编码蛋白BZLFl, delta N-p63 可能与P53蛋白聚集失活有关.
关键词： 鼻咽癌 p53基因 抑瘤基因 EB病毒 delta N-p63 -
鼻咽癌中与已知基因同源的差异表达cDNA序列
采用新近发展的cDNA代表性差异分析法筛选鼻咽癌中不表达的或表达降低的cDNA序列.结果显示:有9个与已知基因高度同源的cDNA序列.通过对这些已知基因的结构和功能分析,发现有与细胞骨架成分相关的基因:α-actinin,ezrin和细胞角蛋白13;直接与瘤基因和抑瘤基因相互作用的基因:鲨烯合成酶和TRIP-1基因;直接参与DNA合成以及调控基因转录和翻译的基因:TAFⅡ68和组蛋白H10;另外还有人类补体因子B及类转运RNA合成酶的基因.这些基因大多具有相当于抑瘤基因的功能.从而进一步说明鼻咽癌的发生是多基因相互作用的结果.
关键词： 鼻咽肿瘤 癌 cDNA代表性差异分析法* 抑瘤基因 -
TSC-22基因的研究进展
转化生长因子β诱导基因22(transforming growth factor β-inducible gene 22,TSC-22)是一个候选的负性生长调控和肿瘤抑制基因.能与其他转录因子相结合,参与细胞生长、凋亡等重要生命活动调控,在多种肿瘤中低表达,可能与多种肿瘤的发生、发展有关.
关键词： 转化生长因子β诱导基因22 亮氨酸拉链 转录因子 抑瘤基因 -
鼻咽癌组织中GNAT1基因的表达、杂合性丢失及甲基化分析
背景与目的:在鼻咽癌中,染色体3p21.3为高频缺失区,杂合性丢失(loSS of heterozygosity,LOH)分析和功能学研究都表明3p21.3区存在与鼻咽癌相关的抑瘤基因.GNAT1基因也定位于3p21.3,但在鼻咽癌中未见关于GNAT1基因的研究报道.本研究旨在探讨GNAT1基因在鼻咽癌组织中的表达、LOH及甲基化情况.方法:应用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测了33例鼻咽癌组织和15例慢性鼻咽炎组织中GNAT1基因的表达,并通过微卫星分析技术和甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation-specific polymerase chain reaction,MSP)分析GNAT1基因LOH和启动子区甲基化情况.结果:GNAT1基因在慢性鼻咽炎组织中均稳定表达,而在72.7%(24/33)的鼻咽癌组织中表达下调或缺失,显著低于慢性鼻咽炎组织(100%,15/15)(P=0.022);LOH分析显示鼻咽癌组织中GNAT1基因的杂合性丢失率为15%(3/20),且LOH与基因表达存在相关性(P=0.016);甲基化分析发现在100%的鼻咽癌组织和80%慢性鼻咽炎组织中存在GNAT1基因启动子区高甲基化.结论:GNAT1基因在鼻咽癌组织中表达下调或缺失,这一现象与GNAT1基因的LOH存在相关性,而与3p21.3区基因启动子区CpG岛的甲基化可能无关.GNAT1基因的甲基化可能不是鼻咽癌的发病机制.
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SEMA3B、SEMA3F基因在鼻咽癌细胞中突变和表达的研究
背景与目的:鼻咽癌 ( nasopharyngeal carcinoma,NPC) 致病的分子机理至今仍不清楚 , 但高频的杂合性缺失和功能学证据均表明染色体 3p21.3区段中存在着与鼻咽癌相关的抑癌基因 . SEMA3B和 SEMA3F基因是定位于 3p21.3的两个 semaphorin家族成员 , 近被鉴定为抑癌基因 . 本研究通过对 SEMA3B和 SEMA3F基因在鼻咽癌中的突变和表达检测 , 探讨 SEMA3B和 SEMA3F基因与鼻咽癌发病的关系 . 方法:采用 PCR-直接测序方法 , 在 21例散发性 NPC组织和 2例 NPC细胞株 ( CNE2,SUNE1) 中对 SEMA3B和 SEMA3F基因的编码区、拼接位点和部分调控区进行突变检测 ; 利用半定量 RT-PCR方法 , 检测 SEMA3B和 SEMA3F基因在鼻咽癌中的表达。结果：在鼻咽癌中未发现SEMA3B或SEMA3F基因具有体细胞突变，但在SEMA3B基因中发现两个导致氨基酸改变的单核苷酸多态性Thr415Ile和Ile242Met。在Thr415Ile多态位点中，可导致SEMA3B基因功能缺陷的Ile等位基因频率在鼻咽癌患者中占有较高比例（64％，27/42）。SEMA3BmRNA在6例鼻咽非癌组织中正常表达，但在76％（16/21）的鼻咽癌组织中表达下调或缺失；SEMA3FmRNA的表达水平在鼻咽癌和非癌组织中无明显差异。结论：SEMA3BmRNA在鼻咽癌中发生高频表达缺失说明该基因失活与鼻咽癌密切相关，SEMA3B基因可能是定位于染色体3p21.3区域的与鼻咽癌发生相关的抑癌基因。
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应用混合探针文库筛选法克隆多个肿瘤差异表达基因
目的:进一步分离在鼻咽癌组织中表达下调/缺失的候选抑瘤基因.方法:采用PCR方法对有差异表达的cDNA序列(AF152605和AF091517)进行探针标记,Northern杂交确定其mRNA转录本大小,进而混合两种PCR探针对骨骼肌cDNA文库进行筛选,阳性克隆经PCR鉴定后直接测序.结果:克隆了转录本为2.2Kb、1.1Kb和1.4Kb三个基因,GenBank登录号分别为AF179285、AF170307和AF194971.结论:混合探针文库筛选法是同时、快速获得多个cDNA片段其全长序列的可借鉴实验手段.
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LRRC4基因表达能降低胶质母细胞瘤细胞系U251的生长和成瘤潜能
背景与目的:LRRC4是作者近克隆的一个新基因,该基因在原发性脑肿瘤活检标本中明显表达下调.本研究旨在研究LRRC4基因是否具有抑制脑肿瘤生长的能力.方法:LRRC4基因的全长编码区被亚克隆至表达载体pcDNA3.1中,应用脂质体转染的方法将重组的质粒载体导入胶质母细胞瘤细胞系U251,经G41 8筛选,建立稳定表达LRRC4基因的U251的细胞系.采用细胞增殖实验、软琼脂实验、肿瘤形成实验来考察LRRC4基因表达对于细胞生长和肿瘤形成的影响.结果:经过脂质体转染和筛选,建立了稳定表达LRRC4全长编码区的U251细胞系,用于进一步实验.比较未转染组和转染空白载体组,Northern blot实验证实转染了LBRC4基因的细胞LRRC4 mRNA的表达增强.细胞增殖一定时间后,转染LRRC4基因的细胞较未转染细胞的生长速度明显减慢,克隆形成率明显降低.将这些细胞注射入无胸腺裸鼠体内,40天后处死裸鼠,测量肿瘤大小,结果显示,转染LRRC4基因的细胞形成的肿瘤明显小于对照组.结论:LRRC4基因可转染于人脑胶质母细胞瘤细胞系U251.LRRC4在U251细胞的表达有抑制瘤细胞增殖和抑制裸鼠移植瘤的形成和生长的作用.
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HLCDG1基因转染对肺癌细胞生长的影响
背景与目的: HLCDG1基因是我们实验室近克隆的新基因,它位于 5q33,介于 D5S436～D5S470之间,在肺癌组织中明显表达下调或缺失.本研究旨在观察 HLCDG1基因是否具有抑制肺癌细胞生长的能力.方法:构建 HLCDG1基因的重组质粒 pcDNA3.1(+ )/HLCDG1,通过脂质体转染,将 HLCDG1基因 cDNA导入肺癌细胞系 A549中,经 G418筛选,获得稳定表达的细胞克隆.RT-PCR检测 HLCDG1基因表达,并采用细胞生长抑制实验、软琼脂集落形成实验及裸鼠致瘤性实验,分析 HLCDG1基因转染细胞恶性表型.结果: RT-PCR结果表明转染 HLCDG1 基因的细胞 HLCDG1 mRNA明显表达.转染 HLCDG1基因组、转染空载体组和未转染组, 3组细胞生长倍增时间分别为 70.0 h、 43.3 h和 39.5 h,转染 HLCDG1基因组与两对照组之间的差异有显著性 (P<0.05).计算软琼脂中细胞克隆形成率,结果分别为 8.5%、 29.0%和 35.0%,转染 HLCDG1基因的细胞克隆形成率明显降低.将转染 HLCDG1基因的细胞、转染空载体的细胞和未转染的细胞分别注射入无胸腺的裸鼠体内, 43天后处死动物,剥离出肿瘤组织并称重,各组瘤块平均重量分别为 0.120 g、 0.612 g和 0.924 g,转染 HLCDG1基因的细胞成瘤能力与两对照组细胞比较,差异有显著性 (P<0.05).结论: HLCDG1在肺癌 A549细胞中表达,具有抑制细胞增殖和抑制裸鼠移植瘤形成的作用; HLCDG1可能是一个与肺癌相关的候选抑瘤基因.
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BRD7基因转染对鼻咽癌细胞生长的抑制作用
目的：探讨鼻咽癌负相关基因 BRD7对鼻咽癌细胞系 HNE1生长的影响。方法：构建 BRD7基因真核表达载体 pcDNA3.1(＋ )/BRD7重组体，采用脂质体介导转染技术，将 BRD7真核表达重组质粒和空载体质粒分别导入鼻咽癌细胞系 HNE1， Southern杂交和 RT PCR分别检测外源性 DNA的整合和 BRD7基因的表达，并借助细胞生长曲线、软琼脂集落形成试验、流式细胞计数和裸鼠接种方法对转染细胞的生物学行为进行了检测。结果：转染 BRD7基因的 HNE1生长倍增时间为 53 h，较 HNE1（ 23.9 h）和空载体转染 HNE1（ 24.1 h）明显延长，流式细胞仪表明， BRD7表达升高延缓细胞由 G0～ G1期进入 S期， BRD7转染 HNE1在软琼脂中集落形成率较对照组显著下降（ P< 0.01），裸鼠接种试验显示 BRD7基因转染细胞 HNE1生长速度受到抑制。结论： BRD7基因重表达有助于 HNE1的恶性表型的逆转； BRD7是一个鼻咽癌相关的抑瘤基因良好的候选者。
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染色体7q32-ter小共同缺失区鼻咽癌抑瘤基因候选者的筛选
目的:在明确7q32-ter区域等位基因杂合性丢失小共同缺失区位于以D7S509为中心的D7S500-D7S509-D7S495的基础上,筛选和克隆位于该区内鼻咽癌相关的候选抑瘤基因.方法:应用定位-候选克隆策略筛选位于该小共同缺失区的3'末端ESTs(expressed sequence tags,ESTs),RT-PCR和Northern杂交筛选出在鼻咽癌细胞株和活检组织中表达下调的ESTs,采用cDNA克隆测序和生物信息学资源获取候选EST的全长cDNA.Southern杂交和甲基化分析研究候选基因表达下调的机制.结果:筛选D7S500 D7S495区域内的12个代表新基因的3'末端ESTs序列,发现一个EST(AI290024)在鼻咽癌细胞株及50%(6/12)的鼻咽癌活检组织中表达下调,Multiple Tissue Northern(MTNTM)Blot杂交结果显示该EST在心、肝、肾等多种组织中存在大小2.0kb的转录本.通过测定包含该EST的cDNA克隆,获得该新基因(命名为NAG-22基因)2.3kb转录本的全长cDNA(GenBank登录号:AF247820),编码77AA,含有disintegrin的结构域.NAG22在NPC中表达下调的机制不是高甲基化和基因拷贝数的丢失.结论:NAG22是定位于7q32-ter小共同缺失区的一个与鼻咽癌相关的抑瘤基因候选者.
关键词： 鼻咽肿瘤 7q32-ter最小共同缺失区 抑瘤基因 -
精细定位和克隆9p21-22区域内鼻咽癌候选抑瘤基因
目的:进一步精细限定鼻咽癌9p21-22区域等位基因杂合性丢失的频率和范围,筛选和克隆其共同缺失区内鼻咽癌相关的候选抑瘤基因.方法:应用11个定位于9p21-22区域的高密度微卫星位点,检测25例低分化鼻咽癌患者的杂合性丢失,确定其共同缺失区;用RT PCR和Northern筛出在鼻咽癌细胞株HNE1和鼻咽癌活检组织中表达下调的、定位于共同缺失区内的3'末端ESTs(ExpressSequenceTags);采用RACE技术和生物信息学资源克隆出候选EST的全长cDNA.结果:25例患者中有17例(68%)存在一个或多个位点的杂合性丢失,其中D9S161(35.0%,7/20),D9S1678(31.5%,6/19),D9S263(33.3%,6/18)和D9S1853(33.3%,7/21)四个紧邻位点的丢失频率相对较高,并发现六位患者在该四个位点表现为连续性缺失;筛选D9S161～D9S1853区域内25个代表新基因的3'末端ESTs序列,发现一个EST(dbEST:208825)在鼻咽癌细胞株HNE1及73%(11/15)的活检组织中表达降低,MultipleTissueNorthern(MTNTM)Blots杂交结果显示该EST在心、脑组织中存在大小约2.4kb和3.5kb的两个转录本.通过测定包含该EST的cDNA克隆,获得该新基因(命名为NAG 6基因)2.4kb转录本的全长cDNA(GenBank登录号:AF149298).结论:鼻咽癌染色体9p21-22区域D9S161 D9S1853位点之间(2.7cM)是鼻咽癌患者的一个较小共同缺失区,定位于该区域内的新基因NAG 6可能是一个与鼻咽癌相关的候选抑瘤基因.
关键词： 鼻咽癌 染色体9p21-22 杂合性丢失 抑瘤基因 克隆 -
比较基因组杂交研究鼻咽癌遗传变异
目的了解鼻咽癌遗传学改变的特征.方法应用比较基因组杂交检测20例鼻咽癌基因组的不平衡即DNA的丢失或扩增.结果鼻咽癌常见的扩增的染色体是1q、2、3q、7q、8q、12;常见的缺失的染色体为3p、9p、11q、16q.结论鼻咽癌细胞中存在多条染色体拷贝数的改变,由此引起相应瘤基因的扩增和抑癌基因的丢失可能参与了鼻咽癌的发生、发展.
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染色体3p21.3缺失区域11个相关基因在非小细胞肺癌中的表达
背景与目的 50%-80%的非小细胞肺癌存在染色体短臂3p21.3上等位基因的丢失,提示可能存在多个潜在的抑瘤基因.本研究通过大规模筛选3p21.3区相关基因在肺癌中的表达,以期找到数个肺癌相关抑瘤基因.方法 应用生物信息学方法,选择出11个位于该区与肿瘤密切相关的基因,RT-PCR检测16例非小细胞肺癌及配对组织标本中11个基因的表达,并进行相关统计分析.结果 在11个基因中,5个基因[RASSFIA 43.8%(7/16),GNAT137.5%(6/16),SEMA3B 62.5%(10/16),SEMA3F 50%(8/16),Blu 56.3%(9/16)]在非小细胞肺癌组织中表达下调或缺失(P<0.05);其余6个基因ZNF35、NPRL2、LTF、AXUDI、BAP1和FUSI的表达,在非小细胞肺癌及配对组织标本的表达无统计学差异.结论 肺癌组织中3p21.3区有多个基因参与了肺癌的发生发展.
